消瘤藤总香豆素诱导结直肠癌细胞铁死亡的作用研究

为探究广西传统瑶药消瘤藤总香豆素(Total Coumarins from Pileostegia tomentella,TCPT)诱导人结直肠癌(Colorectal Cancer,CRC)HT-29细胞铁死亡的作用及其机制,本研究采用不同浓度TCPT处理人结直肠癌HT-29细胞,利用细胞增殖活性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)结合流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)检测细胞活性的变化情况,采用透射电子显微镜观察细胞线粒体的形态变化,利用二氯荧光素(DCFH-DA)染料探针法检测细胞内铁依赖性活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)含量的变化,利用特异性荧光探针BODIPY 581/589 C11检测细胞内脂质过氧化物含量,利用蛋白质印记(Western blotting)检测铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(Glutathione Peroxidase 4,GPX4)、胱氨酸-谷氨酸反向转运体亚基(Cysteine-glutamate antiporter subunit,xCT)、核受体共激活因子4(Nuclear receptor Coactivator 4,NCOA4)和二价金属离子转运体(Divalent Metal Transporter 1,DMT1)的表达水平。结果表明:人结直肠癌HT-29细胞经TCPT处理后,细胞活力呈浓度依赖性下降,细胞线粒体出现细胞质骤减、嵴塌陷、“同心圆”等典型的铁死亡形态特征,细胞内的ROS和脂质过氧化物水平呈剂量依赖性显著升高。HT-29细胞铁死亡标志蛋白GPX4、xCT的表达水平下调,而NCOA4、DMT1的表达水平上调。综上所述,消瘤藤总香豆素可使细胞内ROS和脂质过氧化物水平明显升高,从而诱导结直肠癌HT-29细胞铁死亡,这可能是其抗结直肠癌的作用机制之一。

响应面法优化毛大丁草总香豆素提取工艺及其抗氧化作用研究

以毛大丁草为研究对象,选择提取温度、提取溶剂、料液比和提取时间进行单因素试验,在单因素试验基础上,采用Box-Behnken响应面法优化其总香豆素提取工艺,并测定不同产地毛大丁草总香豆素提取率及评价其体外抗氧化活性。结果表明,其最佳提取工艺为提取温度85℃,乙醇体积分数60%,料液比1∶40(g/mL),提取时间60 min。不同产地中清除率最高的为广西百色市样品,IC 50为0.36μg/mL;最低的是贵州黔南州样品,IC 50为121.43μg/mL。不同产地兰香草总黄酮具有一定的总抗氧化能力,能够有效地清除DPPH自由基,效果弱于同浓度条件下V C。经验证该工艺合理、简便,总香豆素提取率可达1.66%。

消瘤藤总香豆素通过诱导铁死亡抑制小细胞肺癌H1688细胞增殖

目的研究消瘤藤总香豆素(total coumarins from Pileostegia tomentella,TCPT)通过诱导铁死亡抑制小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)H1688细胞增殖的机制。方法采用梯度浓度的TCPT处理SCLC细胞H1688后,CCK-8法检测TCPT对细胞增殖的抑制作用;利用透射电镜观察给药后线粒体形态学变化;二氯荧光素(DCFH-DA)荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平;BODIPY 581/589 C11探针检测细胞内脂质过氧化物的生成能力;Western blot检测细胞中铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、Kelch样环氧氯丙胺相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein,KEAP1)、核因子E2相关因子2(nuclear factor E2 related factor 2,NRF2)、铁蛋白重链1(ferritin heavy chain 1,FTH1)的表达水平。结果TCPT干预SCLC细胞H1688后,对细胞增殖有明显抑制作用(P<0.05,P<0.01)。透射电镜下可见TCPT引起SCLC铁死亡形态学变化。TCPT可有效提高细胞内ROS和脂质过氧化物水平。H1688中铁死亡标志蛋白GPX4、NRF2、FTH1的表达下调而KEAP1的表达上调,差异有统计学意义(P<0.01)。结论PCPT可明显抑制SCLC细胞H1688增殖能力,其机制可能是通过升高细胞内ROS和脂质过氧化水平,最终诱导细胞铁死亡。

