恙虫病东方体混合重组抗原应用于胶体金免疫层析试纸条的制备及效价检测

胶体金免疫层析试纸条具有携带方便、操作简单且敏感性、特异性高等特点,近年来开始广泛应用于疾病的诊断。为了实现对恙虫病的快速检测,笔者利用双抗原夹心法,以胶体金标记恙虫病东方体56 kDa混合重组蛋白,56 kDa混合重组蛋白和兔抗恙虫病东方体多克隆抗体分别喷在检测线及质控线上,制备了用于检测恙虫病东方体抗体的胶体金免疫层析试纸条。本研究制备的胶体金试纸条检测限为61 ng/mL,和疟疾、伤寒、血吸虫、出血热以及斑点热等阳性血清无交叉反应,特异性达90%(54/60),检测的敏感性为91.96%(103/112),在4℃下可稳定保存6个月。本试纸条能够应用于人体血清中恙虫病东方体总抗体的检测。

恙虫病东方体与莫氏立克次体双重实时荧光PCR检测方法建立及其在鼠类检测中的应用

目的建立一种基于TaqMan-MGB探针技术的双重实时荧光PCR检测方法,用于鼠类携带恙虫病东方体和莫氏立克次体的检测工作开展。方法依据恙虫病东方体56-kDa蛋白基因序列设计恙虫病东方体引物及Taqman-MGB探针,参照文献合成莫氏立克次体引物及Taqman-MGB探针,建立恙虫病东方体及莫氏立克次体双重实时荧光PCR检测方法。结果利用本文建立的双重实时荧光PCR检测方法对288份鼠肺脏组织样品进行检测,检测结果与普通PCR检测结果一致。结论本文建立的双重实时荧光PCR检测方法,具有较好的特异性、敏感性及重复性,满足国境口岸鼠类携带恙虫病东方体及莫氏立克次体的监测检测工作需要。

基因芯片技术检测恙虫病东方体DNA的方法建立

目的 研制用于东方体检测的基因芯片 ,建立快速、灵敏、特异的恙虫病诊断方法。方法 根据东方体 5 6kD外膜蛋白基因序列 ,设计群特异性引物及探针 ,制备寡核苷酸芯片。用Cy3标记的引物 ,利用不对称PCR技术扩增DNA片段 ,将扩增的DNA片段与芯片上的探针杂交 ,用荧光扫描仪检测并分析信号。结果 建立的基因芯片能够检测恙虫病东方体标准株DNA的特异性荧光信号。具有特异、灵敏、快速的优点。结论 成功制备的基因芯片有望应用于恙虫病东方体多种样本的检测 ,为恙虫病提供最为理想的诊断方法。

恙虫病东方体目视LAMP现场化检测方法的建立

目的建立基于“染料-蜡丸”的目视LAMP检测恙螨中恙虫病东方体的方法,为恙虫病的防治提供新工具。方法选择Ot GroEL基因作为检测靶序列,在线设计并合成LAMP引物。构建r Ot-GroEL重组质粒作为阳性对照。建立基于SYBR Green I的“染料-蜡丸”目视LAMP,并联合便携式LAMP仪使其利于现场应用。结果新设计的引物针对Ot GroEL基因的237 bp靶区域,所构建的重组质粒r Ot-GroEL测序结果正确。在便携式LAMP仪上运用“染料-蜡丸”目视LAMP法,其检测下限为1×10^2拷贝质粒。结论成功建立了一种可与便携式LAMP仪联合使用的检测恙螨体内恙虫病东方体的“染料-蜡丸”目视LAMP法。

恙虫病实验室检测规范专家共识

恙虫病,又名丛林斑疹伤寒,是主要经恙螨幼虫叮咬传播,由恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi)感染引起的,并以发热、焦痂或溃疡、淋巴结肿大及皮疹为主要临床特征的一种自然疫源性疾病,主要流行于东亚和东南亚地区。恙虫病的临床症状不典型,很容易被误诊和漏诊。中国医药生物技术协会生物诊断技术分会和中国微生物学会人兽共患病病原学专业委员会的专家学者参考国际相关指南,梳理国内外恙虫病精确、快速实验室检测相关进展,总结经验,形成了本共识。旨在明确实验室检测在恙虫病确诊方面的作用,为恙虫病的早期精准和快速实验室诊断提供支持,从而为临床医生及时使用有效抗生素干预治疗和预防并发症提供有益帮助。

