黑色素瘤特异性抗原基因与血液恶性肿瘤

黑色素瘤特异性抗原(Preferentiallyexpressedantigenofmelanoma,PRAME),是第一个被分离出的人类黑色素瘤抗原,也表达于某些血液恶性肿瘤,包括急性髓性白血病(Acutemyeloidleukemia,AML)、多发性骨髓瘤等。近来的研究证实PRAME基因是对白血病微小残留病(Minimalresidualdisease,MDR)监测的一个有效标志,并且PRAME作为特异性靶抗原用于血液恶性肿瘤免疫治疗是目前研究的热点。现就黑色素瘤特异性抗原和血液恶性肿瘤之间的关系以及它在免疫治疗中的作用做一综述。

人X染色体含有一个黑色素瘤抗原基因亚家族

肿瘤相关基因的研究是肿瘤基因形成学说的核心内容。肿瘤相关基因家族的研究则是其中的重点和难点．从４～６月孕龄人胎肝。ＤＮＡ文库中克隆到１个黑色素瘤抗原基因（ＭＡＧＥ－Ｄ１）。随后发现了一个黑色素瘤抗原基因亚家族，称为ＭＡＧＥ－Ｄ亚家族，其成员包括３个直系同源体（人ＭＡＧＥ－Ｄ１、大鼠ＳＮＥＲＧ－１和小鼠ＤＬＸＩＮ－１）和２个旁系同源体（人ＭＡＧＥ－Ｄ和人ＫＩＡＡ１１１４）。该家族的３个人类成员均定位于染色体Ｘｐ１１．２１－ｐ１１．２３，同时具有独特的基因组结构。分子进化树分析表明，该家族与已知ＭＡＧＥ－Ａ、－Ｂ和－Ｃ ３个亚家族之间具有明显的进化上分歧。该亚家族的发现为研究肿瘤相关基因新功能提供了重要线索。

43例中国人眼部恶性黑色素瘤cKit和BRAF基因突变分析

目的分析中国人眼部恶性黑色素瘤中cKit和BRAF基因突变情况。方法收集43例中国眼部恶性黑色素瘤患者组织标本(脉络膜恶性黑色素瘤30例,结膜恶性黑色素瘤13例),采用巢式PCR扩增和基因测序的方法检测cKit基因第9、11、13、17和18外显子以及BRAF基因第15外显子突变情况。结果 cKit基因在脉络膜恶性黑色素瘤患者中突变率达16.7%(5/30),而在结膜恶性黑色素瘤中突变率仅为7.7%(1/13);在结膜恶性黑色素瘤中检测到1例BRAF基因突变(1/13),在脉络膜恶性黑色素瘤中未检测到BRAF基因突变。结论 cKit基因在中国脉络膜恶性黑色素瘤患者中突变率较高,提示以cKit为靶标的靶向药物未来有可能为中国脉络膜恶性黑色素瘤患者带来新的希望。

恶性黑色素瘤的基因治疗新进展

恶性黑色素瘤是来源于黑色素细胞的高度恶性肿瘤，多发生于皮肤，为人类第五大常见肿瘤。恶性黑色素瘤发展迅速、转移早而广泛、预后差、病死率高，临床上采用的手术治疗、化学治疗、放射治疗，虽能取得一定疗效，但很难彻底治愈。近年来，各种癌基因及抑癌基因相继发现，分子生物学各种手段也日益发展与完善，使得基因治疗成为时下治疗肿瘤的热点。恶性黑色素瘤的基因治疗也逐渐从单纯的基础研究过渡到临床应用。本文对恶性黑色素瘤的基因治疗作一综述。

黑色素瘤抗原基因的检测及其在胃癌中的表达

目的:检测并探讨分析黑色素瘤抗原基因(MAGE)在胃癌中的表达及其分布特点。方法:采用RT-PCR技术检测70 例胃癌组织及相应的癌旁正常组织中MAGE表达。结果:70例胃癌组织中MAGE-1、MAGE-3的阳性率分别为28.6%、35.7%,癌旁正常组织均不表达。基因表达与患者的年龄、性别、Hp感染、肿瘤组织学分型无关(P>0.05)。结论:MAGE基因在胃癌组织中特异性表达,可以此作为靶抗原进行肿瘤免疫治疗。

