贝莱斯芽孢杆菌总RNA提取的Trizol改良法

贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)是在农业、环境和发酵工业等领域具有重要应用潜力的细菌。但芽孢杆菌属细菌具有较厚的细胞壁且分泌蛋白多,常规方法难以抽提到高质量的总RNA。因此,建立和优化简便有效的贝莱斯芽孢杆菌总RNA提取方法,将为B.velezensis基因表达和功能研究提供重要的技术支撑。通过优化传统Trizol法,对菌体培养条件、菌体洗涤次数、液氮冷冻处理和溶菌酶裂解菌体方法进行改良,建立了一种简便有效的B.velezensis总RNA提取方法。

利用TRIzol 试剂和液氮提取大鼠胰腺高质量总RNA

目的建立胰腺高质量总RNA快速、经济、稳定的提取方法。方法应用TRIzol试剂和液氮提取大鼠胰腺总RNA,通过总RNA含量和A260/280比值的测定及10 g/L非变性琼脂糖凝胶电泳评估总RNA的质量,并用RT-PCR检测大鼠胰岛素1、胰高血糖素、胰α-淀粉酶和β-actin的表达。结果利用TRIzol和液氮提取的大鼠胰腺总RNA量可达到3～6μg/mg胰腺组织,A260/280比值在1.75～1.89之间。在10 g/L非变性琼脂糖凝胶电泳时,均可见28S及18S条带,并且在28S、18S条带间可见明显的云雾状阴影。大鼠胰岛素1、胰高血糖素、胰α-淀粉酶、β-actin RT-PCR产物电泳结果显示均有清晰的条带。结论应用TRIzol试剂和液氮成功地提取了大鼠胰腺高质量的总RNA,后者可用于RT-PCR研究。

富含RNA酶组织总RNA提取方法的改良

目的:简化富含RNA酶组织RNA的抽提方法. 方法:健康SD大鼠10只,随机分成液氮组及改良组,每组5只,用乙醚麻醉后,分别取胰腺组织约50 mg,液氮组组织迅速放入液氮中,改良组组织放入一预装RNAguard 100μL的1.5 mL EP管中,放入-70℃冰箱保存.液氮组将胰腺组织从液氮中取出,立即放入预装适量液氮的研钵中迅速研磨至粉末(研磨过程中始终保持研钵内有适量液氮),移入另一1.5 mL EP管中,加入1 mL Trizol, 按Trizol法提取总RNA;改良组取眼科剪在酒精灯上消毒后冷却,从-70℃冰箱中取出冻存的组织,在冰盒上,加入1 mL Trizol,用眼科剪迅速剪切3 min(剪切过程组织不解冻),剧烈振荡混匀30 s,以后步骤按Trizol法. 结果:改良法抽提RNA的效果与液氮研磨法无显著差异(P>0.05),但方法简单方便. 结论:改良法提取RNA简单方便,结果稳定。

一种改良的橡胶树胶乳总RNA提取方法

橡胶树胶乳总RNA提取过程中 ,常常遇到胶乳收集需要时间长 ,需去除橡胶粒子才能提取RNA等困难 ;利用常规方法提取的胶乳总RNA通常产量较低、易降解、体外翻译困难等。本文介绍一种改进的LiCl沉淀法 ,不需预先去除橡胶粒子 ,得到的总RNA样品经紫外分光光度计检测和 1.2 %甲醛变性凝胶电泳分析证明 ,具有较高的纯度和完整性 ,且产量较高 ,可满足多数分子生物学实验的需要。

一种适合沙棘叶片总RNA的提取方法

针对沙棘组织中多糖、多酚、粗蛋白等次生代谢产物含量高的特点,采用RNAplant Plus总RNA提取试剂改良法,成功地提取了沙棘叶片总RNA。所提取的沙棘叶片总RNA凝胶电泳显示28s和18s条带清晰完整,A260/A280和A260/A230比值分别为1.79和2.07,且平均得率为298.1μg/g(鲜叶)。试验结果表明,RNAplant Plus总RNA提取试剂改良法具有方便快捷、提取RNA纯度高、有效排除多种次生代谢产物影响的特点,用该方法提取的沙棘叶片总RNA可以用于后续的分子生物学研究中。

葡萄总RNA提取方法的研究

针对葡萄组织中多酚、多糖类物质含量较高的特点,比较了改进SDS/酚法、异硫氰酸胍法和市售总RNA提取试剂盒等不同的提取方法,3种改进方法均能从葡萄幼嫩叶片中提取到总RNA。其中改进的SDS/酚法能有效抑制酚类物质和多糖对总RNA提取的影响,能够从成熟的叶片和完熟果实的果皮中获得质量高、完整性好的总RNA,28SrRNA亮度约为18SrRNA的2倍,A260/A280介于1.8～2.0之间,A260/A230大于2.0,且总RNA产率高,其中幼叶总RNA产率为261.20μg/g,成熟叶产率为191.40μg/g,完熟果皮产率为31.50μg/g,完全适于进行DDRT-PCR、Northernbolt和cDNA文库构建等研究。且该方法具有快速、简单、有效的特点。

