用pfcrt点突变基因检测技术检测恶性疟原虫氯喹抗药性的初步研究

目的 建立一种恶性疟原虫氯喹抗药性基因pfcrt点突变的检测方法,以判断是否存在氯喹抗药性。方法 根据恶性疟原虫pfcrt基因序列设计巢式PCR引物,以恶性疟原虫DNA为模板扩增出一条包含第76位密码子的DNA片段;扩增产物经限制性内切酶Apo I消化,用琼脂糖凝胶电泳观察恶性疟原虫pfcrt等位基因是否为突变型。结果 31份样本经巢式PCR扩增均出现14 0 bp左右的特异性片段。酶切消化后,9份滤纸血样本中有4例出现1条14 0 bp左右的片段,为突变型pfcrt等位基因,其余5份出现97bp与4 8bp两种酶切片段,为野生型pfcrt等位基因;2 2份血涂片样本中有10份突变型,突变率为4 5 .16 %。14例突变样本中,有1例体内实验氯喹治疗有效。结论 巢式PCR- RFL P法可以快速、高效的检测恶性疟原虫pfcrt基因76位密码子的点突变,并且能够初步应用于恶性疟原虫氯喹抗药性的鉴别。

云南省现场恶性疟原虫3个抗药性基因点突变特征

目的 研究云南省现场恶性疟原虫 3个与抗疟药抗性有关的dhfr、pfmdr1和pfcrt的点突变特征 ,为抗药性恶性疟原虫的分子生物学研究提供背景资料。 方法 应用特异性套式多聚酶链反应 (PCR)和限制性酶切片段长度分析 (RFLP)方法 ,检测恶性疟现症病人干滤纸血样的恶性疟原虫 3个抗药性基因点突变情况。 结果 恶性疟原虫dhfr基因内 16,5 1,10 8和 164位氨基酸有不同程度的突变 ,突变型比例高 ,以Asn -10 8和Ⅰle -5 1为甚 ,频度分别为94 3 %和 81 3 %。野生型 ( 3D7型 )Ser -10 8出现较低频率 8 6% ,而AIa -16出现频率较高 68 6% ;pfcrt基因的 76位点由K突变为T ,突变型 (含混合 )占 96 7% ;野生型仅占 3 4% ;pfmdr1基因 86位点由Asn突变为Tyr ,突变型占 3 4 % ;野生型点 48 7% ;混合型占 16 7%。未发现 12 46位点突变的存在。 结论 云南现场恶性疟原虫与抗疟药抗性有关的3个pfdhfr、pfmdr1和pfcrt基因有较广泛的点突变特征。

云南恶性疟原虫氯喹抗药性基因76位点突变研究

目的研究云南恶性疟原虫氯喹抗药性基因(pfcrt)76位点突变的情况,以及与抗药性表现型的关系。方法应用PCR和限制性酶切片段长度分析方法,检测现症病人干滤纸血样的恶性疟原虫pfcrt基因点突变。结果云南省恶性疟原虫pfcrt基因76位点的突变型很高,占85.0%(51/60);野生型和混合型较少,分别占8.3%(5/60)和6.7%(4/60)。体内法测定的氯喹抗性和敏感样本均有pfcrt76突变型;体外法测定的17份氯喹抗性样本中,有13份带有pf-crt76突变型。结论云南省恶性疟原虫pfcrt基因氨基酸编码76位点突变频度很高。体内和体外法测定的氯喹抗性表现与pfcrt76突变型有较高的一致性。

恶性疟原虫氯喹抗药性基因pfcrt研究进展

自从1959年第1例抗氯喹的恶性疟病人出现以来[1],恶性疟原虫氯喹抗药性(chloroquine resistance,CQR)已经遍及所有恶性疟流行地区,在东南亚地区CQR引发了更为严重的公共卫生问题,在我国云南、海南等省也有CQR恶性疟的流行.因此,对恶性疟原虫氯喹抗药性的研究已经成为当前疟疾防治研究中的一个重点.随着恶性疟原虫基因组研究的进展,抗药性基因已经成为CQR研究的热点.

