饲料中DHA与EPA比例对星斑川鲽雌鱼性类固醇激素及繁育性能的影响

为了探索饲料中DHA与EPA比例对星斑川鲽(Platichthys stellatus)雌性亲鱼繁育性能的影响,配制等氮等脂含不同DHA与EPA比例(0.65、1.33、2.12、3.08和3.92)饲料5组,每组设3重复,室内循环水系统养殖,试验周期90 d,试验结束后取亲鱼血清及性腺检测。结果表明,随着饲料DHA与EPA比值的升高,亲鱼雌二醇(E 2)呈先升后降趋势,DHA与EPA比值为1.33时,促进作用显著(P<0.05)。性腺中FSHR、StAR和芳香化酶表达量也显著高于对照组(P<0.05);添加DHA和EPA后亲鱼的绝对繁殖力显著提高,但DHA与EPA比值为1.33效果更显著(P<0.05);在DHA与EPA比值为0.65、1.33组和2.12时,雌鱼性腺中单不饱和脂肪酸的含量显著高于其他组(P<0.05),n-6多不饱和脂肪酸出现显著下降(P<0.05),n-3多不饱和脂肪酸明显上升,差异显著(P<0.05)。由此可见,饲料中添加DHA和EPA能有效促进星斑川鲽雌性亲鱼的性腺发育,DHA与EPA比值为1.33时能提高亲鱼E 2分泌,FSHR、StAR和芳香化酶表达以及单不饱和脂肪酸的吸收,增加性腺发育能量供给,促进亲鱼性腺成熟,提高繁育性能。

性类固醇激素在近江牡蛎性腺发育周期的分布特征

性类固醇激素在脊椎动物的性别分化、生长发育、生殖代谢等过程中发挥着重要的生理作用,但是目前对软体动物性类固醇激素的了解还十分有限。本研究结合组织学方法根据性腺发育状态将近江牡蛎性腺划分为三个组别,即前期(Ⅰ期)、中期(Ⅱ期)和后期(Ⅲ期),并利用酶联免疫吸附测定(ELISA)分析了孕酮、睾酮、雌二醇三种重要的性类固醇激素在性腺三个时期的变化特征。结果表明:性腺中孕酮、睾酮和雌二醇含量范围分别是22.2~346.6 pg·g^(-1)、1.9~28.7 pg·g^(-1)和23.2~258.1 pg·g^(-1);且平均含量雌二醇>孕酮>睾酮,分别为所测激素总含量的57%、40%和3%。近江牡蛎卵巢中孕酮含量在Ⅰ期和Ⅲ期显著高于精巢,精巢中睾酮含量在Ⅰ期显著高于卵巢,卵巢中雌二醇含量在Ⅱ期和Ⅲ期显著高于精巢。三种激素含量的变化在雌雄间和不同发育阶段都具有明显差异,表明性类固醇激素在近江牡蛎性别分化以及性腺发育过程中发挥了重要作用。该研究结果丰富了性类固醇激素在双壳贝类中的研究资料,可为制定近江牡蛎苗种繁育策略提供参考。

斜带石斑鱼雌鱼卵巢发育与血清性类固醇激素的生殖周期变化

斜带石斑鱼Epinepheluscoioides卵母细胞发育可分为6个时相,以卵母细胞在卵巢中组成的差异可以把卵巢发育划分为相应6个时期。测定了成熟雌鱼血清中雌二醇和睾酮含量的生殖周期变化,在生殖季节成熟雌鱼血清中雌二醇和睾酮含量最高。生殖季节成熟雌鱼的平均性腺成熟系数GSI显著高于其它月份,并且血清性类固醇激素水平的季节变化与性腺成熟系数的变化基本一致,都是在生殖季节达到最高峰。