非洲菊花瓣总RNA提取方法的改进

利用异硫氰酸胍一步法和植物总RNA提取试剂盒 (RNeasyPlantMiniKit)提取非洲菊 (Gerberahy brida)花瓣中总RNA时存在多糖的干扰。实验中利用异硫氰酸胍一步法提取总RNA ,在RNA沉淀后 ,再次加入适量变性液 ,冻融 2次 ,再加热至 45℃使RNA完全溶解 ;试剂盒提取时 ,适当延长各提取步骤的离心时间 ,并增加DEPCH2 O溶解RNA的时间。通过以上操作方法的改进可排除多糖的干扰 ,得到高质量的总RNA。为进一步利用Northern杂交技术研究非洲菊中花色素苷基因的表达 ,进行花色改良提供了方便、有效的实验手段。

四种副溶血弧菌总RNA提取方法的比较

副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种革兰氏阴性嗜盐菌。提取高质量的RNA是研究副溶血弧毒力基因表达与其致病性和环境适应性的基础。本研究分别用SDS法、Trizol法,PureLinkTM RNA Mini Kit和Uniq-10柱式Trizol总RNA抽提试剂盒提取六株副溶血弧菌的总RNA,用普通琼脂糖凝胶电泳和核酸测定仪检测RNA的质量,并用RT-PCR法对四种提取方法进行比较。研究结果表明,Trizol法和Pure-LinkTM RNA Mini Kit简单快捷,提取的总RNA完整性好,纯度高,可用于后续实验的分子生物学研究;而Trizol法更适用于普通实验室细菌RNA的提取。

草莓果实总RNA提取方法的比较

为建立草莓果实总RNA的提取方法,针对草莓成熟果实中富含多糖、多酚和色素等次级代谢物质,总RNA提取难度大的特点,比较改良的EASYspin植物RNA提取试剂盒法和改良的CTAB法提取草莓果实中总RNA的质量。通过琼脂糖凝胶电泳和核酸蛋白测定仪(Nano Drop 2000)检测2种方法提取总RNA的浓度、纯度及完整性等。改良的EASYspin植物RNA提取试剂盒法和改良的CTAB法都能够完成草莓果实总RNA的提取,电泳检测在28S和18S处呈2条清晰的条带,OD260/OD280值和OD260/OD230值均在2.0左右;改良的EASYspin植物RNA提取试剂盒法成本较高,且提取总RNA质量劣于改良的CTAB法,但是EASYspin植物RNA提取试剂盒法操作简便,安全可靠,节省时间。通过RT-PCR验证,2种方法所获得的草莓果实总RNA质量较好,可达到分子生物学试验对RNA质量的要求。

罗布麻总RNA提取方法比较研究

以Trizol法、改进SDS法及RNA plant plus Reagent试剂盒法提取罗布麻的总RNA,并通过紫外分光光度法和凝胶电泳检测对其提取效果进行比较分析,以筛选出罗布麻总RNA最佳提取方法。结果表明:Trizol法无法有效获得罗布麻总RNA,有较为显著的降解现象;改进SDS法提取的罗布麻RNA总量较少、浓度低,且试验重复性差;RNA plant plus Reagent试剂盒法提取的RNA质量好,纯度高,完整性强,可直接作为后续相关分子生物学试验材料。

红花花冠总RNA提取方法的筛选研究

筛选一种红花花冠总RNA提取方法。采用植物总RNA提取试剂盒法、传统佰烈法、改良Trizol法提取红花花冠总RNA。凝胶电泳、RT-PCR、紫外分光光度法检测三种方法提取所得总RNA，并将筛选得到的方法应用于红花愈伤组织总RNA的提取。改良Trizol法提取得到的红花花冠总RNA凝胶电泳检测可见清晰的三条带，RT-PCR结果凝胶电泳检测可见清晰的一条带，紫外分光光度法检测符合要求，其余两种方法均不符合要求。改良Trizol法应用于红花愈伤组织总RNA提取，检测结果均符合要求。改良Trizol法可用于红花花冠总RNA提取，提取所得红花花冠总RNA可用于后续分子生物学实验。

铁观音茶树叶片总RNA提取方法研究

铁观音茶树不同生育时期叶片为材料，采用Tripure试剂法、中能博彩试剂盒与Tripure试剂相结合的方法提取茶树叶片总RNA。结果表明，Tripure试剂法比结合法更适宜提取铁观音茶树RNA，该方法提取的RNA28S、18S和5SrRNA条带清晰明亮；OD_260／OD_280值在1．7～2．0之间，说明该方法提取的RNA完整性和纯度好，可用于进行后续分子生物学实验。