姜黄素诱导恶性黑色素瘤细胞凋亡及对AIFM2基因表达的影响

目的明确姜黄素诱导恶性黑色素瘤细胞系A375凋亡的作用，探讨姜黄素作用机制。方法A375细胞系经5～20μmol／L姜黄素作用48h后，MTT法测定细胞增殖能力；流式细胞仪检测细胞凋亡；RT-PCR方法检测细胞AIFM2及p53mRNA的表达。结果0、5．0、10．0、20．0μmol／L姜黄素作用A375细胞48h后细胞增殖抑制率分别为1．1％±0．3％、14．9％±5．9％、21．6％±4．7％、41．5％±5．4％；凋亡所占的百分比分别为3．5％±1．8％、17．1％±7．8％、23．8％±6．0％、33．6％±4．4％；AIFM2基因mRNA表达相对比值为（0．6±0．2）、（0．8±0．2）、（1．0±0．4）、（1．2±0．5）；p53血ⅢA表达相对比值分别为（0．9±0．4）、（1．1±0．4）、（1．2．4-0．5）、（1．3±0．4）。各组之间均存在统计学意义（P〈0．05）。伴随姜黄素作用浓度的升高，A375细胞的生长被显著抑制。AIFM2mRNA与p53mRNA表达显著上调。结论姜黄素可能通过上调AIFM2基因的表达促使黑色素瘤细胞凋亡。

黑色素瘤相关抗原家族新基因restin的组织表达谱

Restin是从维甲酸诱导肿瘤分化细胞中克隆的一种黑色素瘤相关抗原家族(MAGE)的新成员.对该基因在不同组织、不同细胞系的表达水平进行研究,将有利于揭示其生物学功能.使用α3-2P-dCTP标记人restin编码区基因作为探针,针对12种不同成人组织mRNA的Multiple TissueNorthern(MTN)膜和含76种成人、胎儿及常用细胞系mRNA的Multiple Tissue Expression(MTE)Array膜进行杂交分析,同时利用地高辛标记探针对11种常见肿瘤组织进行原位杂交检测.结果显示,MTN膜杂交中,12种组织显示均一杂交条带,约1.8 kb,提示该基因可能不存在剪接变异体;MTE膜杂交中,正常组织中均有不同程度的表达,但在肿瘤细胞系中均低表达或者不表达;原位杂交的结果显示,在8种恶性肿瘤组织中均不表达,而在3种良性肿瘤组织中呈现较低的表达.结果提示,该基因在正常组织中的表达明显高于肿瘤组织和肿瘤细胞系,完全不同于其它MAGE-A、B、C的组织表达方式.结合该基因在维甲酸诱导分化的肿瘤细胞中高表达,推测restin可能与正常细胞的分化、增殖有关.

黑色素瘤抗原基因-3在直肠癌的表达及意义

目的检测黑色素瘤抗原基因3(MAGE3)在直肠癌中的表达,探索其与直肠癌临床病理的关系及其在直肠癌免疫治疗中的应用价值。方法采用RT PCR法,对33例直肠癌患者的癌组织及其相应距肿瘤边缘(5±1)cm的癌旁组织和手术切缘(乙状结肠端)以及3例直肠息肉标本(无瘤)的MAGE3的表达情况进行检测,并对RT PCR扩增产物中的目的基因片段进行DNA测序验证。结果33例直肠癌组织中,MAGE3基因的表达阳性率为42.42%(14/33),在癌旁组织和手术切缘组织中,MAGE3基因的表达阳性率分别为18.18%(6/33)和15.15%(5/33),3例直肠息肉标本未见MAGE3表达。肿瘤组织MAGE3基因表达阳性率均显著高于癌旁组织和手术切缘组织(P<0.05);而与患者年龄、性别、肿瘤组织学类型、Dukes分期及淋巴结转移无关(P>0.05)。结论基于MAGE3基因在直肠癌中的高表达率,MAGE3表达的蛋白可以作为一种有前途的靶点用于免疫治疗,同时有望成为一种筛查和随访指标。

黑色素瘤相关抗原(MAGE)基因在肺癌中的表达及意义

肺癌是常见的恶性肿瘤之一,因目前诊断易忽略微转移灶,造成肺癌预后极差,黑色素瘤相关抗原(melanoma associate dantigens,MAGE)基因作为一种特异性肿瘤抗原基因,在肺癌的发生、发展和治疗中起着重要作用,其研究为肺癌的诊断和治疗提供了新的方向。

