恶臭假单胞菌HB3S-20在棉花中的定殖及诱导抗性研究

植物内生菌是防治植物病害的重要生防资源。恶臭假单胞菌Pseudomonas putida HB3S-20是本实验室从棉花内生细菌中所筛选到的一株对棉花黄萎病具有显著防效的潜在生防菌株。本研究采用利福平抗性标记技术和绿色荧光蛋白(GFP)标记技术检测了菌株HB3S-20在棉花组织中的定殖动态和定殖位点,并检测了菌株HB3S-20接种棉花植株后植物防御相关酶SOD、POD和CAT酶活性的变化。利福平标记试验结果表明,菌株HB3S-20主要定殖于根部,棉株接种菌株HB3S-20后第3~30 d检测到棉花根部内的菌量范围为2.2×10^(4)~6.7×10^(4)cfu/g,检测到棉花茎部内的菌量为0.04×104~2.7×10^(4)cfu/g,棉花茎部内的菌量低于根部,但在叶片中未被分离到。GFP标记试验结果表明,菌株HB3S-20不仅能附着在棉花根系表面,还能定殖在根部维管组织中。此外,菌株HB3S-20能够提高棉花中植物防御相关酶SOD和POD的活性,说明菌株HB3S-20能够诱导棉花植株的系统抗性,增强棉花抗病性。本研究初步揭示了恶臭假单胞菌HB3S-20在棉花组织内的定殖规律及其对棉株产生的诱导抗性,为菌株HB3S-20的防病机制研究提供了理论依据。

高产嗜铁素恶臭假单胞菌A3菌株的鉴定及其对黄瓜的促生作用

从大棚蔬菜根际土中分离到一株嗜铁素高产菌株A3,铬天青(CAS)法定量检测其嗜铁素相对含量达93.40%,Shenker's实验确定为羧酸型嗜铁素。在不同底物诱导下,该菌株可不同程度地产生吲哚乙酸(IAA)及1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)脱氨酶,并具有一定的溶磷能力。根据形态特征、生理生化、API系统及16S rRNA基因序列分析,将菌株A3鉴定为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)。在缺铁Hoagland营养液中添加难溶性铁及菌株A3嗜铁素发酵滤液的处理组,能够显著提高黄瓜幼苗的株高、根长、叶长、鲜重及叶绿素含量,表明菌株A3产生的嗜铁素在低铁条件下对黄瓜幼苗具有促生作用。

河南144所医院2019~2020年恶臭假单胞菌感染临床特点及药敏分析

目的:分析河南省144所医院恶臭假单胞菌感染现状、临床特点及耐药性情况,并比较不同级别医院细菌耐药性差异,为院内感染控制及临床治疗提供参考。方法:收集2019年1月~2020年12月期间河南省144所医院上报的470例恶臭假单胞菌感染患者数据,分析标本来源、科室分布、药敏情况、不同级别医院细菌耐药性差异。结果:恶臭假单胞菌感染以男性、老年患者居多;标本来源以非呼吸道标本占比高(247株,52.6%);科室分布以重症医学科(98株,20.9%)、骨科(60株,12.8%)和呼吸内科(40株,8.5%)为主。药敏试验结果显示,恶臭假单胞菌对多黏菌素B、庆大霉素的耐药率较低,其余药物的耐药率均>30%;三级医院氨苄西林/舒巴坦、氯霉素、复方磺胺甲唑、美罗培南、氨曲南的耐药率均高于二级医院(P<0.05)。结论:该地区恶臭假单胞菌感染多见于老年、男性、重症患者,恶臭假单胞菌对多种药物耐药率较高,对多黏菌素B敏感性好,且三级医院多种药物的耐药率均高于二级医院。临床需重点关注高危患者,加强合理用药及医院感染控制。

