总状蕨藻盾叶变种寡糖的酶解制备及其免疫调节活性的作用机制

将总状蕨藻盾叶变种多糖经乳糖酶酶解、膜过滤、透析和冻干制备获得总状蕨藻盾叶变种寡糖(Caulerpa racemosa var.peltate oligosaccharide,CRVO-G),测定CRVO-G的相对分子质量与单糖组成,评价CRVO-G的免疫调节活性,并对其作用机制展开研究。结果显示,CRVO-G主要是由相对分子质量分别为617.115、621.081和995.368的2种四糖和1种六糖组成的寡糖混合物,主要由半乳糖(51.0%)、甘露糖(21.3%)、葡萄糖(11.5%)、木糖(6.5%)、鼠李糖(2.3%)、葡萄糖醛酸(2.0%)、盐酸氨基葡萄糖(1.8%)、岩藻糖(0.8%)、盐酸氨基半乳糖(0.7%)、半乳糖醛酸(0.7%)、甘露糖醛酸(0.7%)和阿拉伯糖(0.6%)组成。此外,CRVO-G具有良好的免疫调节活性,能促进一氧化氮(NO)和免疫因子的释放,如白细胞介素-1β、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α。代谢组学和蛋白免疫印迹结果表明,CRVO-G可以促进巨噬细胞花生四烯酸代谢通路中血栓素A2和15-酮前列腺素F2α的合成,提高环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)的磷酸化蛋白的表达水平。研究表明,在巨噬细胞RAW264.7细胞中CRVO-G通过NF-κB/iNOS/COX-2途径发挥免疫调节作用。

总状蕨藻水溶性成分的提取及其对羟自由基清除作用

以清除Fenton反应产生的羟自由基能力为考察指标,采用单因素实验和正交优化实验研究了总状蕨藻水溶性成分的提取工艺;以抗坏血酸(Vc)作阳性对照,测定了不同浓度水溶性成分对羟自由基(.OH)的清除作用。结果表明,在温度60℃、料液比1:25、时间1 h的条件下提取的水溶性成分清除羟自由基的能力最强,在此工艺条件下,水溶性成分的得率为3.09%。当浓度为0.187 g/L^0.75 g/L时,总状蕨藻水溶性成分对羟自由基清除能力较VC强,且存在剂量-效应关系,最大清除率为72.35%。总状蕨藻水溶性成分和VC的IC50分别为0.513 g/L和0.665 g/L。

总状蕨藻盾叶变种多糖对小鼠T细胞亚群及NK细胞免疫功能的调节

目的:观察总状蕨藻盾叶变种多糖对正常小鼠T细胞亚群及NK细胞的免疫调节作用。方法:腹腔注射总状蕨藻盾叶变种多糖溶液,用流式细胞仪检测血中免疫参数(CD3+,CD4+,CD8+T细胞亚群百分比)和脾脏NK细胞百分比,并测定胸腺、脾脏指数。结果:总状蕨藻盾叶变种多糖能明显降低小鼠血中CD3+,CD4+,CD8+百分比(P<0.05),同时增强脾脏NK细胞百分比(P<0.05),并显著降低胸腺指数(P<0.05),增加脾脏指数(P<0.05)。结论:总状蕨藻盾叶变种多糖对小鼠T细胞亚群和NK细胞具有双向的免疫调节作用。

总状蕨藻多糖提取工艺的研究

采用酶法提取与热水抽提相结合的方法研究了总状蕨藻多糖的提取工艺,结果显示,采用固液质量比1∶10,蛋白酶用量136.5 U/g,于60℃下酶法提取2.5 h后,再将固液质量比调至1∶20,在温度95℃条件下继续进行热水提取2.5 h,多糖得率为6.7%,比单用热水提取法提高了131.0%。

总状蕨藻多糖体外抗肿瘤作用

以总状蕨藻为原料,采用热水与蛋白酶酶解相结合浸提得到总状蕨藻多糖提取液,经Sevag法和透析法等步骤纯化后得到总状蕨藻粗多糖(Caulerpa racemosa polysaccharide,CRP)。紫外扫描结果表明CRP中含有少量蛋白质。红外光谱分析CRP有一般糖类物质的特征吸收峰,含硫酸基团,是一种酸性多糖。采用噻唑蓝(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)法研究了CRP对HeLa、K562、CNE-2z细胞的抑制作用,结果表明CRP对3种肿瘤细胞都有一定的抑制作用,在24~72 h内,随着时间的延长,抑制率逐渐增强,在0.062 5~4 mg/mL质量浓度范围内,随着质量浓度的增加,抑制率逐渐增强,对HeLa、K562和CNE-2z细胞的抑制率最大分别达到61.7%、85.9%和90.3%。

