42Sp50/eEF1a在正常和gsdf缺失型青鳉性腺中的表达差异

青鳉(Oryzias latipes)性腺体细胞衍生因子gsdf敲除可导致XY雌性化,但Gsdf的生物学作用和靶基因仍不清楚。用Label Free蛋白组学结合MS质谱分析,定量比对正常的XX卵巢、XY精巢及gsdf缺失XY卵巢中的蛋白质表达谱,发现真核翻译延伸因子1(eEF1)的卵巢异构型42Sp50的表达量,在gsdf缺失卵巢中显著升高。通过实时定量PCR扩增,定量分析了42Sp50在正常XX gsdf^(+/+)卵巢、XX和XY型gsdf^(-/-)卵巢中的表达。用抗人EEF1A抗体的免疫荧光技术,鉴定了青鳉eEF1a和/或42Sp50在生殖细胞性分化及性成熟期,gsdf缺失卵巢同正常卵巢对照组的细胞内表达变化,验证了蛋白组学发现的在gsdf^(-/-)卵巢中有大量卵细胞高表达42Sp50。青鳉eEF1a和42Sp50氨基酸序列高度同源,但在氨基酰基结合囊和核糖体结合部位有显著差异,为此推测Gsdf信号可能直接或间接地影响XY生殖细胞表达42Sp50和雌性分化。同时建立了双色细胞荧光免疫技术用于鉴别青鳉XX型和gsdf缺失的XY型卵细胞,为研究脊椎动物配子发生的分子机制提供了新线索。