香芹酚对恶臭假单胞菌的抑制作用

以恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)为对象,通过测定恶臭假单胞菌生长曲线、群集性、泳动性、核酸泄漏情况及产胞外蛋白酶和生物被膜能力等指标,考察不同体积分数香芹酚对恶臭假单胞菌的抑菌效果。结果表明:当香芹酚体积分数≥0.015%时,对恶臭假单胞菌的生长、运动能力、产胞外蛋白酶和生物被膜能力具有极显著抑制作用(P<0.01);当香芹酚体积分数为0.025%时,恶臭假单胞菌所产生物被膜含量比空白组极显著减少86.35%(P<0.01)。香芹酚可通过抑制生长、产生物被膜能力及运动能力破环细胞膜通透性,导致大量细胞内容物泄漏,从而对恶臭假单胞菌产生抑菌作用。

携带bla_(VIM-2)耐药基因的恶臭假单胞菌致皮肤感染一例并文献复习

恶臭假单胞菌能够引起多种鱼类的败血性感染,但对人的致病性一直被忽视。本研究从一例63岁男性患者左下肢皮肤伤口中分离到一株优势细菌,经生化鉴定和16S RNA测序分析确认为恶臭假单胞菌。进一步对其进行药敏试验,发现该菌株对氨苄西林、多种头孢类抗生素、碳青霉烯类抗生素、复方新诺明耐药,耐药基因检测发现该分离株携带抗碳青霉烯类bla_(VIM-2)耐药基因。根据药敏试验结果选用头孢他啶注射液2 g,每日两次,疗程14天,外用夫西地酸乳膏,每日2次,2个月后患者皮损完全愈合。

恶臭假单胞菌F1表达P450酶催化柠檬烯生物合成紫苏醇

紫苏醇是一种天然存在的单萜类化合物,在医药、日化、食品等行业具有广阔应用前景,但利用柠檬烯生物合成中的过程中存在选择性不强、底物对宿主菌株有毒性等问题。为此该文选择恶臭假单胞菌F1这种对环境具有高耐受度的菌株,构建在大肠杆菌和恶臭假单胞菌中皆可扩增并表达目的基因的广宿主载体,过表达选择性羟化酶CymAa、CymAb,异源表达特异性氧化柠檬烯生成紫苏醇的P450酶CYP153A6,并在表达P450酶的基础上对柠檬烯底物添加浓度进行了调整,与大肠杆菌BL21(DE3)一同进行柠檬烯生物合成紫苏醇实验,并使用紫外可见分光光度计和GC-MS分别测量菌株生长状况和紫苏醇产量。最终证明了恶臭假单胞菌F1在柠檬烯浓度为10 mmol/L内的环境中具有高耐受度,且添加1 mmol/L柠檬烯底物发酵48 h后获得最高产量75.6 mg/L,最高转化率达到49.66%,缩小了生物合成紫苏醇的底物添加范围,并获得对柠檬烯具有高耐受度的发酵宿主。

孔雀石绿脱色菌恶臭假单胞菌菌株M6的分离、鉴定及其生长特性研究

从养殖池污泥中分离了6株对孔雀石绿具有脱色能力的菌株,经过进一步在孔雀石绿营养肉汤中富集培养及其脱色率的比较,筛选出对孔雀石绿具有较强脱色能力的优良菌株M6。菌株M6在30°C、150r/min条件下对孔雀石绿的脱色率为97.14%,通过革兰氏染色、电镜对其形态进行了观察,用ATB细菌鉴定仪对其进行了生理生化鉴定;通过对其16SrDNA序列进行PCR扩增和测序,与NCBI中收录的与其同源性较高的菌株进行了聚类分析并构建了系统发育树。此外,对其生长特性也进行了研究。实验结果表明,菌株M6革兰氏染色阴性,杆形,端生一根鞭毛,大小约为0.45μm×0.84μm,在孔雀石绿营养琼脂平板上形成的菌落特征为圆形、浅蓝色、粘稠、不易挑取;菌株M6的16SrDNA序列与GenBank基因库中假单胞菌属的细菌菌株的16SrDNA序列有98%~99%的高度同源性,菌株M6与恶臭假单胞菌OW-16(登录号:DQ112328.1)的亲缘关系最近。结合传统的形态与生理生化特性鉴定以及16SrDNA序列分析鉴定的结果,判定菌株M6为恶臭假单胞菌(Pseudomonasputida)(登录号:EU348741.1)。此外,菌株M6在30°C、150r/min条件下摇床振荡培养的生长曲线为:0h^4h为生长延迟期,4h^64h为对数生长期,64h^80h为稳定期,80h以后为衰亡期;其最适生长pH值为7,最适生长温度为30°C,在转速为50r/min^250r/min条件下,其浓度随转速的增加而增大。