适合金银花不同组织总RNA提取方法的筛选

对Trizol法、CTAB法、十二烷基磺酸钠(SDS)法、多糖多酚试剂盒法、改良多糖多酚试剂盒法5种RNA提取方法提取金银花叶片、茎、根、花蕾组织RNA的效果进行比较,以期获得质量较好的金银花不同器官的RNA,为后续分子生物学试验奠定基础。结果表明:改进后的多糖多酚试剂盒法能够克服金银花中RNA提取难度大的问题,能够提取到质量、产量都很高的RNA,且稳定性好、无DNA污染,可以满足进一步的半定量反转录PCR(RT-PCR)等试验需要。

蒙古马血液中总RNA提取方法的比较和分析

为了筛选适宜于提取蒙古马血液总RNA的方法,试验采用TRIzol法和试剂盒法测定了新鲜血液和冻存血液在260,230,280 nm的吸光度及RNA纯度和浓度。结果表明:在新鲜和冻存血液中,用TRIzol法提取的RNA浓度明显高于试剂盒法,但用试剂盒提取的RNA纯度高于TRIzol法;新鲜血液中总RNA的提取量、浓度及纯度比冻存血液好。

灰毡毛忍冬花蕾总RNA提取方法的研究

目的:探讨灰毡毛忍冬花蕾总RNA提取的有效方法。方法:采用SDS法、Trizol法、普通试剂盒法、改良CTAB法、多糖多酚试剂盒法、改良多糖多酚试剂盒法提取灰毡毛忍冬花蕾总RNA并比较其效果。结果:SDS法、Trizol法和普通试剂盒法均不适用于本样品总RNA的提取;改良CTAB法、多糖多酚试剂盒法、改良多糖多酚试剂盒法均能有效去除蛋白质、多糖多酚及DNA,OD260/280为1.86-2.00,OD260/230为1.96-2.63,电泳条带清晰,RNA完整性好,且通过RT-PCR扩增能获得特异性条带。但以多糖多酚试剂盒法提取效果最佳。结论:改良CTAB法、多糖多酚试剂盒法、改良多糖多酚试剂盒法均适合灰毡毛忍冬花蕾总RNA提取,完全满足后续RT-PCR等分子生物学研究。

红花花瓣总RNA提取方法的比较研究

红花花瓣富含多糖、多酚和花色素苷等次生代谢产物,严重影响花瓣总RNA的提取。为探索适合红花花瓣总RNA的提取方法,以4种红花不同时期的花瓣为材料,通过对4种RNA提取方法,即RNA提取试剂盒、RNAiso Plus试剂法、改良的CTAB法和SDS法进行比较研究。结果表明:RNAiso Plus试剂法效果最好,提取的总RNA完整性好,纯度高、浓度高。通过RT-PCR验证,所提取的RNA达到基因克隆和实时定量PCR等分子生物学实验要求。

猪囊尾蚴总RNA的提取与mRNA的分离

目的 为比较对猪囊尾蚴总RNA提取与mRNA分离方法的优点。方法 采用Promega公司的SV总RNA分离体系、RNAgents总RNA分离体系和BioDev-Tech的TRIZOLLS试剂,对猪囊尾蚴总RNA进行了提取;用Promega的PolyATtractmRNA分离体系和Amersham的Quickprep微量mRNA纯化试剂盒对mRNA进行分离。结果 表明经改良的TRIZOLLS试剂,提取猪囊尾蚴RNA效果好,而PolyATtractmRNA分离体系分离的mRNA含量高,纯度好。结论 所分离的mRNA适合于构建cDNA表达文库。

三种滇龙胆叶片总RNA提取方法的比较

分别使用传统异硫氰酸胍法和Takara公司的两种试剂盒来提取滇龙胆幼叶的总RNA,比较所提取RNA质量和纯度.结果表明,三种方法各有优缺点,但MiniBEST Plant RNA Extraction Kit试剂盒提取的RNA质量好、纯度高、提取效率高,且无基因组污染,优于其他两种方法,而异硫氰酸胍法从经济的角度考虑则最为实惠.

石斛属植物茎部总RNA提取方法的研究

获得快速提取高质量石斛属植物茎总RNA的方法,为深入开展分子生物学研究奠定基础。采用7种方法提取铁皮石斛茎总RNA,凝胶电泳和紫外分光光度法检测质量,筛选最佳方法,并对方法进行验证。结果显示,经过比较,用改良华越洋多糖多酚试剂盒法(M7)提取的铁皮石斛茎总RNA的完整性、浓度和纯度均最好。用M7提取铁皮石斛、金钗石斛、鼓槌石斛、球花石斛和重唇石斛的茎总RNA,以及提取不同生长条件(温室和大棚种植)和不同生长时间(大棚生长3个月、1年和2年)铁皮石斛的茎总RNA,所获样品的完整性、浓度和纯度均符合质量要求。M7操作简便,结果重复性好,适于石斛属植物茎总RNA的提取。