总状毛霉对4-烯-3-酮甾体的生物转化研究

从土样中筛选到一株能转化甾体的菌株,经形态观察,鉴定为总状毛霉(Mucor racemosus)。首次利用该菌株对4-烯-3-酮类甾体衍生物进行生物转化,目的是合成具有潜在活性的羟基类4-烯-3-酮衍生物。转化条件为27℃,220r/min振荡培养4d。转化产物经乙酸乙酯萃取,用硅胶柱层析法分离,通过红外、质谱和核磁分析确定了甾体转化产物的化学结构。黄体酮生物转化得到的产物是14α-羟基-4-孕甾烯-3,20-二酮和7α,14α-二羟基-4-孕甾烯-3,20-二酮;4-雄烯二酮的转化产物是14α-羟基-雄甾-4-烯-3,17-二酮1、4α,17β-二羟基-雄甾-4-烯-3-酮和6α,17β-二羟基-雄甾-4-烯-3-酮。研究结果表明总状毛霉具有转化甾体的能力,对4-烯-3-酮类甾体进行生物转化的主要产物是14α-羟基甾体衍生物。

CO_2激光辐射总状毛霉发酵产蛋白酶优化条件

为了选育高产食品蛋白酶菌株并研究其最佳发酵条件 ,从豆腐乳中分离出总状毛霉MR137,用CO2 激光辐射诱变。激光功率 10W ,扩束光斑直径 0 .4cm ,照射距离 2 2cm ,照射时间 4 0s。经初筛、复筛 ,选育出高产蛋白酶变异株 (MR137 3)。经传代培养 ,MR137 3具有稳定的高产蛋白酶活性。对MR137 3的固体发酵条件进行研究发现 ,培养温度 30℃ ,培养时间 72h ,培养基pH6 .0 ,培养基含水量 6 5 % ,是MR137

总枝状毛霉对去氢表雄酮的生物转化研究

从土样中筛选到1株能转化甾体的菌株,经形态观察,鉴定为总枝状毛霉(Mucor racemosus)。利用该菌株对去氢表雄酮进行生物转化研究,转化产物分离后,通过红外、质谱和二维核磁波谱分析,确定了化学结构。研究结果表明转化产物是7α-羟基去氢表雄酮和7β-羟基去氢表雄酮。

1株总状毛霉CGMCC8700的鉴定及蛋白质谱分析

毛霉是发酵大豆制品常用的菌种,通过常规分离方法从自然发酵的豆制品中分离得到一种纯种霉菌,采用培养和显微观察方法,分析其脂肪酸组成、(G+C)%摩尔含量、rRNA基因序列的ITS1-5.8S-ITS2区、结合蛋白质谱分析毛霉蛋白质的组成。经过鉴定该霉菌为总状毛霉(CGMCC8700),菌丝为棉絮状,有厚垣孢子,孢子呈卵圆形或椭圆形,黄褐色,G+C摩尔含量为39.53%,TM值为70%,rRNA基因序列的ITS1-5.8S-ITS2区包括640个碱基,蛋白质全谱质谱鉴定为该毛霉有1 304个特定的肽段,鉴定到肽段的长度集中在8和22之间,但长度为11的肽段最多,平均肽段长度为14.62,平均蛋白质的鉴定覆盖度为17.25%。这些指标与毛霉菌发酵特性有关。

壳聚糖固定化总状毛霉MR137-3蛋白酶的性质

以壳聚糖为载体 ,戊二醛作交联剂 ,将总状毛霉MR137 3蛋白酶固定在壳聚糖上。研究了戊二醛浓度 ,给酶量 ,处理时间对MR137 3蛋白酶固定化的影响。同时对固定化酶与游离酶的热稳定性、最适pH、最适温度以及脲、有机溶剂、金属离子的影响等理化性质进行了探讨。

总状毛霉MR137-3发酵蛋白酶的提取与催化效应

用CO2激光辐射总状毛霉MR137,获得高产蛋白酶变异株MR137 3。MR137 3经固体发酵后,用0 3mol/LNaCl,40℃提取粗酶液,再经DC 30型中空纤维素柱浓缩。制得的MR137 3蛋白酶产品经检测证明其安全性好,并且对牛奶蛋白的水解效率优于市售木瓜蛋白酶。提取粗酶后的残渣中氨基酸含量达20 28%,可以作为优质的饲料资源。

从总状毛霉和根霉细胞壁中提取壳聚糖

选用总状毛霉和根霉两种真菌作研究对象,结合从虾蟹壳中用酸碱法提取甲壳质的方法,根据实验材料的具体情况,进行了一系列的修改、补充,经培养、酸浸、碱煮、过滤、沉淀等流程获得了壳聚糖,得出一条适合于从丝状真菌中提取壳聚糖的新途径。且实验证明:总状毛霉比根霉的产率高。