养殖圆斑星鲽血浆性类固醇激素表达与卵巢发育及温光调控的关系

系统研究了人工养殖条件下圆斑星鲽(Verasper variegatus)亲鱼血浆性类固醇激素的年周期变化规律及其与卵巢发育成熟及温光调控的关系。结果表明,圆斑星鲽卵巢发育属非同步分批发育模式,一年一次成熟分批产卵类型。卵巢年周期发育过程中可见5个发育时相的卵母细胞,卵巢发育可化分为4个成熟阶段,6个发育时期。性腺指数(GSI)、肝脏指数(HSI)和肥满度(CF)在亲鱼的年周期发育中呈现规律性的变化。亲鱼血浆中雌二醇(E2)在产卵期达峰值;排卵结束后,E2表达水平降至较低水平。血浆中睾酮(T)含量在10月达峰值,并在产卵期间保持相对较高表达水平。统计分析表明,血浆E2水平与GSI和HSI值的变化都呈现显著的正相关关系(P<0.05)。水温和光周期对卵巢发育具有明显的影响并显著影响E2的表达,GSI与水温存在显著的负相关关系(P<0.05),HSI与水温存在显著的负相关关系(P<0.05),而CF与光周期呈现显著的负相关关系(P<0.05)。结论认为,圆斑星鲽雌性亲鱼血浆性类固醇激素表达水平变化与性腺发育(卵母细胞成熟)、水温等具有显著的相关关系。本研究结果可作为温光调控人工亲鱼性腺发育成熟、激素诱导亲鱼产卵的重要参考技术依据。

半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)血浆性类固醇激素表达与卵巢发育及温光调控的关系研究

采用放射免疫法(RIA)、组织切片技术和形态测量法首次系统研究了人工养殖条件下半滑舌鳎亲鱼卵巢的年周期发育过程中血浆中性类固醇激素[雌二醇(E2)和睾酮(T)]的表达规律与性腺发育[组织结构、性腺指数(GSI)、肥满度(CF)和肝脏指数(HSI)]及温度和光周期调控的关系。结果表明,半滑舌鳎属于非同步分批产卵类型,卵巢发育依据卵母细胞形态和组成划分为五期。GSI、CF和HSI随性腺的年周期发育而呈现规律性变化。水温调节与GSI和HSI值变化呈显著正相关关系。性腺的年周期发育过程中,血浆中E2在8月(Ⅳ期)达到峰值,进入产卵期后(9月)开始下降。T含量在9月达到最大值,在10月开始下降。在年周期各月份,雌鱼体内E2表达水平都远高于T表达水平,E2与T呈显著正相关关系。水温调节对E2和T表达水平影响显著且与其呈正相关关系,光周期调节对T和E2表达水平影响不显著。E2表达水平与HSI变化呈显著正相关关系,与CF变化呈负相关关系,T表达水平与HSI变化呈正相关关系,表明性类固醇激素表达水平可用于准确判断鱼类的生殖状态。本研究结果可为温光调控人工亲鱼性腺发育成熟、激素诱导亲鱼产卵提供重要技术依据。

美洲鲥鱼卵巢发育规律和性类固醇激素变化研究

采用组织学、形态学及电化学等技术方法,研究了人工养殖条件下美洲鲥鱼雌性亲鱼卵巢发育和性类固醇激素的周期变化规律。结果表明,美洲鲥鱼属于非同步分批产卵类型;根据卵巢外部形状大小及色泽等的不同,可将美洲鲥鱼卵巢发育过程分为6个时期;根据卵母细胞的形态结构、卵黄物质的积累和滤泡细胞的变化,将卵子发生划分为6个时相;卵巢周期变化过程中,肝脏指数(HSI)和肥满度(CF)变化不显著,性腺指数(GSI)与血浆中雌二醇(E2)水平表现出与性腺发育协同一致的变化规律。

