白鹤灵芝总萘醌对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝小鼠的作用研究

为评价白鹤灵芝总萘醌(Rhinacanthins-rich extract from Rhinacanthus nasutus,RRE)的降血脂及保护肝脏作用,采用高脂饲料诱导建立的非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic Fatty Liver Disease,NAFLD)小鼠模型,通过测定小鼠血清中总胆固醇(Total Cholesterol,TC)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、高密度脂蛋白(High Density Lipoprotein,HDL-C)、低密度脂蛋白(Low Density Lipoprotein,LDL-C)及肝脏及谷草转氨酶(Aspartate transaminase,AST)、谷丙转氨酶(Alanine transaminase,ALT)、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,AKP)的水平,以及肝脏组织进行病理学观察。动物实验结果表明,RRE干预后有效改善了NAFLD小鼠肝脏病理病变进程,缓解炎性损伤,减少肝脏脂肪颗粒堆积;高、中剂量均能显著降低NAFLD小鼠血清中TC、TG、LDL-C水平(P<0.05),极显著升高HDL-C水平(P<0.01),显著降低NAFLD小鼠血清中AST、ALT、AKP活力(P<0.05或P<0.01);其指标水平均优于熊果酸组;RRE低剂量组可显著降低NAFLD小鼠血清中TG、LDL-C、AST、水平(P<0.05),可降低TC、ALT、AKP水平,但无显著性差异(P>0.05);通过网络药理学对白鹤灵芝与NAFLD疾病相关作用靶点进行交集,结合分子对接技术对RRE的有效活性物质及作用机制进行预测,结果表明白鹤灵芝素-C(rhinacanthin-C)与交集靶点具有良好的结合潜力。研究表明RRE有显著的降血脂、改善脂质沉积和炎性损伤、保护肝脏的作用,其作用机制可能是rhinacanthin-C经由AMPK-SREBP1c-SIRT1信号调节脂质代谢紊乱发挥作用,为壮药白鹤灵芝开发为降血脂、改善脂肪肝的民族药物提供实验依据。

白鹤灵芝总萘醌对非酒精性脂肪肝小鼠及其肠道菌群的影响

目的探讨白鹤灵芝总萘醌对非酒精性脂肪肝(NAFLD)小鼠的影响及对肠道菌群的相关性研究。方法小鼠随机分为空白组、模型组、白鹤灵芝总萘醌组(300 mg/kg),高脂饲料喂养6周诱导建立NAFLD模型,造模成功后连续灌胃给药6周,取小鼠血清、肝组织和肠内粪便,HE和油红O染色观察肝组织病理学,采用试剂盒检测血清GLU、TC、TG、HDL-C、LDL-C、AST、ALT水平,16S rRNA测序法分析小鼠粪便肠道菌群组成结构,并进行相关性分析。结果肝组织病理学观察表明高脂饮食喂饲可诱导NAFLD模型,与模型组比较,白鹤灵芝总萘醌组可有效减轻小鼠肝脏病理病变,减少炎症损伤及脂肪堆积,降低小鼠体质量、肝脏系数、血清GLU、TC、TG、LDL-C、ALT、AST水平(P<0.01),升高HDL-C水平升高(P<0.01)。与模型组比较,白鹤灵芝总萘醌组小鼠粪便样品Alpha分析Chao、Shannon和Simpson指数升高(P<0.05),肠道微生物组成的丰富度和多样性改变。与空白组比较,模型组拟杆菌门丰度增加,厚壁菌门、变形菌门、弯曲杆菌门丰度降低;与模型组比较,白鹤灵芝总萘醌组拟杆菌门丰度降低,厚壁菌门丰度升高。相关性分析表明,拟杆菌门丰度与TG、GLU水平呈正相关,与HDL-C水平呈负相关;厚壁菌门丰度与HDL-C水平呈正相关,与TG水平呈负相关。结论白鹤灵芝总萘醌有降血脂、改善脂质沉积和保护肝脏的作用,其机制可能是通过改善肠道菌群紊乱,调节肝脏脂质代谢发挥降脂护肝的作用。