总状毛霉凝乳酶的研制及初步应用

从１７株产凝乳酶的霉菌中初筛得到产酶量较高的菌株，再进行６０＿Ｃｏ－γ射线诱变，得到产酶量较初筛菌株提高８０％的诱变菌株─—总状毛霉Ｒ１３２。确定了诱变株Ｒ１３２的液体发酵产酶工艺及提取纯化路线，获得适于应用的部分纯化酶液样品。用该酶制作的Ａｄａｍ干酪与车间生产样品对照进行成熟期理化性质分析的结果基本相同。

青腐乳生产菌总状毛霉的鉴定及致病性研究

本研究对腐乳生产厂家提供的生产菌进行了鉴定,确定为总状毛霉。并对该菌进行了致病性研究。将不同浓度的总状毛霉孢子经小鼠腹腔注射,观察30d内动物出现的中毒症状、死亡和体重变化,对实验中死亡和定期处死的小鼠解剖,测定脑、肝、脾、肾、肺、心等组织中的生存菌数,同时作病理组织学检查。结果表明,该菌对小鼠造成的主要损害为肝脏坏死性病变,随染孢子量增加,小鼠各脏器中检出的活菌数增多,其中5×106(个/只)及其以上剂量组所有脏器可同时检出活孢子,且有正剂量反应关系。但致病性与染孢子量不呈正剂量反应关系。

总状毛霉酶水解大豆异黄酮苷条件的优化

利用总状毛霉进行生物转化,采用单因素和中心组合试验设计对转化大豆异黄酮苷水解条件进行研究。通过响应面法对水解后游离苷元浓度、时间、温度、酶量、pH值之间的关系建立数学模型,获得了最佳水解条件:水解时间3.59 h,pH6.1,酶量23 mL,水解温度46℃。经验证试验与预测值接近,说明该模型有很好的预测能力。

总状毛霉丝氨酸蛋白酶基因结构和功能的生物信息学分析

利用PCR和RACE(cDNA末端快速扩增)技术从总状毛霉中克隆获得1个丝氨酸蛋白酶新基因,利用生物信息学方法对该基因序列、编码的酶序列以及酶性质和结构进行预测。结果表明:该基因编码区序列长1 421bp,由3个外显子和2个内含子组成,编码由429个氨基酸残基组成的多肽;对该多肽的组成和进化分析表明,其成熟肽属于蛋白酶K家族的胞外蛋白酶;通过同源建模结构分析表明,该酶没有二硫键,有152个氢键和29个盐键,酶的Glu190、Ala192和Asp215残基与一个Ca2+相结合,酶活性位点残基Asp44和Ser241溶剂可及表面积较大,分别达到0.211 42和3.309 32;该酶的底物结合区域中,S1和S4口袋结构明显,S2次之,S3最不明显,部分组成S1和S4口袋的氨基酸残基不保守,这可能使该酶具有独特的水解性。上述结果可为该蛋白酶基因的异源表达和结构与功能关系等方面的研究提供参考。

从总状毛霉中超声波提取壳聚糖的工艺研究

采用超声波提取方法,对壳聚糖的提取工艺进行研究。其最适提取方法:将菌体放入浓度为0.8mol/L的NaOH碱液浸泡,菌丝体和碱液体积比为1∶30(w/v),加热至50℃超声波400W处理时间50min,再经过离心取沉淀、水洗、离心,2%乙酸95℃加热萃取12h,得壳聚糖溶液,经过中和沉淀,再经过真空干燥得壳聚糖,最高得率为16.5%。其干菌丝体壳聚糖的得率和优化前相比较得到了进一步的提高。

总状毛霉紫外诱变及发酵提取壳聚糖初探

为了提高壳聚糖产量,通过对紫外诱变处理总状毛霉及发酵条件的研究,初步确定了不同发酵培养条件对总状毛霉产壳聚糖的影响,结果表明:发酵液培养基的蔗糖为50 g/L、酵母膏为2.0 g/L、硝酸钠为3.5 g/L、磷酸氢二钾为1.0 g/L、硫酸镁为0.2 g/L和硫酸铁为0.2 g/L,发酵温度控制在30℃,培养时间为48 h,壳聚糖产量为1.12 g/L。

总状毛霉生物转化孕酮的研究

为筛选羟基化多样性的菌株,对总状毛霉(Mucor racemosus)生物转化孕酮进行研究。转化产物经HPLC分析,共分离到6个转化产物,通过NMR、MS及FTIR等手段对孕酮转化产物进行结构鉴定。其结构为11α-羟基孕酮(1);15α-羟基孕酮(2);11α,15β-二羟基孕酮(3);6β,11α-二羟基孕酮(4);7β,15β-二羟基孕酮(5);1-脱氢11α-羟基孕酮(6)。研究结果表明,总状毛霉转化孕酮的衍生物具有丰富的多样性。