饲料脂肪源搭配对施氏鲟雌鱼繁殖性能和血清性类固醇激素的影响

以鱼油和玉米油作为脂肪源，配制4种等氮饲料（蛋白含量38％，脂肪含量12％-13％），使脂肪酸中高度不饱和脂肪酸（n-3HUFA）的比例分别达3．1％、2．5％、1．9％、1．3％（分别简称SL1、SL2、SL3和SL4），以其饲喂处于性腺发育Ⅲ期的施氏鲟似cipenserschrenckii）亲鱼5个月，研究不饱和脂肪酸对其繁殖性能及性类固醇激素水平变化的影响。结果表明，经过5个月养殖，施氏鲟亲鱼平均体质量增加14．5％，经过低温刺激及升温处理至产前体质量下降6．8％，各组之间差异不显著（P〉0．05）；饲料中n-3HUFA和n-3PUFA水平对繁殖性能有不同程度的影响，SLl组和SL2组亲鱼的成熟度和仔鱼成活率高于SL3和SL4组，而仔鱼畸形率显著低于SL3和SL4组（P〈0．05）；SLl组极化卵卵径显著高于其他组（P〈0．05），平均产卵量高于其他组，但各组之间差异不显著（P〉0．05）；各组之间的受精率、孵化率差异不显著（P〈0．05）；各饲料组间血清E2和血清T含量差异不显著（P〉0．05）。本研究表明，使用混合鱼油作为饲料脂肪源，效果好于单一使用鱼油或玉米油，同时鱼油的需求比例大于玉米油，建议n-3HUFA的适宜添加量在2．5％左右，1103PUFA最适需要量需要进一步研究。

两种二氯苯胺对鱼类血清性类固醇激素水平的影响

研究了 2 ,3 二氯苯胺、2 ,4 二氯苯胺对斑马鱼 (Brachydaniorerio)的 96h急性毒性 ,并将鲫鱼 (Carassiusauratus)分别暴露于梯度浓度的 2 ,3 二氯苯胺、2 ,4 二氯苯胺 2周 ,用放射免疫法测定空白对照组和染毒组鲫鱼血清的睾酮、17β 雌二醇浓度 ,结果表明二氯苯胺类化合物对鱼体内性类固醇激素水平有一定影响 ,为可疑的环境内分泌干扰物 .

条斑星鲽卵巢发育规律和性类固醇激素周年变化研究

采用组织学方法、形态测量法、放射免疫法(RIA)等技术方法,研究了人工养殖条件下条斑星鲽雌性亲鱼卵巢发育成熟和性类固醇激素的年周期变化规律。结果表明,条斑星鲽属于非同步分批产卵类型。卵母细胞按其组织学特点可分为6个时相,卵巢发育依据其形态特征可划分为相应的6个时期。卵巢年周期发育过程中,性腺指数(GSI)、肝脏指数(HSI)和肥满度(CF)发生变化,表现出与性腺发育协同一致的变化规律。统计分析表明,卵巢年周期发育过程中,GSI和HSI值与CF值都存在显著的正相关关系,GSI值的变化与水温调控呈显著的负相关关系。亲鱼血浆中雌二醇(E2)在6月份开始升高,9月份达到年周期中的第1个小高峰,翌年2月份,E2表达水平达到最高峰值,4月产卵结束后,E2表达水平降低并维持较低水平至下一个生殖季节。血浆中睾酮(T)含量在7月达到第1个峰值,并在翌年1月份达到第2个峰值,在4月份产卵后降至最低水平并维持至下一个生殖季节。统计分析表明,E2与T存在正相关关系,E2与光周期调控存在正相关关系,同时与GSI和CF呈弱的正相关关系。

尼罗罗非鱼卵巢发育过程中性类固醇激素与卵黄蛋白原含量变化及Vtg mRNA表达特征

通过组织切片、酶联免疫吸附及荧光定量PCR等方法,研究了尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)卵巢发育过程中性类固醇激素(雌二醇E2、孕酮P)、卵黄蛋白原(Vtg)含量及Vtg mRNA相对表达水平变化规律。结果表明,尼罗罗非鱼性腺指数(GSI)与卵巢成熟发育间呈同步性变化,Ⅴ期达到峰值。血清中E2含量自卵巢Ⅱ期开始显著升高,Ⅳ期达到峰值,Ⅴ期后显著下降;血清P含量自卵巢Ⅱ期开始不断升高,Ⅴ期达到峰值,Ⅵ期显著下降;E2、P分别在卵巢成熟发育前期与后期发挥作用。肝中Vtg含量先升、后降,Ⅳ期达峰值;血清、卵巢中Vtg含量均自Ⅱ期开始增加,Ⅴ期达峰值,Ⅵ期显著降低;不同组织中Vtg含量变化与卵巢成熟发育间存在密切关联。肝中Vtg mRNA表达水平在Ⅲ期达到峰值,Ⅳ期后持续下调;卵巢中Vtg mRNA表达水平相对较低,Ⅴ期达到峰值;初步推测肝、卵巢同是尼罗罗非鱼Vtg合成部位,肝是Vtg合成的主要器官,在卵黄积累阶段最为活跃,而卵巢Vtg合成水平相对较低。