一株鸭源恶臭假单胞菌16S rDNA的序列测定与分析

从病鸭翅静脉无菌采集抗凝血,直接镜检和姬姆萨染色镜检,微生物感染呈阳性.从血液中分离出该微生物,用细菌16S rDNA通用引物扩增出约1500bp的条带,经DNA测序得到一条长1499bp的16S rDNA序列,与GeneBank已提交的序列进行BLAST相似性搜索表明该微生物应归属于假单胞菌属(Pseudomonas),并用DNAStar进行同源性分析并构建系统进化树,显示与恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)同源性最近,首次发现恶臭假单胞菌可能感染家鸭.

覆土层益生菌恶臭假单胞菌TK3对双孢蘑菇的促生作用

为研究恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)TK3对双孢蘑菇(Agaricus bisporus)的促生作用,用红色荧光蛋白rfp基因标记菌株TK3,获得的转化子TK3(rfp)在紫外光照射下发出红色荧光,且转入的rfp基因未对TK3细胞产生毒性。将TK3(rfp)与双孢蘑菇菌丝进行共培养,发现TK3(rfp)可促进双孢蘑菇菌丝的生长并促进菌丝扭结成团。在覆土层中喷施TK3(rfp)菌液,20d后覆土层中细菌总数和TK3(rfp)数量随着TK3(rfp)喷施量的增加而增加,说明TK3(rfp)能在覆土层中定殖,当喷施浓度为每克覆土107cfu时,与对照相比,双孢蘑菇子实体产量增加24.9%。

一株对TMV具有显著拮抗活性的恶臭假单胞菌的筛选与鉴定

由烟草普通花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)引起的烟草病毒病是我国烟草上主要的病害之一,是影响我国烟草产量和质量的主要制约因素.本研究从TMV重病区中未发病的K326烟株根际土壤中筛选出对TMV具有高度拮抗活性菌株A3,用半叶法接种,对TMV的抑制效果可达95%以上.利用革兰染色及其一系列生理生化试验,结合该菌株的16S rDNA序列测定,对该菌株进行了鉴定.试验结果表明,菌株A3的革兰染色为阴性,专性需氧型,能以柠檬酸盐作为碳素的营养来源,可以将硝酸盐还原成亚硝酸盐,具有过氧化氢酶活力,但不能分解明胶、淀粉等大分子物质;在平板培养基上形成的菌落约3 mm,边缘整齐,湿润光滑,扁平突起,黏稠,呈淡红色;其16S rD-NA序列与GenBank数据库中假单胞菌属的细菌菌株的16S rDNA序列有98%～99%的高度相似性.结合其生理生化特性鉴定以及16S rDNA序列分析鉴定的结果,判定菌株A3为恶臭假单胞菌Pseudomonas putida,并对其生产可用性进行了讨论.

假单胞菌23—1菌株烃代谢产生表面活性剂的研究

Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ２３—１菌株烃代谢产生一种胞外糖脂类表面活性剂。分析表明，糖脂的糖基为鼠李糖，脂肪酸是十碳癸酸。发酵液糖脂含量１１．５ｇ／Ｌ，其临界胶束浓度（ＣＭＣ）为２００ｍｇ／Ｌ，乳化性能稳定。产生糖脂类生物表面活性可能是该菌株微生物采油增油效果显著的主要原因。

假单胞菌23-1菌株烃代谢产生有机酸和气体的研究

假单胞菌 2 3- 1烃代谢产生乙酸 ,产酸量 0 .0 15mol/L ;产生 CO2 和 CH4 两种气体 ,产气量 2 0 m L /L。产酸产气 2 3- 1菌株成为微生物采油优良菌种。

