亚砷酸钠暴露14周诱导肝癌细胞LM3氧化损伤及恶性迁移的研究

目的·探究不同剂量的亚砷酸钠暴露对人肝癌细胞株LM3细胞的影响,分析亚砷酸钠促进肝癌细胞恶性迁移的分子机制。方法·建立细胞亚砷酸钠染毒模型,分别用含0、1、10μmol/L亚砷酸钠的DMEM高糖培养基连续培养LM3细胞14周。暴露结束后,从细胞培养基中去除亚砷酸盐,用不含亚砷酸钠的培养基培养细胞1周使其恢复。以同一批次传代未经过亚砷酸钠处理的细胞作为对照组。分别用CCK-8增殖实验、Transwell迁移实验、DCFH-DA活性氧荧光探针实验验证慢性亚砷酸钠暴露对LM3细胞增殖、迁移和氧化应激的影响;用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法验证慢性亚砷酸钠暴露对LM3细胞相关基因的mRNA和蛋白表达水平的影响。结果·相比对照组,1μmol/L和10μmol/L亚砷酸钠染毒能显著增强LM3细胞内的活性氧水平(均P<0.05),并促进LM3细胞的恶性迁移(均P<0.05),且该作用呈剂量依赖性,但亚砷酸钠对LM3细胞的增殖并无显著影响。亚砷酸钠染毒可以上调血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2 (nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidases 2,NOX2)、促分裂原活化蛋白激酶8 (mitogen-activated protein kinase 8,MAPK8)基因表达水平,上调NOX2、MAPK8蛋白的表达水平。结论·亚砷酸钠暴露能增强LM3细胞的迁移能力和氧化应激水平,也能上调VEGF、NOX2、MAPK8基因的表达,提示亚砷酸钠促进LM3细胞恶性迁移的机制可能与氧化损伤及这些基因的表达上调有关。