LHRH-A缓释剂促进雄性赤点石斑鱼性类固醇激素分泌和精巢发育与排精的研究

研究了促黄体生成素释放激素类似物(LHRHA)不同处理方式对雄性赤点石斑鱼性类固醇激素分泌和精子生成及精子排放的影响。对照组在0、7d二次注射生理盐水(50μg·kg-1BW),注射组在0、7d二次注射LHRHA(50μg·kg-1BW),埋植组在0d埋植LHRHA缓释剂(100μg·kg-1BW)。结果表明,通过埋植LHRHA缓释剂,血清睾酮(T)和11-酮基睾酮(11-KT)水平快速增加,显示血清睾酮和11-酮基睾酮水平与赤点石斑鱼精子生成和精子排放有密切关系。组织学观察表明,在21d,对照组和注射组鱼精巢充满了精子细胞、精母细胞和精原细胞,而在同一时间,LHRHA埋植组鱼精巢含有大量精子,表明精子排放仍在进行。在40d期间采集精液总量为对照组<注射组<埋植组,差异显著。当注射组在处理14d后精液量逐渐回落到对照组水平时,埋植组仍然维持较高精液量水平。各组采集的精子的活力与采集的精液量呈正相关,而精子密度没有显著差异。数据显示,LHRHA缓释剂能显著增加赤点石斑鱼的精液量及延长精子排放时间而不改变精子的质量。

LHRH-A缓释剂对雌性赤点石斑鱼卵巢发育、性类固醇激素分泌及脑垂体GTH细胞超微结构的影响

取75尾网箱养殖的2～3龄雌性赤点石斑鱼,分为3组(高、低剂量组和对照组),各25尾。高剂量组埋植促黄体生成素释放激素类似物(LHRHA)缓释剂,剂量为300μg/kg体重,低剂量组为100μg/kg体重,对照组埋植不含LHRHA的药丸。分别在实验开始和埋植药丸后0、10、20、30、40天抽血,用放射免疫测定血清类固醇激素(E2、T);解剖鱼体测定相关指标,计算性腺成熟系数;取性腺和肝脏组织常规组织学切片并透射电镜观察。埋植后第10—30天,两种剂量处理组的排卵率均高于对照组,高剂量组显著高于低剂量组。在第10天性腺成熟系数高剂量组为1.055%,卵母细胞已有部分迅速发育到Ⅳ期末(核偏位);低剂量组相对缓慢。第20天性腺成熟系数高剂量组达1.858%,低剂量组为0.987%;处理组卵母细胞基本发育成熟。埋植后第10天,两处理组血清E2和T水平显著升高;第20天显著下降;此后E2保持在较低的水平,T显著低于对照组水平。超微结构的观察证实脑垂体GTH细胞在LHRHA缓释剂诱导性腺发育成熟和排卵过程中处于活跃的合成与分泌状态。LHRHA缓释剂能有效诱导赤点石斑鱼卵巢发育成熟和排卵,而性类固醇激素(E2、T)只与卵黄生成有关,与排卵无关。