3种水提预处理方法对白芷总香豆素提取物的影响

目的考察常温水提、40℃水提、水煎煮对白芷总香豆素提取物的影响。方法分别采用乙醇回流提取和3种水提预处理方法得到提取物Ⅰ~Ⅳ,UV和HPLC法分别测定总香豆素、欧前胡素含有量,比较提取物粉体学性质和溶出度。结果 4种提取物中总香豆素含有量分别为3.98%、6.03%、6.81%、4.46%,欧前胡素含有量分别为0.633%、0.540%、0.465%、0.155%,休止角分别为48.455°、42.587°、42.689°、42.024°,堆密度分别为0.214、0.324、0.316、0.354 g/cm^3。提取物Ⅰ在100 min内的吸湿速率和平衡吸湿量高于其他3种提取物。各提取物在120 min内的累积溶出度均显著高于药材细粉。结论 3种水提预处理方法均可明显改善白芷总香豆素提取物的粉体学性质,并提高药材细粉的溶出度。

蛇床子总香豆素对成骨细胞产生NO,IL-1及IL-6的影响

目的 以新生大鼠颅盖骨成骨细胞为模型 ,观察蛇床子总香豆素对成骨细胞产生NO ,IL 1和IL 6的影响。方法 原代培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞 ,3 H 胸腺嘧啶掺入法测定成骨细胞的增殖 ;Griess试剂法、小鼠胸腺细胞增殖法和用B9细胞作为靶细胞的生物测定法 ,分别检测与蛇床子总香豆素共育的无刺激或受LPS及TNF等刺激的成骨细胞培养上清液中NO ,IL 1和IL 6的含量。结果 蛇床子总香豆素在 0 .0 2 5～ 2 .5mg·L-1的范围内抑制成骨细胞自发地或在LPS及细胞因子刺激下产生NO ,IL 1及IL 6。结论 蛇床子总香豆素的抗骨质疏松作用与其抑制成骨细胞产生NO ,IL 1和IL

蛇床子总香豆素对去卵巢大鼠骨质疏松症的作用

目的 研究蛇床子总香豆素对去卵巢大鼠骨质疏松症的作用。方法 去卵巢诱导大鼠骨质疏松症 ,1 2周后 ,以比色法测定其血清钙、磷的浓度和碱性磷酸酶的活性 ,竞争放射免疫法测定血清中骨钙素、降钙素及雌二醇的浓度 ;QCT法测定大鼠股骨干骺端的骨密度。结果 蛇床子总香豆素能够增加去卵巢大鼠子宫重量 ,血清雌二醇浓度 ,降低血清磷含量和碱性磷酸酶活性 ,增加血清骨钙素、降钙素浓度和股骨干骺端的骨密度。结论 蛇床子总香豆素对去卵巢大鼠骨质疏松症具有防治作用 ,其机制可能是通过抑制骨高转换 。

紫外分光光度法测定川白芷中总香豆素类成分的含量

目的 建立川白芷药材中总香豆素的含量测定方法。方法 采用紫外分光光度法,测定波长30 0nm。结果 线性范围2 .2～11.0 μg·ml-1(r=0 .9999) ,回收率为10 1.32 % ,RSD =3.34% (n =6 )。结论 所用方法准确、快速、重复性好,可用于川白芷药材中总香豆素的测定。

蛇床子素和蛇床子总香豆素对肾阳虚小鼠免疫功能的影响

采用醋酸氢化可的松肾阳虚小鼠模型，观察蛇床子素（ｏｓｔｈｏｌ）和蛇床子总香豆素（ＴＣＲ）对肾阳虚小鼠免疫功能的影响。结果：肾阳虚组与正常对照组比较，腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数、血清溶血素５０％溶血值、脾淋巴细胞３Ｈ－ＴｄＲ掺入数等指标明显降低（Ｐ＜０．０１）；肾阳虚用ｏｓｔｈｏｌ及ＴＣＲ组与肾阳虚小鼠比较，上述各项指标均有显著提高（Ｐ＜０．０５，＜０．０１）。提示ｏｓｔｈｏｌ和ＴＣＲ可以增强肾阳虚小鼠的免疫功能。

蛇床子总香豆素对激素致大鼠骨质疏松的骨密度影响

用骨密度测定来探讨蛇床子总香豆素（TCCM）对激素所致雄性大鼠骨代谢变化的影响。结果表明：与对照组比较，激素组大鼠股骨近段、中段和远段的骨密度（BMD）分别减少了12．4％（P＜0.05）、13．9％（P＜0.05）和11．9％（P＜0.05）；与激素组相比，预防组大鼠股骨近段、中段和远段的BMD分别增加了25．9％（P＜0．01）、34．4％（P＜0．01）和30．6％（P＜0．01）。提示，TCCM能预防激素所致的骨质丢失。