总状毛霉发酵生产壳聚糖工艺研究

壳聚糖是天然多糖中唯一大量存在的碱性氨基多糖,具有一系列特殊功能性质,广泛应用于食品、生物医用材料、纺织、环保等行业领域,市场前景非常可观。本文选择总状毛霉作为菌种,在单因素实验的基础上,用部分因子设计方法对相关影响因素的效应进行筛选并选出有显著效应的蔗糖、NaNO3、时间三个因素。最后用中心组合实验及响应曲面、等高线分析确定主要影响因素的最佳含量和培养的条件。确定最适发酵培养基和培养条件为:接种量(5%)、蔗糖(64g/L)、酵母膏(3g/L)、硝酸钠(3.5g/L)、磷酸氢二钾(1.5g/L)、硫酸镁(0.1g/L)、硫酸铁(0.1g/L)、温度(28℃)、转速(140r/min)、培养时间(43h),并通过实验得壳聚糖产量为1.43g/L。

总状毛霉紫外诱变及发酵提取壳聚糖初探

通过紫外诱变处理总状毛霉及发酵条件的研究,初步确定了不同发酵培养条件对总状毛霉产壳聚糖的影响,结果为:蔗糖(50g/L)、酵母膏(2.0g/L)、硝酸钠(3.5g/L)、磷酸氢二钾(1.0g/L)、硫酸镁(0.2g/L)、硫酸铁(0.2g/L),发酵温度控制在30℃,培养48h,壳聚糖产量为1.12 g/L。

总状毛霉与鲁氏酵母耦合发酵对豆粕营养和风味的增强效应

本文以总状毛霉为主要菌种,探究发酵对豆粕营养和风味的增强作用以及鲁氏酵母耦合发酵和豆粕原料超声前处理对毛霉发酵豆粕品质的作用。结果表明,总状毛霉发酵能显著提高豆粕中性蛋白酶活力、可溶性蛋白含量、感官品质、总氨基酸和游离氨基酸含量,并有效降低胰蛋白酶抑制剂活力;28℃发酵60 h,各发酵豆粕蛋白酶活力和可溶性蛋白含量均达到最大值,与未发酵豆粕相比,总状毛霉发酵豆粕蛋白酶活达到1032.4 U/g,可溶性蛋白、总氨基酸和游离氨基酸含量分别增加3.16倍、13.64%和5.65倍,胰蛋白酶抑制剂活力降低了84.57%。豆粕原料超声前处理和鲁氏酵母耦合发酵均有助于强化毛霉发酵豆粕的品质,其中超声前处理后毛霉和鲁氏酵母耦合发酵豆粕胰蛋白酶抑制剂含量从4375 U/g下降到350 U/g,减少了92%,游离氨基酸含量增加了7.69倍,总氨基酸含量提高了22.92%,有效提高了豆粕的营养和感官品质,为豆粕的进一步研究和应用提供了参考。

植皮术后继发总状毛霉病1例

1病历摘要 患者，女，20岁。2005年6月20 日因车祸致左腿外伤收住入院，入院时左下肢从大腿中部至踝部皮肤完全剥脱，左胫腓骨双骨折，行全麻下清创、植皮、跟骨牵引术，术后给予抗炎、止血、补液等对症支持治疗。2005年7月7 日换药时见患肢小腿外侧敷料有脓性渗出物，敷料下方有1 块4 cm×5 cm的皮瓣颜色变黑，继续使用头孢他啶、洛美沙星抗炎、对症治疗。1个月后患区仍有较多脓性渗出物，新植皮瓣明显坏死，形成焦痂，皮下形成红色结节，中心糜烂，周围绕有苍白圈。连续进行2次创面分泌物细菌、真菌培养和直接镜检，均查到菌丝及孢囊，经鉴定为总状毛霉菌（M.racemosus）。诊断：总状毛霉病。治疗：氟康唑葡萄糖注射液100 ml，每日1次静脉点滴，连用6 d后改为口服盐酸特比奈芬片，每次0．25 g，每日 1次，连服10 d后病灶处坏死皮肤完全脱落，糜烂面全部愈合，并有新鲜肉芽组织生成；细菌、真菌培养均为阴性。

总状毛霉对17α-羟基孕甾-4-烯-3,20-二肟的生物转化

为了获得具有较强生物学活性或结构新颖的羟基甾体肟衍生物,利用总状毛霉对合成的17α-羟基孕甾-4-烯-3,20-二肟进行转化研究。转化产物经柱层析分离纯化后鉴定为7α,17α-二羟基-20-肟-孕甾-4-烯-3-酮(3)和11α,17α-二羟基-20-肟-孕甾-4-烯-3-酮(4)。目前微生物转化甾体研究领域对于甾体肟的转化研究少见报道,研究结果为甾体肟衍生物的发展奠定了基础。

总状毛霉固体发酵培养辅酶Q_(10)研究

通过紫外扫描图和高效液相色谱鉴定,证实总状毛霉中确实含有辅酶Q10。并通过PDA平板培养,冷冻固化平板培养基法获得纯菌丝体,并确定了纯菌丝质量与辅酶Q10含量关系图,相关系数为0.99971。