养殖银鲳性腺发育规律和性类固醇激素变化

为掌握养殖银鲳的性腺发育规律及其与性类固醇激素水平的关系,本研究采用组织切片技术和酶联免疫吸附法(Elisa),观察养殖条件下银鲳的精巢与卵巢发育特征和血清中性类固醇激素的周年变化,并分析性腺成熟指数(GSI)、肝重指数(HSI)和肥满度(CF)与性腺发育的关系。结果显示,养殖银鲳雌鱼1龄即可发育成熟,成熟卵巢呈一对">"形的囊状结构。11月份有近一半个体发育至III期,33.3%已发育至IV期,12月—翌年1月越冬期间约2/3退化至II期,3月又迅速发育至IV期,4月份达到V期并产卵,5月份产卵结束卵巢进入恢复期IV期。银鲳精巢属小叶型,III期精巢出现小叶腔,IV期精巢出现精子,精巢发育速率快于卵巢,即"雄性早熟",7月龄约20%个体可达到性成熟,越冬时退化至III期,3月重新发育,精子分批成熟排精。雌鱼GSI值为0.19%~12.89%,HSI为0.97%~2.30%,CF为2.30~3.08 g/cm^3,雄鱼的GSI为0.08%~2.62%,HSI值为0.73%~1.83%,CF为2.11~2.80 g/cm^3,GSI值在V期时达到最大,HSI和CF值则于IV期达到峰值。雌鱼血清中雌二醇(E2)周年表达水平为23.27~59.13 pg/m L,雄鱼为15.90~36.20 pg/m L,雌鱼的睾酮(T)为14.57~68.67 nmol/L,雄鱼的T为18.62~66.49 nmol/L,E2水平与HSI值呈现显著正相关关系,T表达水平与GSI值呈现显著正相关关系。研究表明,银鲳血清中性类固醇激素含量与精巢和卵巢的发育密切相关,可作为了解养殖银鲳性腺发育的重要指标。

性类固醇激素诱导雌性日本鳗鲡性腺发育过程中钙和脂肪的动员

7次埋植雄烯二酮 (ADSD)或甲基睾酮 (MT)后雌鳗的性腺成熟系数 (GSI)显著升高 ,分别达到 ( 2 4 94±7 2 4 ) %和 ( 1 8 67± 7 56) % ,其肝体系数 (HSI)也显著高于对照组 ;雌鳗卵巢中钙和脂肪含量明显提高 ,水分含量显著降低 ,灰分含量没有明显变化 ;肝脏中钙和脂肪含量也明显提高 ,水分和灰分含量明显降低 ;红肌和白肌中脂肪和灰分的含量则明显降低 ,水分和钙含量无明显变化 ;骨骼中钙含量明显降低 ,水分含量显著增加 ,脂肪和灰分的含量没有明显变化 .表明ADSD和MT促进了钙从骨骼中和脂肪从肌肉组织中的动员 ,从而为雌性日本鳗鲡 (Anguillajaponica)的卵巢发育提供了物质基础 .

漂白纸浆废水对鲫鱼血清性类固醇激素的影响

在实验室研究了一种漂白纸浆废水对鲫鱼 (Carassius auratus)的毒性效应和血清性类固醇激素(睾酮和 17β-雌二醇 )水平的影响 ,实验结果表明 ,该漂白纸浆废水的 96 h- LC50 和 16 8h- LC50 分别为 4 39.0± 30 .9ml/ L和 2 96 .6± 6 2 .0 ml/ L,各染毒组鲫鱼血清睾酮浓度与空白对照组相比虽有所降低 ,却不具有显著差异 (P>0 .0 5) ,而暴露于漂白纸浆废水中的鲫鱼血清 17β-雌二醇水平显著低于空白对照 (P<0 .0 5) ,表明漂白纸浆废水可以抑制鲫鱼血清 17β-雌二醇水平 ,从而损害鱼体繁殖功能。

中华乌塘鳢血清性类固醇激素含量与性腺发育的关系及其季节变化

采用放射免疫法(RIA)测定了中华乌塘鳢(Bostrichthys sinensis)不同性腺发育期血清雌二醇(E2)、孕酮(P)和睾酮(T)的含量,并分析了其季节变化.结果表明,在雌鱼性腺发育过程中,Ⅱ期卵巢个体血清E2的含量最低,Ⅲ期卵巢个体E2的含量开始上升,Ⅳ期卵巢个体E2的含量达到高峰,Ⅴ期卵巢个体E2的含量极显著(p<0.01)下降.在雄鱼性腺发育过程中,Ⅱ期和Ⅲ期精巢个体血清E2的含量都比较低,Ⅳ期精巢个体E2的含量最高,Ⅴ期精巢个体E2的含量下降.雌鱼和雄鱼血清P和T的含量随性腺发育而上升,Ⅴ期卵巢和Ⅴ期精巢个体P和T的含量均达到峰值.雌鱼和雄鱼血清E2、P和T的含量均具有明显的季节变化,其高低均依次为6月>10月>3月>1月.