云南边境地区氯喹及与青蒿琥酯伍用治疗前后恶性疟原虫pfcrt和pfmdr1抗药性有关基因点突变的变化特征(英文)

目的 了解氯喹单用及与青蒿琥脂伍用治疗恶性疟前后 ,pfcrt和 pfmdr1抗药性有关基因的点突变变化特征。 方法 使用PCR RFLP技术检测基因点突变。 结果 氯喹及与青蒿琥脂伍用治疗前后的所有样本都发现有恶性疟原虫pfcrt基因氨基酸编码 76突变为苏氨酸的特征。但是 ,氯喹治疗前 ,5 0 % pfmdr1基因氨基酸编码 86为天冬酰氨酸 (野生型 ) ,而剩余的 5 0 %为野生型和突变型 (苏氨酸 )的特征。氯喹治疗后 ,在 18个复燃的病例中 ,83 .3 %的 pfmdr1基因 86位点为野生型 ,剩余的 16.7%是混合型。氯喹与青蒿琥脂伍用治疗前 ,3个样本携带混合型基因型 ,剩余的 (86% )为野生型 ,但治疗后 ,所有样本只携带野生型。 结论 这些结果可能支持这样的假说 :pfcrt基因突变起主导作用 ,但 pfmdr1基因突变增强了氯喹抗药性的效果。

云南省恶性疟原虫多药抗性基因^(Asn)86^(Tyr)多态性调查

目的检测云南恶性疟原虫多药抗性基因 (Pfmdr1 ) Asn 86Tyr的多态性 ,探索其与氯喹敏感性表现型的关系。方法用等位基因特异 PCR和限制性酶切片段长度分析技术 (AS-PCR/RFLP)。结果在 86% (1 9/2 2 )的氯喹抗性分离株中检测到 Pfmdr1基因的 Asn86Tyr两种多态性 ,携带编码 86Tyr多态变异的占 50 % ,而含编码 Asn86多态的也是 50 %。结论在云南氯喹抗性高度流行区 ,Pfmdr1基因

赤道几内亚Bioko岛的恶性疟原虫多药抗性基因(pfMDR-1)的研究

目的对赤道几内亚Bioko岛上恶性疟原虫多药抗性基因(pfMDR-1)进行分析,为Bioko岛的疟疾防控和治疗提供依据。方法2012年雨季期间采集的恶性疟原虫感染患者样本151份,用巢式PCR技术特异性扩增N86Y、E130K、Y184F、S1034C、N1042D、V1109I、D1246Y耐药分子标记的pfMDR-1基因片段,然后进行测序分析。结果虫株中共发现了4种不同的单倍型:YEY/SNVD、NEF/SNVD、YEF/SNVD和NEY/SNVD。91.39%(138/151)的样本发现了耐药性位点突变,包括3.31%(5/151)的86Y,29.80%的184F,和58.29%(88/151)的双重突变86Y/184F。结论结果表明赤道几内亚Bioko岛上的恶性疟原虫株存在较高比例耐药基因突变和耐药复合基因突变,为当地的抗疟疾选用药物提供指导。

我国恶性疟原虫对抗疟药敏感性的现状

目的：了解恶性疟原虫对各种常用抗疟药的敏感性，以指导合理应用抗疟药。方法：采用ＷＨＯ标准体外微量法。结果：甲氟喹和奎宁分别测定３６例和３３例，未发现抗性病例。氯喹、氨酚喹和哌喹抗性率分别为８４．６％、８６．１％和３８．０％。有８．３％病例对咯萘啶有抗性，少数病例对青蒿素类药物敏感性下降。结论：云南和海南两省恶性疟原虫对氯喹、氨酚喹和哌喹有高度抗性，但停用氯喹后，恶性疟原虫对氯喹敏感性有所恢复。对哌喹抗性率和抗性程度呈现逐渐上升趋势。对咯萘啶和青蒿素类药物的敏感性在逐渐降低。上述抗疟药抗性之间有一定交叉关系。