紫草总萘醌的提取工艺研究

以紫草为研究对象,采用单因素实验考察了提取温度、料液比、乙醇体积分数对紫草总萘醌提取量的影响;在单因素实验的基础上,采用正交实验优化了紫草总萘醌的加热回流提取工艺。结果表明:在提取时间为2 h、提取温度为90℃、料液比为1∶50(g∶mL)、乙醇体积分数为90%的最优条件下,紫草总萘醌提取量可以达到30.03 mg·g^(-1)。该研究为紫草药用植物资源的开发利用提供了参考。

紫外分光光度法测定新疆紫草中总萘醌的含量

建立了新疆紫草中总萘醌含量的测定方法。采用紫外光分光光度法,以氯仿作溶媒,在516nm处测定吸光度,计算紫草中总萘醌的含量。测得值结果表明:左旋紫草素对照品浓度在5～25mg L,浓度与吸光度呈良好线性关系,回归方程A=25.282C+0.0061,r=0.9999;平均加样回收率为101.0%,RSD为0.88%;紫草中总萘醌的含量为3.94%。本法灵敏、准确、简便,可用于新疆紫草中总萘醌的含量测定。

紫外分光光度法测定O/W型紫草脂肪乳剂中总萘醌的含量

目的:建立以紫外分光光度法测定O/W型紫草脂肪乳剂中总萘醌含量的方法.方法:总萘醌的含量以左旋紫草素计,溶剂为甲醇,检测波长为516nm.结果:左旋紫草素检测浓度在8.32～41.60μg/ml范围内与吸收度呈良好的线性关系(r=1.0000,n=5),平均回收率为98.6%(RSD=0.53%).结论:本方法简便、准确,回收率与精密度高,重现性好,可用于O/W型紫草脂肪乳剂中总萘醌含量的测定.

泰山紫草中总萘醌提取方法的研究

目的优选泰山紫草总萘醌类成分的提取方法。方法以总萘醌类成分得率为考察指标,比较回流提取法、渗漉提取法和超声提取法的提取效率;采用紫外光分光光度法,以乙醇作溶媒,在516nm处测定吸光度,计算泰山紫草中总萘醌的含量。结果超声提取法所得总萘醌成分得率最高。结论超声提取法为泰山紫草中总萘醌类化合物较好的提取方法。

新疆紫草中总萘醌提取方法的比较

为了筛选新疆紫草中总萘醌最优提取方法,分别采用回流提取法、渗漉提取法和超声提取法提取新疆紫草中总萘醌成分。结果表明,总萘醌含量从大到小依次为超声提取法、回流提取法、渗漉提取法,其中,超声提取法为新疆紫草中总萘醌类成分较好的提取方法。

小红蒜总萘醌质量标准的研究

目的建立小红蒜总萘醌的质量标准。方法TLC、HPLC法分别定性鉴别、定量测定异红葱乙素、红葱乙素、红葱甲素,2015年版《中国药典》方法检测干燥失重、水分、炽灼残渣、树脂残留物,紫外分光光度法测定总萘醌含有量。结果TLC斑点清晰,分离度良好。3批样品干燥失重、水分、炽灼残渣范围分别为2.34%~4.03%、2.06%~3.56%、0.15%~0.19%,树脂残留物符合相关标准。总萘醌、异红葱乙素、红葱乙素、红葱甲素分别在1~10μg/mL(r=0.9994)、0.00500~0.200 mg/mL(r=0.9997)、0.0144~0.576 mg/mL(r=0.9999)、0.00496~0.198 mg/mL(r=0.9999)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为100.06%(RSD=1.92%)、101.77%(RSD=1.30%)、103.24%(RSD=1.04%)、98.41%(RSD=1.82%)。结论该方法合理可行,可用于小红蒜总萘醌的质量控制。

Box-Behnken效应面法优化泰山紫草中总萘醌提取工艺

目的优选泰山紫草总萘醌的提取工艺。方法在单因素试验基础上,采用Box-Behnken效应面法,以总萘醌的提取率为指标,考察乙醇体积分数、提取时间、料液比等的影响,利用紫外分光光度计测定总萘醌的含量。结果确定泰山紫草中总萘醌的最佳工艺为:乙醇体积分数80%,提取时间30 min,料液比1∶18,提取2次,总萘醌的提取率为3.384%。结论 Box-Behnken效应面法用于泰山紫草中总萘醌提取工艺条件的优选是可行的,模型预测效果较好。