江西省啮齿动物携带立克次体分子流行病学研究

目的调查江西省部分县区啮齿动物携带的立克次体。方法在江西省南丰县、铜鼓县、上犹县、浮梁县、上高县、上饶市广信区捕获啮齿动物,运用形态学结合分子生物学方法鉴定其种类。采用巢式PCR方法检测捕获的啮齿动物的脾脏组织样本中的柯克斯体属、斑点热群、东方体属和无形体属立克次体。结果捕获啮齿动物6种共393只,包括黑线姬鼠、褐家鼠、黄毛鼠、黄胸鼠、社鼠和臭鼩鼱,黑线姬鼠为优势鼠种(311/393)。从19只黑线姬鼠检出柯克斯体(6.11%),从2只黑线姬鼠检出东方体(0.64%),从1只黑线姬鼠检出斑点热群立克次体(0.32%)。对扩增阳性基因片段测序和对获得基因序列做同源性比对,结果浮梁县黑线姬鼠检出新塔拉萨维奇立克次体、恙虫病东方体、贝氏柯克斯体;铜鼓县和上饶市广信区黑线姬鼠检出贝氏柯克斯体;南丰县黑线姬鼠检出恙虫病东方体。除黑线姬鼠外,其它5种啮齿动物均未检出立克次体。结论江西省部分地区的黑线姬鼠携带贝氏柯克斯体、新塔拉萨维奇立克次体、恙虫病东方体等立克次体病原体,人群存在相关立克次体感染的风险,疾控和医疗机构应加强立克次体病的监测。

恙虫病东方体超快速检测方法的建立及评价

目的:建立一种可以在基层医疗机构使用的超快速恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi,Ot)核酸检测方法。方法:利用实时荧光定量PCR技术(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR),通过比对分析数据库中恙虫病东方体全基因组序列确定靶基因,设计qPCR特异性引物和探针,优化反应体系和反应程序,建立超快速多重qPCR检测方法;利用经过数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)定量后的样本核酸作为标准物质,评价该方法的灵敏度、重复性以及最低检出限;通过比较基因组学分析,验证恙虫病东方体与同科属的易引起类似症状的病原体的特异性,通过检测24种(共45例)易引起类似症状的其他病原体核酸评价特异性;利用116例来源于云南省红河州金平县人民医院和复旦大学附属华山医院的临床全血样本,通过四格表卡方检验对多重qPCR超快速检测方法和传统qPCR检测方法的检测结果进行比较,采用Kappa一致性检验分析方法间的一致性。结果:恙虫病东方体与同科属的易引起类似症状的病原体的同源性较低,与常见的易引起类似症状的24种病原体无交叉反应,具有很好的特异性;最低检出限为156 copies/mL;具有很好的重复性,检测Ct值的变异系数≤3.13%;多重qPCR超快速检测方法和传统qPCR检测方法同时检测116例临床全血样本,检测结果的差异无统计学意义(P>0.05),两种方法具有很高的一致性(Kappa=0.9392,P<0.001),总符合率97.42%(CI:92.67%~99.12%),检测时间可缩短至30 min。结论:建立的多重qPCR超快速检测方法具有良好的灵敏度、重复性和特异性,可以快速诊断临床全血样本中的恙虫病东方体核酸,在基层医疗机构实现及时快速诊疗。