总状蕨藻盾叶变种多糖及其硒化产物对小鼠T细胞和NK细胞的调节

一种分离自总状蕨藻盾叶变种的多糖CrvpPS与纳米硒反应之后形成稳定的多糖纳米硒(CrvpPS-nano-Se)系统.实验检测了CrvpPS和CrvpPS-nano-Se对小鼠T淋巴细胞亚群及NK细胞的调节功能.用氢化可的松制造免疫功能低下的小鼠动物模型,给模型小鼠分别连续10天灌胃CrvpPS、蔗糖-纳米硒、CrvpPS-nano-Se溶液和阳性对照药物左旋咪唑,检测脾脏和胸腺指数的变化,并用流式细胞仪检测血中T细胞亚群(CD3+,CD4+,CD8+)和脾脏NK细胞百分比.结果表明,CrvpPS和CrvpPS-nano-Se对胸腺有较大的刺激作用,能使模型小鼠的CD3+,CD3+CD4+,NK细胞百分比以及CD4+/CD8+明显升高(P<0.05),CrvpPS-nano-Se提升CD3+,CD3+CD4+细胞百分比的作用明显优于CrvpPS、蔗糖-纳米硒及左旋咪唑(P<0.05).表明CrvpPS对免疫功能低下小鼠的胸腺指数、T细胞亚群和NK细胞百分比具有正向调节作用;其硒化产物CrvpPS-nano-Se对CD3+,CD3+CD4+细胞的调节作用优于单纯多糖和单纯纳米硒.

中国南海总状蕨藻的脂肪酸类化学成分和生物活性研究

目的分离鉴定中国南海总状蕨藻（Cauler pa rucennosu）中的脂肪酸类化学成分。供药理活性筛选。方法综合利用各种柱层析方法分离纯化化合物并利用光谱学方法解析化合物结构；采用M3-F法对所有化合物进行神经细胞损伤保护作用评价；采用酶标法对所有化合物进行蛋白酪氨酸磷酸酯酶抑制活性评价。结果从中分离得到12个脂肪酸及衍生物，分别鉴定为棕榈酸（1）、硬脂酸、（2）、十八皖二酯二乙酯、（3）、正二十三烷酸甘油酯（4）、（8E）-heplade0c-8-em7-one（5）、（8Z，11Z）-heptadeca-8，11-dienoicacid（6）、ethyl linolenoate（7）、（4Z，7Z．10Z，13Z）-ethyl hexadeca-4，7，10，13-telraenoate（8）、β-dimorphecolic acid（9）、α-adimorphecolic acid（10）、（9R，10E，12Z）-9-hydroxyoctadeca-10。12-dienoicacid（11）、（9R，10E）-9-hvdroxyoctadec-10-enoicacid（12）。结论化合物5为新天然产物；化合物3～12为首次从总状蕨藻中分离得到，其中6和7首次发现于蕨藻属海藻中，3，4和8～12均为首次从海洋生物中分离得到；化合物2和5在10μmol／L浓度时对SH—SY5Y神经母细胞瘤细胞损伤显示了不同强度的保护作用；化合物1，2，5，11和12对蛋白酪氨酸磷酸酯酶1β均显示了明显的抑制活性。

其他

从63种海洋藻类和16种红树植物中筛选抗烟草花叶病毒(TMV)的种类,有16种藻类具有抗病毒活性,其中包括4种绿藻(总状蕨藻、棒叶蕨藻、匍匐松藻、大叶仙掌藻)、4种褐藻(两种网地藻、软叶马尾藻、圈扇藻)以及8种红藻(纵胞藻、仙菜、凝花菜、皮江蓠、钩沙菜、两种凹顶藻、多管藻)。

勘误

对《动物学杂志》2022年57卷5期第775至781页发表的论文《海南省首次发现光合软体动物绒毛海天牛》进行勘误。该文中5处总状蕨藻的学名“Caulerpa racemose”应更改为“Caulerpa racemosa”,分别位于:(1)775页中文摘要部分第5行;(2)776页第1行;(3)778页图1a英文图注;(4)779页图3英文图注第2行;(5)779页正文左栏第6行。