鸭腺病毒3型荧光RPA恒温快速检测方法的建立与应用

鸭腺病毒3型(Duck adenovirus type 3,DAdV-3)是我国近年来新发的禽腺病毒,致病力较强,已经严重影响到鸭养殖业。为实现对DAdV-3的快速检测,以DAdV-3的Hexon基因为靶基因,设计特异性重组酶聚合酶扩增(Recombinase polymerase amplification,RPA)引物和探针,并构建重组标准质粒命名为DAdV-H-18T,优化RPA反应条件后,建立DAdV-3的荧光RPA恒温快速检测方法。结果显示,该检测方法最佳反应条件为38℃、18 min;特异性强,与其他常见鸭病病原如鸭肝炎病毒、鸭坦不苏病毒等均无交叉反应。对重组质粒DAdV-H-18T的最低检测限为1 copy/μL;采用建立的RPA检测方法和qPCR对55份鸭组织临床样本进行检测,阳性率分别为65.4%、50.9%,检测符合率为92.7%。研究建立的DAdV-3荧光RPA方法,检测速度快,敏感性高,特异性强,为该病临床快速检测提供了有力工具。

小鹅瘟病毒荧光RPA恒温快速检测方法的建立与应用

为快速检测小鹅瘟病毒,以小鹅瘟病毒VP3基因保守片段为靶点,利用重组酶聚合酶扩增技术(RPA)建立了一种准确高效的小鹅瘟病毒RPA恒温快速检测方法,对检测方法的灵敏度、特异性进行评价,并与传统PCR和Real-time PCR方法进行比较。结果表明,该检测方法可检测到10 copies/μL的病毒核酸,具有较高的灵敏度;只特异性地扩增小鹅瘟病毒,而与鹅副黏病毒、鹅源鸭瘟病毒、小鹅流行性感冒病毒、鹅副伤寒病毒、大肠杆菌和曲霉菌均未发生交叉反应,特异性良好;变异系数低于6%,具有很好的重复性;临床样品检测中与Real-time PCR符合率为99%。该方法可以很好地应用于小鹅瘟的大规模临床样本检测,为小鹅瘟病毒的高通量检测和流行病学调查提供技术手段。

4种检测技术对艾滋病合并肺结核的诊断效能比较

目的比较痰涂片抗酸染色镜检(简称"涂片法")、BACTEC MGIT 960液体培养法(简称"MGIT960培养法")、RNA恒温扩增技术快速检测法(简称"TB-SAT法")、Gene-Xpert MTB/RIF检测法(简称"Gene-Xpert法")在进行艾滋病合并肺结核患者痰标本病原学检测中的诊断效能。方法收集2020年1-12月重庆市公共卫生医疗救治中心感染科收治的艾滋病合并肺结核患者107例为研究对象,采集患者的痰标本同时进行4种实验室检测技术检验,比较4种检测技术的诊断效能。结果TB-SAT法阳性率(35.51%)高于涂片法阳性率(30.84%),但差异无统计学意义(χ^(2)=0.764,P=0.382),MGIT960培养法阳性率(51.40%)高于涂片法阳性率(30.84%),差异有统计学意义(χ^(2)=10.246,P=0.001);MGIT960培养法阳性率(51.40%)高于TB-SAT法阳性率(35.51%),差异有统计学意义(χ^(2)=5.496,P=0.019);Gene-Xpert法阳性率(49.53%)低于MGIT960培养法阳性率(51.40%),但差异无统计学意义(χ^(2)=0.075,P=0.078);Gene-Xpert阳性率(49.53%)高于TB-SAT法阳性率(35.51%),差异有统计学意义(χ^(2)=4.302,P=0.038)。涂片法灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为52.72%、92.31%、87.88%和64.87%,与MGIT960培养法Kappa值为0.445,两者一致性中等;TB-SAT法灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为67.27%、98.07%、97.36%和73.91%,与MGIT960培养法Kappa值为0.648,两者具有较高的一致性;Gene-Xpert法灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别90.91%、94.23%、94.34%和90.74%,MGIT960培养法Kappa值为0.851,两者一致性良好。结论Gene-Xpert法的诊断效能较高,并且与MGIT960培养法检测结果具有良好的一致性,建议在诊断艾滋病合并肺结核时优先选用Gene-Xpert法。

应用恒温扩增方法进行诺如病毒检测的研究

目的:找到一种简单、快速、准确的进行病毒性腹泻患者粪便标本中诺如病毒的检测方法,并对此方法进行评价。方法:用恒温快速检测方法进行154例北京地区病毒性腹泻患者粪便标本诺如病毒的检测,同时用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)作对照,评价该方法。结果:在154例病毒性腹泻的病人标本中,采用恒温快速检测方法进行诺如病毒检测,阳性结果61例,阳性率为39.6%,RT-PCR方法进行检测,阳性结果54例,阳性率为35.1%,以RT-PCR为金标准计算,检测灵敏度90.7%(49/54),特异性88%(88/100)。这两组检验结果经过2χ检验,P=0.143,P值>0.05,说明两组结果之间差异无统计学意义,即两种实验方法结果无差异。通过一致性检验显示,KAPPA=0.765,P=0.000<0.05,说明这两种试验方法结果一致性较好。结论:恒温快速检测方法是一种简单、快速、准确的检测诺如病毒的方法,适合临床及流行病学筛查使用。

辽宁省打击“瘦肉精”违法行为配套技术研究进展

"瘦肉精"等动物源性食品安全问题已越来越受到社会广泛关注,打击"瘦肉精"违法犯罪行为已成为刻不容缓的重要工作,也是保障人民群众身体健康的重要职责,其监管配套技术是打击"瘦肉精"违法犯罪行为最为重要的依靠。本文就现阶段辽宁省打击"瘦肉精"违法行为监管技术研究进行探讨,对存在的问题及对策进行简单分析,旨在完善打击"瘦肉精"违法行为配套技术并广泛推广。