木薯皮总香豆素活性物质超声波提取工艺优化

为了能充分提取和利用木薯皮香豆素活性物质,研究了超声波提取木薯皮总香豆素的工艺。通过单因素试验和Box-Behnken响应面设计优化试验确定了超声波辅助乙醇提取木薯皮中总香豆素活性物质的最优工艺条件,并比较了超声波提取与传统溶剂浸提的提取效果。试验结果表明:超声波辅助乙醇提取木薯皮中总香豆素活性物质的最优工艺条件为:乙醇体积分数95%,超声波功率550 W,提取时间90 min,提取温度60℃,液料比12 mL/g,在此工艺条件下,木薯皮提取物的总香豆素平均质量比为2.48 mg/g。影响总香豆素含量的4个因素的显著程度依次为:超声波功率、提取温度、提取时间、液料比。与溶剂浸提法(提取时间360 min,液料比16 mL/g,总香豆素2.14 mg/g)相比,超声波提取法具有提取速度快、总香豆素含量高、提取物活性好、溶剂用量少等明显优势。

无梗五加果中总香豆素和6,7-二甲氧基香豆素的含量测定

目的测定无梗五加果中总香豆素及6，7-二甲氧基香豆素的含量。方法以东莨菪内酯为对照品，采用分光光度法，于348nm处测定总香豆素含量。采用HPLC法测定6，7-二甲氧基香豆素含量。色谱柱为Hypersil BDS C18（4．6mm×250mm，5 μm），流动相为甲醇-磷酸水溶液（pH3．0）-乙腈-四氢呋喃（体积比为15：77：6：2），检测波长为340nm。结果总香豆素质量浓度在3．44～12．9mg·L^-1（r=0．9992）内、6，7-二甲氧基香豆素质量浓度在1～40mg·L^-1（r=0．9999）内线性关系良好；平均回收率分别为100．6％、97．7％；总香豆素和6，7-二甲氧基香豆素的质量百分含量分别为0．12％、0．0037％。结论方法准确、可靠，可为无梗五加果的质量控制提供参考依据。

秦皮总香豆素降低小鼠急性高尿酸血症血尿酸水平及机理研究

目的:研究秦皮总香豆素对高尿酸血症小鼠血尿酸水平的影响,并初步探讨其作用机理。方法:采用氧嗪酸钾腹腔注射复制小鼠急性高尿酸血症模型,给予不同剂量秦皮总香豆素(440、220、110mg/kg),观察高尿酸血症小鼠血清尿酸水平及肝脏黄嘌呤氧化酶、鸟嘌呤脱氢酶和腺嘌呤脱氢酶水平。结果:秦皮总香豆素组小鼠的血清尿酸值明显低于模型组,其中以大、中剂量组为佳;对黄嘌呤氧化酶的活性有明显的抑制作用;而对小鼠鸟嘌呤脱氢酶和腺嘌呤脱氢酶的影响无统计学意义。结论:秦皮总香豆素能明显降低高尿酸血症小鼠的血尿酸水平,其机理可能和抑制黄嘌呤氧化酶的活性有关。

白芷新型饮片中总香豆素与欧前胡素的含量测定

目的通过测定白芷新型饮片中总香豆素、欧前胡素的含量以评价其质量。方法采用紫外分光光度法测定总香豆素的含量,高效液相色谱法测定欧前胡素的含量。结果不同类型的各白芷新型饮片总香豆素含量在0.99%～1.4%之间,平均为1.05%;欧前胡素含量在0.11%～0.18%之间,平均为0.138%;传统饮片总香豆素含量为0.75%,欧前胡素含量为0.07%。结论为白芷新型饮片质量标准的制定提供了参考依据。