性类固醇激素对鲤鱼脑垂体生长激素基因表达的影响

建立核糖核酸酶保护法 ,检测性类固醇激素对鲤鱼脑垂体生长激素基因表达水平的影响。根据已知的鲤鱼生长激素cDNA设计PCR引物 ,亚克隆构建新的含鲤鱼生长激素cDNA片段的质粒 ,并以此作为模板 ,体外转录合成鲤鱼生长激素的反义RNA探针 ,用以检测鲤鱼脑垂体中的生长激素mRNA水平。处于性腺成熟早期的雌性鲤鱼埋植雌二醇 5天或 10天后 ,血液中生长激素水平均显著高于对照组 ,但其脑垂体的生长激素mRNA水平均没有显著变化 ;埋植睾酮 5天或 10天 ,血液中生长激素水平与对照组之间无显著性差异 ,生长激素mRNA水平也没有显著性变化。但埋植雌二醇 5天后显著增强了促性腺激素释放激素类似物对血液生长激素水平升高和促进生长激素mRNA合成的刺激作用。这表明 :性类固醇激素不能在转录水平上对生长激素基因表达进行调控 。

性成熟前期尼罗罗非鱼雌雄性别生长差异与性类固醇激素水平比较

利用分子标记法、醋酸洋红压片法、组织切片技术等方法进行个体性别鉴定,比较了性成熟前期（0.5~4.0月龄）尼罗罗非鱼雌、雄鱼生长差异,并检测了2.5~4.0月龄雌、雄鱼血清睾酮（T）、雌二醇（E2）激素含量。结果发现,雌、雄鱼全长、体质量分别自3.0月龄、2.5月龄开始出现差异显著（P〈0.05）。Logistic拟合全长、体质量生长方程为：Lt（♀）=16.443/（1＋e^（2.821-1.363＊t））,Lt（♂）=18.248/（1＋e^（2.752-1.295＊t））;Wt（♀）=107.704/（1＋e^（5.157-1.464＊t））,Wt（♂）=134.796/（1＋e^（5.080-1.417＊t））,雌、雄鱼体质量生长拐点分别为3.523、3.585月龄,拐点体质量分别为52.352、67.398 g。雄鱼全长、体质量生长速度始终大于雌鱼,雄鱼快速增长期区间长度、体质量增加量大于雌鱼。2.5月龄之后,雌、雄鱼E2含量差异显著（P〈0.05）,3.0月龄之后,雌、雄鱼T含量差异显著（P〈0.05）,推测E2、T含量差异是引起尼罗罗非鱼雌雄性别生长差异的原因之一。

条斑星鲽精巢年周期发育规律和血液性类固醇激素含量变化

采用组织学方法和放射免疫法(RIA)等技术方法,研究了人工养殖条件下条斑星鲽雄性亲鱼精巢发育规律和性类固醇激素的年周期变化规律。实验结果表明,条斑星鲽精巢中可见5个时相的生殖细胞类型,精巢发育可分为5期。条斑星鲽雄鱼GSI值自10月开始升高,12月达峰值(P≤0.05),之后显著下降并保持较低值至下一次生殖周期开始。HSI值在11～12月保持较高表达值,其他各月份保持相对稳定水平。CF值在5～8月保持较高水平,其他月份保持平稳状态。雄鱼血浆中睾酮(T)水平自9月开始升高并在12月(Ⅴ期精巢)达到峰值,其后显著下降并在其后的月份保持较低水平,而雌二醇(E2)在2月出现峰值,其他月份保持相对稳定水平。

隆肛蛙卵巢性类固醇激素的免疫细胞化学研究

目的 深入探讨两栖动物卵巢内不同性类固醇激素在卵子发育中的调控作用。方法 用免疫细胞化学方法对隆肛蛙不同发育时期卵泡的性类固醇激素雌二醇、孕酮和睾酮进行定位检测。结果 雌二醇在卵黄合成期的卵母细胞和滤泡细胞中表达为强阳性,而在趋于成熟的卵泡中表达减弱;孕酮在卵黄合成期和卵黄合成后期的卵母细胞和滤泡细胞中表达较强;睾酮在各期卵母细胞中的表达均较弱,仅在卵黄合成后期表达略有增强。结论 雌二醇与卵黄合成关系密切,而睾酮和孕酮在卵母细胞成熟中起着重要的调控作用。