海南恶性疟原虫pfcrt等位基因多态性的单体型研究

目的建立恶性疟原虫pfcrt(Plasmodium falciparum chloroquine resistant transporter)等位基因多态性的单体型的研究疗法,比较我国海南省与东南亚及非洲地区恶性疟原虫的pfcrt等位基因多态性的单体型的特征。方法来自海南省19份恶性疟滤纸血样提取DNA,通过巢式PCR反应,扩增出包含第72～76、97位密码子的基因片段,根据限制性片段长度多态性(RFLP)分析结果,各选取6份突变型和野生型PCR产物进行DNA测序,检测第72～76、97位密码子序列,从而建立并分析我国海南省恶性疟prcrt等位基因的单体型。结果19份滤纸血样本提取的DNA全部扩增出1条195 bp的片段,酶切消化后,有11份出现1条100 bp左右的酶切片段,为野生型pfcrt等位基因,其余8份为1条195 bp的片段,为突变型。基因序列分析发现,野生型pfcrt等位基因的第72～76位密码子单体型为CVMNK,突变型为CVIET,第97位密码子未发现突变。结论我国海南省氯喹抗药性恶性疟原虫pfcrt等位基因第72～76位密码子的单体型与东南亚和非洲地区抗氯喹恶性疟原虫相应单体型一致。

泰国恶性疟原虫中存在多重抗药基因

Nature 2004年430卷7000期627页报道：在泰国边境，由严重危害人体健康的恶性疟原虫（镰状疟原虫）（Plasmodium falciparum）的抗药种类引起的恶性疟疾十分流行。目前泰国常的治疗恶性疟疾的药物是甲氟喹和青蒿琥酯。一般而论，这两种药联用时的抗疟效果是比较好的。但其中的甲氟喹已经在泰国使用了20年之久。现已发现，单独使用的甲氟喹已经丧失了疗效。迄今还不了解恶性疟原虫的抗药机理。

我国恶性疟抗药性的研究现状

本文概述了近年国内恶性疟原虫抗药性的研究进展,包括抗药性的检测方法、抗药性的产生机制以及解决恶性疟抗药性途径的探索。

氯喹抗药性与相关基因Pfmdr1

抗疟药氯喹作为安全、有效、廉价的一线抗疟药物被广泛使用。随着世界各地恶性疟原虫株氯喹抗性的产生,氯喹抗药性的机制研究已成为疟疾研究的重点之一。本文就有关氯喹抗药性与相关基因序列Pfmdr1的研究进展作一综述。

恶性疟原虫多药抗性蛋白pfMRP1研究新进展

近几年在疟疾的治疗中，抗疟药抗药性的产生成为疟疾控制的最大难题，随着分子生物学技术的发展，从分子水平上研究恶性疟原虫的抗药性的产生取得了重大突破性进展，恶性疟原虫多药抗性蛋白声fMRPl（TheP．falciparumMultidrugResist—anteProtein1）被认为是和多种药物抗性产生有关的ABC转运蛋白，与抗疟药抗性的产生有密切关系。

恶性疟原虫抗药性基因研究现状

目前恶性疟原虫几乎对所有抗疟药物都产生了抗药性,研究与恶性疟原虫抗药性相关的恶性疟原虫氯喹抗药转运蛋白基因(Pfcrt)和恶性疟原虫多药抗药性基因(Pfmdr1)以及恶性疟原虫Kelch螺旋体蛋白基因(K13)突变有助于建立快速有效的疟原虫抗药性分子监测技术,对实现全球消除疟疾目标有着重要的意义。本文对恶性疟原虫药物抗性基因研究现状进行了综述。

恶性疟原虫氯喹抗性机制的研究新进展

参照恶性肿瘤多药抗性(MDR)研究模式而发现的恶性疟原虫的pfmdr1基因不能完全解释其氯喹抗性,但通过氯喹敏感株HB3与氯喹抗性株Dd2杂交而发现的和氯喹抗性有关的cg2基因结合起来,或许能对恶性疟原虫的氯喹抗性作出较为满意的解释。恶性疟原虫的氯喹敏感株可被氯喹诱导发生细胞凋亡样改变而抗性株却不能,又为恶性疟原虫的氯喹抗性机制研究提供了新思路。