前胡中总香豆素的含量测定

应用紫外分光光度法对十一个品种、不同产地的25个前胡样品进行了总香豆素含量测定,最大吸收波长在322±1nm处,平均回收率99.18％,变异系数2.08％。

蛇床子素和蛇床子总香豆素对肾阳虚大鼠血清甲状腺激素和促甲状腺激素的影响

采用醋酸氢化可的松造成肾阳虚模型大鼠，以蛇床子素（ｏｓｔｈｏｌ，ＯＳＴ）和蛇床子总香豆素（ｔｏｔａｌ－ｃｏｕｍａｒｉｎｓ，ＴＣＲ）给药，测定大鼠血清促甲状腺激素（ＴＳＨ）和三种甲状腺激素Ｔ３、反Ｔ３（ｒＴ３）及Ｔ４的浓度。结果，肾阳虚模型大鼠与正常大鼠比较，ＴＳＨ、Ｔ３、ｒＴ３和Ｔ４都显著降低（Ｐ均＜０．０１）；用药大鼠与肾阳虚模型大鼠比较，上述４项指标都有显著性提高（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）。提示ＯＳＴ和ＴＣＲ可以提高肾阳虚模型大鼠的腺垂体－甲状腺轴功能。

补骨脂总香豆素对哮喘大鼠血清cGMP/cGMP的影响

目的观察补骨脂总香豆素对卵蛋白致敏哮喘大鼠血清cAMP/cGMP的影响,探讨其平喘作用机制与cAMP/cGMP相关性。方法哮喘实验动物模型采用卵蛋白过敏性哮喘大鼠;cAMP、cGMP的测定:采用酶联免疫法(ELISA法)。结果卵蛋白致敏哮喘大鼠血清cGMP含量无明显变化,而cAMP含量有降低的趋势;补骨脂各组对哮喘大鼠血清cGMP含量无明显影响,但明显提高哮喘大鼠血清cAMP含量,以补骨脂黑色粘稠物作用最为明显。哮喘大鼠血清cAMP/cGMP比值有降低的趋势,给总香豆素后,血清cAMP/cGMP比值明显增加,其中以补骨脂黑色粘稠物作用最为明显。结论补骨脂总香豆素抗哮喘炎症的作用机制之一,与调节cAMP、cGMP的含量及其比值变化有关。

紫外分光光度法测定川明参中总香豆素类成分含量

目的建立川明参药材中总香豆素含量测定方法。方法采用紫外分光光度法,以8-羟基-5-甲氧基补骨脂素为对照品,检测波长为273 nm。结果在1.53～7.65μg/ml质量浓度范围内,对照品8-羟基-5-甲氧基补骨脂素的吸光度和浓度线性关系良好,r=0.9991。平均回收率为101.8%,RSD=2.37%(n=6)。结论该法简便,可靠,为有效控制川明参药材质量奠定了一定的基础。

响应面法优化藏药毛莲蒿总香豆素的超声辅助提取工艺

通过单因素实验法考察乙醇体积分数、浸提时间、浸提温度、料液比及超声时间对毛莲蒿总香豆素得率的影响,并通过Box-Behnken试验设计优化毛莲蒿总香豆素的超声辅助提取工艺.结果表明,毛莲蒿总香豆素的最佳提取工艺为乙醇体积分数72%,浸提时间71min,浸提温度68℃,料液比1∶58(g/mL)及超声时间30min,在该条件下毛莲蒿总香豆素的平均得率为3.45%.优化后的提取工艺方便、可行,可为毛莲蒿中总香豆素类化合物的提取提供参考.

蛇床子总香豆素止喘作用机理探讨

蛇床子总香豆素具有松驰由药物引起的支气管痉挛和直接扩张支气管的作用,这一作用均能被β-受体阻滞剂心得安所阻断。此外,蛇床子总香豆素对麻醉动物无加快心率和升高血压的作用。提示蛇床子总香豆素的解痉作用可能是通过兴奋β_2-受体所致。

四方藤中总香豆素的提取工艺研究

目的:优选四方藤中总香豆素的提取工艺条件。方法:采用紫外分光光度法,以总香豆素的提取率为指标,通过单因素和正交试验,考察乙醇浓度、料液比、提取时间、提取次数对四方藤中总香豆素提取率的影响,确立最佳的提取工艺条件。结果:四方藤中总香豆素最佳提取工艺为:用料液比为1∶16的50%乙醇回流提取2次、每次2 h,在此工艺条件下,总香豆素的提取率达11.56%。结论:该工艺简单实用,是四方藤中提取总香豆素的有效方法,可为其进一步的工业化生产提供参考依据。