恶臭假单胞菌TS1138转化生产L-胱氨酸的工艺研究

对以DL-2-氨基-△^2-噻唑啉-4-羧酸（DL-2-amino-A2thiazoline-4-carboxylic acid，DL—ATC）为底物原料，经微生物酶法催化合成L-半胱氨酸，并进一步氧化和分离纯化产物L-胱氨酸的生产工艺和条件进行了研究。建立了以恶臭假单胞菌TS1138（Pseudomonas putida TS1138）全细胞为酶源，反复多次催化底物合成L-半胱氨酸，并以2．0％二甲基亚砜（DMSO）为氧化剂氧化生成L-胱氨酸，进而通过001×7型阳离子交换树脂纯化胱氨酸的新工艺。采用高效液相色谱法考察该方法L-胱氨酸的总收率可以达到78．55％，纯度为99．12％。该方法简单高效，解决了酶稳定性差不能重复使用，而固定化酶方法繁琐成本高的问题，为我国L-半胱氨酸和L-胱氨酸的生产开辟一条新途径。

交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)DY3菌株产内切葡聚糖酶的性质研究及基因克隆

从深海样品ES0 10 9中分离到一株具有高内切葡聚糖酶活力的细菌DY3 ,16SrDNA序列分析表明该菌与交替假单胞菌属 (Pseudoalteromonassp .)的Pseudoalteromonascitrea和Pseudoalteromonaselyakovii的同源性为 99%。PCR扩增DY3的内切葡聚糖酶基因celX全长 14 79bp ,编码一个 492AA的蛋白质。酶的氨基酸序列分析表明CelX与Pseudoalteromonashaloplanktis的内切葡聚糖酶CelG有 95%的相似性 ,包括一个糖基水解酶家族 5的催化结构域 ,一个连接序列和位于C端的的CBM5结构域。对酶性质的初步研究发现 ,CelX的最适温度为 40℃ ,酶的最适pH在 6～

蒙氏假单胞菌3A菌株对烟草漂浮育苗中TMV的钝化效果

选用对烟草花叶病毒Tobacco mosaic virus(TMV)具有显著拮抗活性的蒙氏假单胞菌Pseudomonas monteilii3A菌株对烟草漂浮育苗过程中被TMV污染的育苗棚、育苗盘、基质及剪叶机械等进行生物钝化,并利用real-time RT-PCR对污染基质中TMV的含量进行了定量检测。结果显示,200、400倍及600倍P.monteilii 3A菌悬液稀释液均可显著钝化病苗残留干叶及干根中的TMV;剪叶机械经不同稀释倍数的P.monteilii 3A菌悬液处理后,在一定程度上抑制了TMV的发生,相对防效达51.42%~100%;基质经不同稀释倍数的P.monteilii 3A菌悬液处理后,其中TMV的含量也下降了72.73%~88.46%,对TMV的相对防效达61.56%~87.46%。其中,200倍P.monteilii 3A稀释液处理育苗棚、育苗盘20min以上,浸泡剪叶机械1min以上对TMV钝化效果最好。

恶臭假单胞菌H_(2-3)降解水杨酸和烷烃的研究

随着石油化工工业的发展,难分解的烃类化合物给环境带来的污染引起了普遍的关注。微生物对环境中难分解化合物的降解和转化是当今环境微生物学研究的重要内容之一。尤其是芳香烃化合物如酚、萘、水杨酸、氯代芳烃等生物降解在近半个世纪以来逐步得以广泛深入的研究。至于细菌对于烃类物质的降解遗传控制只是从七十年代开始。早在1972年美国Chakrabaty研究了假单胞菌降解水杨酸的遗传基础。

恶臭假单胞菌株HZ-2产嗜铁素的发酵条件研究

为明确恶臭假单胞菌株HZ-2产嗜铁素的发酵条件,采用摇瓶发酵法,通过CAS检测分析,对影响嗜铁素分泌的几种发酵因子进行了研究。结果表明,适合嗜铁素分泌的最佳培养条件是:pH值为6.5,接种量为2%,发酵时间为48 h,装瓶量为50/150 mL,Fe3+浓度为0.1 mg/L,Al3+浓度为2.7 mg/L。