2018—2019年赤道几内亚Bioko岛恶性疟原虫抗药性基因多态性分析

目的调查赤道几内亚Bioko岛恶性疟原虫多药耐药蛋白1(Plasmodium falciparum multidrug resistance protein1,PfMDR1)、氯喹抗性转运蛋白基因(P.falciparum chloroquine resistant transporter,PfCRT)和Kelch 13基因(P.falciparum Kelch 13,PfK13)多态性,为当地疟疾防控策略制定提供参考。方法采集2018—2019年赤道几内亚Bioko岛恶性疟原虫感染者外周血样本85份,提取基因组DNA。采用巢式PCR技术扩增、PfCRT和基因,对扩增产物进行DNA测序,并对基因序列进行比对。结果赤道几内亚Bioko岛恶性疟原虫基因不存在已知与青蒿素抗性相关的突变;PfMDR1基因和PfCRT基因均存在不同比例抗药性突变,其中PfMDR1N86Y、PfMDR1Y184F和PfCRTK76T突变率分别为35.29%(30/85)、72.94%(62/85)和24.71%(21/85)。结论赤道几内亚Bioko岛恶性疟原虫PfMDR1、PfCRT基因和基因均存在不同程度突变。

2015—2016年山东省由赤道几内亚输入的恶性疟原虫抗药性基因多态性分析

目的了解山东省由赤道几内亚输入的恶性疟原虫抗性基因多态性情况。方法采集2015—2016年山东省由赤道几内亚务工返乡的输入性恶性疟患者血样,提取疟原虫基因组DNA,对恶性疟原虫抗性基因Pfcrt、Pfmdr1、Pfdhfr、Pfdhps、K13进行套式PCR扩增、DNA测序和序列对比分析。结果全部样本5种抗性基因目的片段均成功扩增和测序。Pfcrt野生型、突变型、混合型分别占72.8%、18.6%、8.6%,突变型全部为CVIET(下划线表示突变位点,下同);Pfmdr1野生型、突变型、混合型分别占20.0%、61.4%、18.6%,突变型主要为YF和NF;Pfdhfr野生型、突变型、混合型分别占1.4%、98.6%、0,突变型主要为AIRNI;Pfdhps野生型、突变型、混合型分别占1.4%、94.3%、4.3%,突变型主要为SGKAA;Pfdhfr和Pfdhps完全抗性基因型IRNGE占8.6%;1.4%的样本K13基因发生A578S突变。结论山东省由赤道几内亚输入的恶性疟原虫Pfcrt、Pfmdr1、Pfdhfr、Pfdhps、K13基因均发生不同程度突变;Pfcrt突变型比例较低,Pfmdr1、Pfdhfr、Pfdhps突变型比例较高;检测到K13基因发生A578S突变。

发现与疟疾耐药性有关的基因

在经过10年的调查研究之后,科学家们现在鉴定了一个基因,它能够使引起疟疾的恶性疟原虫产生抗氯奎的耐药性。氯奎是一种主要的抗疟药物,但目前在世界各地日渐成为无效的药物。贝塞斯达国立变态反应与感染疾病研究所的Thomas E.Wellems说,由于获得了上述新资料,研究人员试图研制能避开疟原虫抗药性,但仍能安全地杀死这种嗜血菌的新型氯奎。

疟原虫感染的免疫应答及效应分子的研究进展

疟原虫生活史复杂,各期的抗原成分多样化,随着恶性疟原虫抗药性不断扩大,目前仍无特效药物和疫苗预防感染。对恶性疟原虫感染引起的免疫应答的深入研究,提供了大量关于免疫在疟原虫感染中的作用信息。并且随着基因组测序计划的完成,有助于认识疟原虫不同期生长发育的分子机制,为疟疾的预防控制提供理论依据。