响应面法优化紫草中总萘醌的提取工艺

为优化紫草中总萘醌的提取工艺,以料液比、提取温度和提取时间为考察因素,以左旋紫草素标准品为对照,在单因素实验的基础上,采用Box-Behnken响应面法优化橄榄油提取紫草中总萘醌的提取工艺。研究结果表明,优化的提取工艺为物料比1∶42,提取时间4 h,提取温度46℃。优化的提取工艺合理、可行,可用于提取紫草中的总萘醌。

UPLC-Q-TOF/MS法分析北青龙衣总萘醌类成分的组成

目的:以超高液相色谱-质谱联用(UPLC-Q-TOF/MS)技术分析北青龙衣中总萘醌类成分的组成。方法:采用Sephadex LH-20纯化北青龙衣总萘醌类部位,通过UPLC-Q-TOF/MS技术对北青龙衣总萘醌类成分进行快速分析,利用Peakview 2.0/Masterview1.0 software数据处理软件,根据质谱所提供的保留时间、精确相对分子量及二级质谱裂解碎片鉴定及推测其化学成分。结果:通过液质数据分析及参考相关文献鉴定出北青龙衣总萘醌部位中萘醌类成分44种。结论:该方法能够快速、准确的分析北青龙衣总萘醌部位的成分,为今后更深入地研究北青龙衣总萘醌有效部位的化学成分奠定结构基础。

紫草总萘醌的闪式提取工艺优选

目的:优选紫草中总萘醌的闪式提取工艺。方法:以紫草总萘醌和β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁转移率为指标,采用L9(34)正交试验考察溶剂用量、提取时间、提取电压对闪式提取工艺的影响,并与渗漉法进行比较。结果:最佳提取工艺为分别加14,8倍量95%乙醇于140 V电压下提取2次,每次2 min;总萘醌和β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁平均转移率分别为90.72%,70.68%。渗漉法中总萘醌和β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁平均转移率分别为79.03%,65.43%。结论:闪式提取法优于渗漉法,前者适用于紫草总萘醌的提取,优选的工艺稳定可行,具有良好的应用前景。

小红蒜总萘醌的提取工艺研究

目的:优选小红蒜有效部位总萘醌的最佳提取工艺条件。方法:采用UV和HPLC,以总萘醌含量,异红葱乙素、红葱乙素和红葱甲素含量以及固形物收率为指标,比较回流法、超声提取法、渗漉法、冷浸法以及热浸法的提取效果,并结合单因素实验与正交试验,优选最佳提取方法及其工艺参数。结果:回流法提取小红蒜总萘醌效果最佳,最佳工艺条件为:10倍量85%乙醇回流2次,每次2h。结论:该提取工艺稳定、可行,且科学合理、经济环保。

紫草中羟基萘醌总色素含量测定的稳定性研究

目的:探讨并研究紫草中羟基萘醌总色素含量测定的稳定性。方法:以紫草为试材,参照2020版《中国药典》紫草项下羟基萘醌总色素含量的测定方法,测定紫草中羟基萘醌总色素的含量,对测定过程中的各影响因素进行逐一分析,总结影响紫草中羟基萘醌总色素含量测定稳定性的因素,并通过L9(34)正交试验优选出测定紫草中羟基萘醌总色素含量的最佳条件。结果与结论:在紫草药材粉碎成极细粉的条件下测得羟基萘醌总色素的含量值较为稳定。药粉细度是影响紫草中羟基萘醌总色素含量测定的主要因素,其次为药粉干燥时间及药粉含水量。将药材粉碎成极细粉、在50℃下干燥3 h、将药粉的含水量控制在9.0%左右是测定紫草中羟基萘醌总色素含量的最佳条件。

紫外-可见分光光度法测定紫草油中羟基萘醌总色素的含量

目的:建立紫外-可见分光光度法测定紫草油中羟基萘醌总色素含量的方法。方法:羟基萘醌总色素的含量以左旋紫草素计,溶剂为乙醇,检测波长为516 nm。结果:左旋紫草素质量浓度在8.08~40.40μg/ml范围内与吸光度呈良好的线性关系(r=0.999 9,n=5),平均加样回收率为97.97%(RSD=1.70%,n=5)。结论:该方法简便、准确,回收率与精密度高,重现性好,可用于紫草油中羟基萘醌总色素含量的测定。