L-半胱氨酸产生菌恶臭假单胞菌TS1138的鉴定和诱变育种

从土壤中分离得到一株利用DL-2-氨基-Δ2-噻唑啉-4-羧酸合成L-半胱氨酸的TS1138菌株,通过形态学特征、生理生化特征、(G+C)(摩尔分数)和16S rRNA基因序列对其进行了分类鉴定,确定TS1138菌株为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida).该菌株具有将DL-2-氨基-Δ2-噻唑啉-4-羧酸不对称地水解生成L-半胱氨酸的性能.采用了L-半胱氨酸产物的检测方法即18-磷钨酸法、薄层层析法和旋光度法.将TS1138菌株进行亚硝基胍诱变,得到TS1138菌株脱巯基酶缺失突变株TS1138-10,其产L-半胱氨酸能力较出发菌株提高了5000/以上.TS1138-10的稳定性实验表明,该菌株的高产L-半胱氨酸能力具有稳定性的遗传特性.

恶臭假单胞菌ND6菌株catA基因的克隆和表达及其儿茶酚裂解途径探讨

恶臭假单胞菌ND6菌株的萘降解质粒pND6-1中编码儿茶酚1,2-双加氧酶的catA基因在大肠杆菌中进行了克隆和表达,并研究表达产物的酶学性质。结果表明:酶的Km为0.019μmol/L,Vmax为1.434μmol/(min.mg);具有很好的耐热性,在50℃保温45min后仍能够保留酶活力的93.7%;Fe2+对酶活性有显著的促进作用,其比活力是对照反应的292%;酶对4-氯儿茶酚的催化活性非常低,属于Ⅰ型儿茶酚1,2-双加氧酶。以萘为底物生长时,ND6菌株的细胞提取液中既存在催化邻位裂解途径的儿茶酚1,2-双加氧酶活性,也存在催化间位裂解途径的儿茶酚2,3-双加氧酶活性。以苯甲酸、对羟基苯甲酸和苯乙酸为唯一碳源生长时,ND6菌株细胞提取液的儿茶酚1,2-双加氧酶活性远远大于儿茶酚2,3-双加氧酶活性。表明ND6菌株既能通过儿茶酚间位裂解途径降解萘,也能通过儿茶酚邻位裂解途径降解萘,而以苯甲酸、对羟基苯甲酸和苯乙酸为诱导物时只利用儿茶酚邻位裂解途径。

基于TLR4/NF-κB通路探究NLRP3对铜绿假单胞菌的清除机制

目的基于TLR4/NF-κB通路探究NLRP3对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)的清除机制。方法采用PA感染的HP-1诱导分化的巨噬细胞和原代人单核来源巨噬细胞,然后沉默巨噬细胞中NLRP3(si-NLRP3)和TLR4(si-TLR4),用ELISA检测上清液中IL-1β和IL-8的表达水平;RT-PCR检测细胞中NLRP3、caspase-1 mRNA表达;蛋白质印迹检测细胞中TLR4、p-NF-κB P65蛋白表达。结果铜绿假单胞菌感染的THP-1诱导分化的巨噬细胞和原代人单核来源巨噬细胞hMDMs上清液中IL-1β、IL-8水平、NLRP3、caspase-1 mRNA表达及TLR4、p-NF-κB P65蛋白表达明显增加(P<0.05)。和si-NC组相比,THP-1诱导分化的巨噬细胞和原代人单核来源巨噬细胞hMDMs沉默NLRP3和TLR4后的si-NLRP3和si-TLR4组上清液中IL-1β、IL-8表达、NLRP3、caspase-1 mRNA表达及TLR4、p-NF-κB P65蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。和si-NC组相比,沉默PA感染的THP-1巨噬细胞和原代人单核来源巨噬细胞hMDMs中NLRP3和TLR4表达细胞清除率明显增加(P<0.05)。结论沉默NLRP3可增加巨噬细胞对PA的清除作用,其作用机制可能和抑制TLR4/NF-κB信号通路激活有关。