基于恒温指数扩增反应高灵敏度检测端粒酶活性

端粒酶延伸产物是具有(ggttag)n重复序列的DNA.设计1条与2个重复序列相匹配的特异性的DNA探针-(ctaacc)2使其与端粒酶延伸产物杂交,形成双链DNA.过量的DNA探针被磁性石墨烯吸附,通过磁分离去除.利用恒温指数扩增反应(IEXPAR)对端粒酶延伸产物捕捉的DNA探针进行快速的扩增.用与双链DNA特异性结合的SYBR Green I染料对扩增产物进行实时荧光检测.在优化条件下,可以检测到低至50个癌细胞中的端粒酶活性.实现了恒温扩增条件下端粒酶活性的高灵敏度检测.

基于DNA“Y”型结构的指数型核酸恒温扩增策略检测microRNA

该文基于“Y”型DNA模板和恒温指数扩增反应(EXPAR)技术的信号放大功能,建立了一种快速低序列依赖性的miRNA检测方法(Y-EXPAR)。以let-7b为检测目标,设计两条部分互补的DNA模板,与目标miRNA共同构成“Y”型结构,能够同时进行双向扩增,反应效率高,反应时间短,并降低了放大性能对模板序列的依赖。方法检出限低至0.3 amol/L(相当于10μL溶液中有1.8拷贝的let-7b),并能区分单碱基差异的let-7家族同源序列。应用于肿瘤细胞裂解液let-7b的检测,POI值与细胞数目对数值呈线性关系,说明Y-EXPAR在实际样品miRNA的检测中具有优势。得益于扩增的高特异性、抗干扰性和低序列依赖性,该方法为miRNA的快速检测提供了新思路,在miRNA相关的疾病研究和临床诊断方面具有良好应用前景。

核酸恒温扩增技术在生物分析检测中的应用

近年来,研究人员致力于发展高效、灵敏检测生物大分子的分析方法,以满足生物分析领域对其越来越高的要求。逐渐发展成熟地核酸恒温扩增技术可实现对生物大分子的高灵敏检测,已经成为生物分析领域研究的重点。因此,本论文根据已开发的核酸恒温扩增技术在生物大分子领域的研究进行综述。

应用单分子触发式级联指数恒温扩增技术检测长链非编码RNA方法的建立

目的建立一种利用核酸恒温指数扩增技术特异性检测长链RNA的高灵敏度检测方法。方法利用恒温指数扩增(EXPAR)反应对所建立的方法进行反应条件的优化,并对该方法的通用性、特异性和灵敏度进行了系统分析。结果单分子触发反应产物可以作为引物触发指数恒温扩增;柔性引物可以提高检测特异性,柔性臂长7nt;单分子触发式级联指数恒温扩增技术能够有效检测出待检样品浓度在10fmol/L^100pmol/L范围内的靶标RNA,线性响应良好(R 2=0.955)。结论单分子触发级联式恒温指数扩增技术可以快速、准确检测长链RNA。