PTEN基因对人恶性黑色素瘤细胞克隆株VEGF的影响

目的:研究肿瘤抑制基因—PTEN诱导表达后对人恶性黑色素瘤(malignantmelanoma,MM)细胞株SK-MEL-31VEGF变化的影响,为进一步研究该基因在MM细胞信号传导中的地位和分子生物学作用打下基础。方法:应用分子生物学、免疫学和病理学等技术,研究PTEN基因、反义PTEN基因转染人MM细胞株SK-MEL-31前后细胞内血管内皮生长因子(Vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)VEGF的表达情况。结果:发现PTEN基因转染人MM细胞株SK-MEL-31经诱导表达后细胞内VEGF表达明显减少,而转染反义PTEN基因的细胞,其VEGF表达无明显变化。结论:PTEN基因的表达影响MM细胞侵袭和转移等肿瘤病理生物学行为,与细胞内VEGF的变化相关。

人黑色素瘤相关抗原基因-12基因疫苗对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及体内抗体水平的影响

目的:研究人黑色素瘤相关抗原基因-12(MAGE-12)基因疫苗pEGFP-C3-MAGE-12对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及体内抗体水平的影响。方法:小鼠80只,随机分为4组,每组20只。疫苗组、空质粒组和生理盐水(NS)组接种Lewis肺癌瘤组织制备Lewis肺癌小鼠模型。接种癌组织前14d、7d、0d,疫苗组按每次每只0.2mL(75ng/L)于右下肢内侧肌肉群内注射pEGFP-C3-MAGE-12;空质粒组和NS组每只每次注入pEGFP-C3空质粒或NS;空白对照组小鼠不做任何处理。每3d观察并记录1次肿瘤大小。接种瘤组织后14d每组取10只小鼠,ELISA法检测血清MAGE-12-Ab,余小鼠(每组10只)自然死亡,记录生存时间。结果:3组7d成瘤率均为100%。空质粒组、NS组及疫苗组生存期分别为(27.0±0.3)d,(27.2±0.3)d和(28.9±0.6)d;肿瘤体积分别为(179.775±9.085)mm3,(173.172±9.085)mm3和(144.923±9.528)mm3;疫苗组血清MAGE-12-Ab水平为(711.16±174.78),其他3组未检测到MAGE-12-Ab;与空质粒组、NS组比较,疫苗组生存期短(P<0.05),肿瘤体积小(P<0.05),体内抗体水平高(P<0.05)。结论:MAGE-12基因疫苗具有免疫治疗作用。

反义血管内皮细胞生长因子_(165)基因治疗皮肤恶性黑色素瘤的实验研究

目的研究腺病毒介导的反义血管内皮细胞生长因子165(Adenovirus-mediatedaversevascularendothelialgrowthfactor165,Ad-aVEGF165)基因转染对恶性黑色素瘤体内外生长的影响。方法选用感染复数为100的腺病毒介导的绿色荧光蛋白(Adenovirus-mediatedgreenfluorescentprotein,Ad-GFP)和Ad-aVEGF165转染人血管内皮细胞株304(endotheliumcellofvessel304,ECV304)和人恶性黑色素细胞(A375)。ECV304细胞分为3组:A375母系组、Ad-GFP组和Ad-aVEGF165组。A375细胞分为3组:1640组、Ad-GFP组和Ad-aVEGF165组。测定其生长曲线、细胞周期和VEGF基因的表达。于裸鼠皮下接种A375细胞,待成瘤后进行转种和治疗,根据瘤体内注射物的不同随机分为PBS组、Ad-GFP组和Ad-aVEGF165组,每组5只;治疗结束后行大体观察、HE染色观察和微血管密度(micro-vasculardensity,MVD)检测。结果A375母系组和Ad-GFP组上清液均能刺激ECV304细胞的生长,Ad-aVEGF165组上清液能抑制ECV304细胞的生长。A375细胞中3组细胞均呈增殖趋势,各时间点的增殖速度比较无统计学意义(P>0.05)。ECV304细胞Ad-aVEGF165组增殖指数降低(P<0.05),A375细胞3组细胞增殖指数比较无统计学意义(P>0.05)。A375细胞1640组、Ad-GFP组和Ad-aVEGF165组平均灰度值分别为234.41±13.80、222.73±3.67和180.84±6.34。转种后2周Ad-aVEGF165组裸鼠体内肿瘤体积比Ad-GFP组和PBS组明显减小,并随时间延长越来越明显。HE染色Ad-aVEGF165组有凝固性坏死。PBS组、Ad-GFP组、Ad-aVEGF165组的MVD值分别为65±10、52±11和30±6个/视野。结论在体外,Ad-VEGF165通过抑制A375细胞VEGF基因的表达,进而抑制ECV304细胞的生长。在体内,Ad-aVEGF165阻断肿瘤血管的生成,进而抑制人恶性黑色素瘤的生长。