云南省泸西县啮齿动物携带立克次体调查

目的调查云南省泸西县啮齿动物携带恙虫病东方体、无形体和埃立克体的状况,了解该类病原体在当地自然界中的保存状况和基因特征。方法用鼠笼和鼠夹在云南省泸西县捕鼠,将捕获的动物种类鉴定后解剖取脾脏,活鼠取血。采用巢式PCR扩增脾脏的恙虫病东方体groEL基因,无形体和埃立克体的16S rRNA基因特异片段;测定PCR扩增阳性产物的DNA序列,对获得序列进行序列比对和系统进化分析。IFA法检测鼠血清中恙虫病东方体IgG抗体。结果在泸西县共捕获啮齿动物10种225只。其中黄胸鼠36.89%(83/225)、大绒鼠35.11%(79/225)和中华姬鼠13.78%(31/225)为优势鼠种。获得鼠血清85份。鼠脾脏中检测到5株东方体groEL基因阳性标本,带毒鼠种为黄胸鼠2.41%(2/83)和大绒鼠3.80%(3/79)。同源性比较显示,这5株东方体的相似性在99.02%~100%之间,他们分别与GenBank中已知立克次体序列的相似性在98.75%~100%。系统发生树显示,5株OT与来自日本、泰国和中国安徽的菌株位于同一分支。3份16S rRNA阳性标本,其中1份埃立克体阳性,来源于大绒鼠;1份沃尔巴克氏体和1份巴尔通体阳性均来源于黄胸鼠。无形体均为阴性。埃立克体株序列比对显示与来自美国、中国和巴西的埃立克体基因同源性为98.0%~100%,并与分离自美国野外工作者皮肤的伊文氏埃立克体在同一分支。鼠血清恙虫病IgG抗体阳性7份,阳性率8.24%(7/85)。结论该地区存在以黄胸鼠和大绒鼠为主要宿主的恙虫病自然疫源地。埃立克体、巴尔通体和沃尔巴克氏体在啮齿动物中也存在感染,需注意防控。

天津市农牧地区2007-2009年莫氏立克次体、横赛巴尔通体、恙虫病东方体血清流行病学调查

目的 分析天津市农牧地区高危人群蚤传及螨传立克次体病流行趋势.方法 2007-2009年,利用现场流行病学调查方法,以农户为单位随机调查天津地区直属的8个区（县）从事农牧业的人群,并现场采集886份血液标本,采用微量间接免疫荧光检测人群莫氏立克次体、横赛巴尔通体及恙虫病东方体特异IgG抗体,并分析比较不同年份、地区、性别及年龄组人群抗体阳性率变化趋势.结果 3种立克次体抗体阳性率均呈上升趋势.其中莫氏立克次体阳性率变化范围为5.0%～58.2%;横赛巴尔通体为2.6%～14.5%;恙虫病东方体为1.8%～39.8%.3种病原体阳性率较高的地区主要集中在天津市东南部及中部近海低海拔地区.结论 天津地区农牧人群普遍存在蚤传及螨传立克次体感染,并且有逐年上升趋势.

立克次氏体传染病

山东地区恙虫病30例临床分析；孕产妇合并恙虫病4例误诊分析；秋冬型恙虫病30例肾损害临床分析；静注氯霉素对恙虫病血液学改变的影响；恙虫病125例临床分析；小儿恙虫病34例诊断体会；实时荧光定量PCR检测恙虫病东方体；中原地区恙虫病血清学检测报告；

恙虫病东方体环介导等温扩增可视化快速检测方法的建立

目的利用环介导等温扩增(LAMP)可视化检测技术,建立一种灵敏、特异和简便的恙虫病检测方法。方法利用LAMP在线引物设计软件Primer Explorer V4,以恙虫病东方体热休克蛋白groEL基因作为靶序列,设计扩增引物,优化反应条件。利用恙虫病东方体标准株评估灵敏度和特异度;收集42份恙虫病血样,分别采用LAMP、普通PCR和实时荧光定量PCR方法进行验证。结果建立的LAMP方法可在61~65℃80 min内完成恙虫病东方体的快速检测,最低检测限为10拷贝/μL,高于普通PCR方法2个数量级,高于荧光定量PCR方法1个数量级;对8种常见的自然疫源性疾病病原体检测均为阴性,特异度为100%;对42份恙虫病血样采用3种方法检测,阳性率一致,均为21.4%(9/42)。结论本研究建立的恙虫病东方体LAMP可视化检测反应快速,操作简便,灵敏特异,可在基层医疗卫生机构运用推广。