紫草炭制前后萘醌类化合物含量变化及止血作用研究

目的采用传统的蒙药炮制方法,对紫草进行炭制,通过紫外可见分光光度法和高效液相色谱法对紫草炭制前后萘醌类化合物进行含量测定,比较原药材和炭制紫草中的含量变化。初步评价紫草炭制品的止血活性。方法UV法测定原药材和炭制紫草的羟基萘醌总色素的含量,HPLC法测定β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁含量。采用毛细管法测定小鼠全血凝血时间和出血时间。结果UV和HPLC的结果表明,炭制紫草的羟基萘醌总色素和β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量均不同程度的下降。云南白药阳性对照组及给药三组均与空白对照组比较具有显著差异(P<0.01),延长全血凝血时间效果明显,且160101C炮制组的凝血时间最短,但是给药组之间均没有太明显的差异。结论本研究可为今后的蒙医药中炭制紫草的质量标准及药理实验提供科学依据。

正交试验优选紫草提取工艺

目的以紫草中总萘醌和左旋紫草素的含量为指标,研究超声萃取和索氏提取2种工艺方法在萃取紫草中有效成分的差异。方法通过正交试验安排实验条件,采用分光光度法测定紫草提取液中总萘醌含量,HPLC法测定提取液中左旋紫草素含量,比较超声萃取与索氏提取的提取效率,优选两种工艺方法的最佳工艺条件。结果2种工艺方法中,粒度对总萘醌的提取率均有非常显著影响,粒度较大的提取率高,但对紫草中左旋紫草素的提取率无显著影响;溶剂乙醇在2种工艺方法中表现出不同影响,超声萃取工艺乙醇的提取率较高,呈显著影响,而在索氏提取工艺中提取率较低,也呈显著影响。结论比较2种工艺,超声萃取具有高效、省时、节能的特点,优于索氏提取工艺。

紫草提取工艺研究

目的:研究不同提取温度、提取方法对紫草中有效成分的影响,优选紫草中萘醌类成分的提取工艺。方法:采用分光光度法测定紫草提取液中总萘醌含量,比较渗漉、回流、温浸(65℃)、超声、浸渍方法的提取效率,采用L9(34)正交试验,以总萘醌的含量作为指标,以乙醇用量、浸泡时间和浸泡次数为考察因素,优选紫草的醇提工艺条件。结果:回流对萘醌类成分的破坏明显,其余4种提取方法以渗漉法、温浸法(65℃)提取率最高,各方法之间无显著差别;优选的醇提工艺为:加10倍量95%乙醇,浸泡2次,每次12小时。结论:浸渍法节约能源,对设备要求低,操作简便,转移率高,优选的提取工艺稳定、合理、可行,适用于工业化生产。

紫草蒽醌类成分的提取及其复合物栓的抗炎活性研究

目的:基于预防和治疗老年性阴道炎及妇科炎症等疾病,从开发绿色天然中药制剂出发,优选紫草复合物栓最佳提取工艺,并以抗炎活性为指标,优化紫草提取物在复合物中配比。方法:采用正交试验设计方法,以出膏率、总萘醌含量及左旋紫草素含量为综合指标进行工艺优选,二甲苯致炎实验优化处方配比。结果:紫草的最佳提取工艺为:浸泡4小时后,8倍量90%的乙醇渗漉。当紫草占处方总量的50%时,其抗炎活性最强。结论:优选的提取工艺,条件稳定,方法简单,可操作性强且成本低,可用于紫草复合物栓的制备。以活性为指标的处方筛选,为紫草复合物栓的有效性开发提供重要依据。

正交优选苦紫洗剂提取工艺研究

目的:优选苦紫洗剂的提取工艺。方法:采用L9（34）正交试验,以羟基萘醌类总色素含量为评价指标,以乙醇用量、浸泡时间和浸泡次数为考察因素,筛选紫草的醇提工艺条件;以氧化苦参碱和苦参碱总含量及干膏收率为评价指标,以加水倍数、提取时间和煎煮次数为考察因素,筛选苦紫洗剂的水提工艺条件。结果:优选醇提工艺为加10倍量95%乙醇,浸泡2次,每次12 h;优选水提工艺为加8倍量水,提取3次,每次1 h。结论:优选得到的提取工艺稳定、合理、可行。