结直肠癌中黑色素瘤抗原基因mRNA的表达及意义

目的检测结直肠癌组织中黑色素瘤抗原基因MAGE-1、3和4的表达,探讨其在结直肠癌免疫治疗及作为免疫分子标志物的可行性。方法采用RT-PCR方法,检测65例结直肠癌组织和相应正常粘膜组织中MAGE-1、3和4的mRNA表达,并对PCR扩增产物进行DNA测序验证。结果65例结直肠癌组织标本中,53.8%(35/65)的患者至少表达一种MAGE基因。MAGE-1、3、4mRNA表达率分别是18.5%(12/65)、33.9%(22/65)和20%(13/65),表达任意两种或以上的MAGE基因的标本为27.7%(18/65),而相应正常粘膜组织均未检测到上述基因的表达。DNA测序结果表明RT-PCR产物确为目的基因片段。MAGE基因表达与患者的年龄(除外MAGE-1,P=0.011)、性别、CEA、肿瘤大小和位置、组织分化程度、淋巴结转移、肿瘤浸润深度及TNM分期无关(P>0.05)。结论结直肠癌中MAGE-3可作为肿瘤疫苗的备选基因和免疫学检测的分子标志物,具有作为肿瘤免疫治疗特异性靶位的潜在价值,而MAGE-1,4因表达率低限制了其应用价值。

胃癌组织中黑色素瘤抗原基因-1,3基因的表达及其意义

目的 了解胃癌组织中黑色素瘤抗原基因 (MAGE) 1、3基因的表达 ,并探讨其作为免疫治疗的靶抗原在胃癌中的应用价值。方法 采用RT PCR法检测 36例胃癌患者的肿瘤组织和相应的癌旁“正常”黏膜中MAGE 1、3基因的表达情况 ,并以 37例慢性胃炎患者的胃镜活检组织和 4株胃癌细胞株作为对照。结果 36例胃癌组织中 ,MAGE 1表达阳性率为 72 .2 2 % (2 6 / 36例 ) ,MAGE 3表达阳性率为 6 9.4 4 % (2 5 / 36例 ) ,MAGE 1、3表达双阳性率为 5 2 .78% (19/ 36例 ) ,MAGE 1、3任一基因表达阳性者 32例 ,阳性率为 88.89% (32 / 36例 )。癌旁“正常”黏膜中MAGE 1、3基因表达阳性率分别为 4 7.2 2 % (17/ 36例 )和 4 4 .4 4 % (16 / 36例 ) ,MAGE 1、3表达双阳性率为 30 .5 6 % (11/ 36例 )。 37例慢性胃炎组织中 ,MAGE 1、3表达阳性率分别为 2 9.73% (11/ 37例 )和2 7.0 3% (10 / 37例 ) ,MAGE 1、3表达双阳性率为 8.11% (3/ 37例 )。胃癌组织MAGE 1、3基因表达阳性率均高于癌旁“正常”黏膜组织和慢性胃炎患者。 4株胃癌细胞株MAGE 1、3基因表达均为阳性。结论 基于MAGE 1、3基因在胃癌中的高表达率 ,可利用其作为靶分子进行免疫治疗 。

伊马替尼治疗晚期恶性黑色素瘤C-kit及B-raf基因突变患者的效果研究

目的:探讨伊马替尼对晚期恶性黑色素瘤C-kit及B-raf基因突变者的临床效果。方法:选择2010年1月—2014年1月收治的124例晚期恶性黑色素瘤患者,按照随机数字法分为观察组和对照组,每组各62例。对照组患者给予达卡巴嗪,观察组在对照组治疗的基础上联合应用伊马替尼,对所有患者随访2年,观察2组患者治疗过程中发生的不良反应、疗效及无病生存时间,并比较2组患者1、2年生存率。结果:2组患者化疗不良反应的差异无统计学意义(P>0.05);观察组患者的疾病缓解率为61.29%(38/62),显著高于对照组的22.58%(14/62),差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者无病生存时间为(10.2±1.1)个月,显著长于对照组的(5.1±0.3)个月,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者1年及2年生存率均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:伊马替尼治疗晚期恶性黑色素瘤C-kit及B-raf基因突变患者,能有效控制疾病进展速度,延长患者生存时间,且不增加治疗过程中的不良反应。