恙虫病的免疫机制研究进展

恙虫病(scrub typhus)是经恙螨叮咬感染恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi)引起的一种自然疫源性疾病,在日本、东亚、澳大利亚北部、太平洋地区西部和西南部、印度洋地区广泛分布,发热、皮疹、焦痂、淋巴结肿大为其主要临床表现。恙虫病东方体主要感染人的内皮细胞,也可感染树突细胞、巨噬细胞、分叶核白细胞、淋巴细胞,并在细胞内专性寄生。现对恙虫病东方体致病机理的研究进展进行简要综述,以期为恙虫病的治疗提供新的思路。

恙虫病23例误诊分析

恙虫病是由恙虫病立克次体（又称恙虫病东方体）引起的一种急性自然疫源性传染病,流行有地域性。确诊病例治疗过程一般较顺利,但本病误诊率较高,往往会延误治疗,临床应给予重视。现就笔者诊治过的误诊病例23例进行回顾分析,

mNGS在15例海南危重型立克次体病早期救治中的价值

目的探讨宏基因组二代测序(mNGS)在危重型不典型的立克次体感染者早期救治中的应用价值。方法收集2020年1月至2022年8月在海南省人民医院住院治疗临床诊断危重症立克次体患者的临床特征、血生化结果、外斐反应结果、影像学资料及mNGS结果,进行回顾性分析,使用Fisher精确性检验比较mNGS和外斐反应的阳性率。结果15例立克次体病患者中均有发热症状,头痛12例,但具有诊断意义的典型皮疹或焦痂仅为3例,发生脓毒症休克6例,多器官功能障碍15例;血液mNGS阳性15例,其中10例患者在血液中检测出普氏立克次体(恙虫病东方体),其余5例检测出莫氏立克次体,mNGS阳性率显著高于外斐反应(15/15比0,P<0.001)。所有患者在确诊后均被给予多西环素等治疗,其中14例好转出院,1例因病情危重、放弃治疗出院后1周死亡。结论mNGS能够提高常规检测结果为阴性的非典型立克次体的检出率,可为危重型立克次体病患者早期诊断、早期抗感染治疗提供参考。

云南省不明原因发热患者恙虫病东方体实验室检测分析

目的对云南省不明原因发热患者进行恙虫病东方体检测与分析。方法应用间接免疫荧光方法(IFA)和PCR(nPCR)法对不明原因发热患者分别进行恙虫病东方体(Ot)IgG抗体和sta56基因检测及其基因序列测定分析。结果在79例发热患者中,Ot IgG抗体阳性率48.10%,Ot核酸阳性率3.80%。基因序列分析显示序列12-17与日本O3株同源性最高为99.8%,序列12-9与中国台湾KM05、TW45R等株的同源性最高均为99.8%,序列11-6与中国台湾KM05、TW45R等株的同源性最高均为100%。进化树分析显示序列12-17、12-9和11-6均为Karp型Ot。结论云南省恙虫病患者中存在Karp型Ot感染,其基因进化来源可能复杂。

浙江省丽水市监测点鼠类恙虫病东方体的检测

目的对丽水市莲都区鼠肝脾组织进行恙虫病东方体(Ot)检测,了解该区鼠恙虫病感染情况。方法收集丽水市鼠的肝脾标本,采用巢式PCR法检测56 kD蛋白基因,确定阳性标本。结果在丽水莲都区捕获鼠132只,在黑线姬鼠中检测到Ot阳性标本3份,在小家鼠中检测到Ot阳性标本1份,鼠Ot总阳性率为3.03%(4/132)。结论丽水市鼠中存在Ot自然感染,且宿主动物呈多样性,为深入进行恙虫病疫源地的调查奠定了基础。

喜马拉雅山脉的恙虫病

印度喜马恰尔·布拉代什邦坐落于喜马拉雅山外。在多雨季节，一些不明原因的急性发热性多发性神经炎病例时有发生。免疫荧光法和实时定量PCR检测确认东方体是该病的病原体。并在该区域发现东方体的两种新基因型。

恙虫病合并多脏器损害误诊为脓毒血症1例

恙虫病是恙虫病东方体(以前称立克次体)引起的急性传染性疾病,我国北方和南方的流行季节有显著差异。长江以南地区以6~8月为流行高峰,属于“夏季型”;长江以北地区以10~11月为流行高峰,属于“秋季型”。时值“夏季型”恙虫病高发时段,有必要对该病引起重视。