半抗原DNP修饰自体肿瘤疫苗治疗晚期恶性黑色素瘤的临床研究

目的探讨半抗原二硝基氟苯(dinitrophenyl,DNP)修饰自体肿瘤疫苗在晚期恶性黑色素瘤治疗中的作用。方法 84例Ⅲ期或Ⅳ期可切除恶性黑色素瘤患者随机分为半抗原DNP修饰瘤苗组和半抗原DNP未修饰瘤苗组,每组42例,分别采用半抗原DNP修饰的自体肿瘤疫苗和半抗原DNP未修饰的自体瘤苗联合化疗进行治疗,采用流式细胞技术检测两组患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)数量及淋巴细胞亚群的变化,观察迟发型超敏反应(delayed type hypersensitivity,DTH)及随访生存情况。结果治疗后半抗原DNP修饰瘤苗组患者CD4+-IFN-γPE、CD8+-IFN-γPE淋巴细胞亚群较治疗前及半抗原DNP未修饰瘤苗组明显升高(P均<0.05),而CD4+CD25+Treg数量减少(P<0.05),半抗原DNP未修饰瘤苗组治疗前后无明显变化(P>0.05);半抗原DNP修饰瘤苗组患者较半抗原DNP未修饰瘤苗组DTH明显增强,硬结明显增大,两组DTH达到阳性结果(≥5 mm)的百分比分别为94.6%和45.0%(P<0.05)。半抗原DNP修饰瘤苗组患者1年、2年和3年生存率分别为95.0%、73.0%和65.5%,总生存率(overall survival,OS)为79.3%,无疾病生存率(disease free survival,DFS)为81.1%;半抗原DNP未修饰瘤苗组患者1年、2年和3年生存率分别为90.1%、59.0%和43.5%,OS为64.2%,DFS为74.0%,两组患者生存时间差异有统计学意义(P<0.05)。结论半抗原DNP修饰的自体瘤苗可增强恶性黑色素瘤患者特异性细胞介导的免疫反应,抑制机体免疫耐受,从而延长患者生存时间。

黑色素瘤抗原基因在乳腺癌中的表达及临床意义

目的:研究乳腺癌组织中黑色素瘤抗原基因(MAGE)的表达情况,并探讨其临床意义。方法:采用荧光定量逆转录多聚酶链反应(fqRT-PCR)检测55例乳腺癌组织中MAGE基因的表达情况。结果:55例乳腺癌组织中有17例(30.9%)表达MAGE-A1或/和MAGE-A3,9例(16.4%)MAGE-A1阳性,13例(23.6%)MAGE-A3阳性。结论:MAGE基因在乳腺癌中较高表达,推测MAGE抗原可以作为乳腺癌治疗的靶点。

黑色素瘤抗原编码基因家族新成员MAGE-D1的组织表达谱研究

MAGE D1是黑色素瘤抗原编码基因家族 (MAGE)中MAGE D亚家族的新成员 .为了研究该基因的性质及其可能功能 ,采用Northernblot和Dotblot杂交技术研究了其组织表达谱 .结果发现 ,该基因在多种肿瘤组织和正常组织中均广泛表达 .在所检测的 4 8种肿瘤组织中 ,经与对应正常组织进行比较发现 ,该基因在 13种肿瘤组织中的表达显著增高 ,而在 7种肿瘤组织中的表达则显著降低 .进一步分析提示该基因在多种胚胎组织中的表达高于成年组织 .由于MAGE A、 B、 C亚家族均具有在肿瘤组织 睾丸中特异表达的特点 ,而作为MAGE D亚家族成员的MAGE D1并非在肿瘤组织中特异表达 ,提示需要对MAGE基因家族进行深入的功能研究 .

黑色素瘤抗原基因在结直肠癌中的表达及意义

目的探讨黑色素瘤抗原基因(MAGE)-1、MAGE-3在结直肠癌组织中的表达及意义。方法采用RT-PCR方法检测MAGE-1和MAGE-3 mRNA在65例结直肠癌组织和相应正常黏膜组织中的表达,并对PCR扩增产物中的基因片段进行DNA测序验证。结果结直肠癌组织标本中,MAGE-1和MAGE-3表达率分别为18.5% (12/65)、33.9%(22/65),MAGE-1和MAGE-3表达均为阳性者占12.3%(8/65);相应正常黏膜组织均未检测到上述目的基因表达,DNA测序结果表明RT-PCR产物确为目的基因片段;除MAGE-1基因表达与患者年龄有相关性外(P=0.007),两基因表达与其他临床病理特征均元相关性(P>0.05)。结论MAGE-1、MAGE-3可作为结直肠癌疫苗的备选基因和免疫学检测的分子标志物,并作为肿瘤免疫治疗的特异性靶位基因。