恶臭假单胞菌HB3S-20在棉花中的定殖及诱导抗性研究

植物内生菌是防治植物病害的重要生防资源。恶臭假单胞菌Pseudomonas putida HB3S-20是本实验室从棉花内生细菌中所筛选到的一株对棉花黄萎病具有显著防效的潜在生防菌株。本研究采用利福平抗性标记技术和绿色荧光蛋白(GFP)标记技术检测了菌株HB3S-20在棉花组织中的定殖动态和定殖位点,并检测了菌株HB3S-20接种棉花植株后植物防御相关酶SOD、POD和CAT酶活性的变化。利福平标记试验结果表明,菌株HB3S-20主要定殖于根部,棉株接种菌株HB3S-20后第3~30 d检测到棉花根部内的菌量范围为2.2×10^(4)~6.7×10^(4)cfu/g,检测到棉花茎部内的菌量为0.04×104~2.7×10^(4)cfu/g,棉花茎部内的菌量低于根部,但在叶片中未被分离到。GFP标记试验结果表明,菌株HB3S-20不仅能附着在棉花根系表面,还能定殖在根部维管组织中。此外,菌株HB3S-20能够提高棉花中植物防御相关酶SOD和POD的活性,说明菌株HB3S-20能够诱导棉花植株的系统抗性,增强棉花抗病性。本研究初步揭示了恶臭假单胞菌HB3S-20在棉花组织内的定殖规律及其对棉株产生的诱导抗性,为菌株HB3S-20的防病机制研究提供了理论依据。

一株鸭源恶臭假单胞菌16S rDNA的序列测定与分析

从病鸭翅静脉无菌采集抗凝血,直接镜检和姬姆萨染色镜检,微生物感染呈阳性.从血液中分离出该微生物,用细菌16S rDNA通用引物扩增出约1500bp的条带,经DNA测序得到一条长1499bp的16S rDNA序列,与GeneBank已提交的序列进行BLAST相似性搜索表明该微生物应归属于假单胞菌属(Pseudomonas),并用DNAStar进行同源性分析并构建系统进化树,显示与恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)同源性最近,首次发现恶臭假单胞菌可能感染家鸭.

香芹酚对恶臭假单胞菌的抑制作用

以恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)为对象,通过测定恶臭假单胞菌生长曲线、群集性、泳动性、核酸泄漏情况及产胞外蛋白酶和生物被膜能力等指标,考察不同体积分数香芹酚对恶臭假单胞菌的抑菌效果。结果表明:当香芹酚体积分数≥0.015%时,对恶臭假单胞菌的生长、运动能力、产胞外蛋白酶和生物被膜能力具有极显著抑制作用(P<0.01);当香芹酚体积分数为0.025%时,恶臭假单胞菌所产生物被膜含量比空白组极显著减少86.35%(P<0.01)。香芹酚可通过抑制生长、产生物被膜能力及运动能力破环细胞膜通透性,导致大量细胞内容物泄漏,从而对恶臭假单胞菌产生抑菌作用。

河南144所医院2019~2020年恶臭假单胞菌感染临床特点及药敏分析

目的:分析河南省144所医院恶臭假单胞菌感染现状、临床特点及耐药性情况,并比较不同级别医院细菌耐药性差异,为院内感染控制及临床治疗提供参考。方法:收集2019年1月~2020年12月期间河南省144所医院上报的470例恶臭假单胞菌感染患者数据,分析标本来源、科室分布、药敏情况、不同级别医院细菌耐药性差异。结果:恶臭假单胞菌感染以男性、老年患者居多;标本来源以非呼吸道标本占比高(247株,52.6%);科室分布以重症医学科(98株,20.9%)、骨科(60株,12.8%)和呼吸内科(40株,8.5%)为主。药敏试验结果显示,恶臭假单胞菌对多黏菌素B、庆大霉素的耐药率较低,其余药物的耐药率均>30%;三级医院氨苄西林/舒巴坦、氯霉素、复方磺胺甲唑、美罗培南、氨曲南的耐药率均高于二级医院(P<0.05)。结论:该地区恶臭假单胞菌感染多见于老年、男性、重症患者,恶臭假单胞菌对多种药物耐药率较高,对多黏菌素B敏感性好,且三级医院多种药物的耐药率均高于二级医院。临床需重点关注高危患者,加强合理用药及医院感染控制。

携带bla_(VIM-2)耐药基因的恶臭假单胞菌致皮肤感染一例并文献复习

恶臭假单胞菌能够引起多种鱼类的败血性感染,但对人的致病性一直被忽视。本研究从一例63岁男性患者左下肢皮肤伤口中分离到一株优势细菌,经生化鉴定和16S RNA测序分析确认为恶臭假单胞菌。进一步对其进行药敏试验,发现该菌株对氨苄西林、多种头孢类抗生素、碳青霉烯类抗生素、复方新诺明耐药,耐药基因检测发现该分离株携带抗碳青霉烯类bla_(VIM-2)耐药基因。根据药敏试验结果选用头孢他啶注射液2 g,每日两次,疗程14天,外用夫西地酸乳膏,每日2次,2个月后患者皮损完全愈合。

恶臭假单胞菌F1表达P450酶催化柠檬烯生物合成紫苏醇

紫苏醇是一种天然存在的单萜类化合物,在医药、日化、食品等行业具有广阔应用前景,但利用柠檬烯生物合成中的过程中存在选择性不强、底物对宿主菌株有毒性等问题。为此该文选择恶臭假单胞菌F1这种对环境具有高耐受度的菌株,构建在大肠杆菌和恶臭假单胞菌中皆可扩增并表达目的基因的广宿主载体,过表达选择性羟化酶CymAa、CymAb,异源表达特异性氧化柠檬烯生成紫苏醇的P450酶CYP153A6,并在表达P450酶的基础上对柠檬烯底物添加浓度进行了调整,与大肠杆菌BL21(DE3)一同进行柠檬烯生物合成紫苏醇实验,并使用紫外可见分光光度计和GC-MS分别测量菌株生长状况和紫苏醇产量。最终证明了恶臭假单胞菌F1在柠檬烯浓度为10 mmol/L内的环境中具有高耐受度,且添加1 mmol/L柠檬烯底物发酵48 h后获得最高产量75.6 mg/L,最高转化率达到49.66%,缩小了生物合成紫苏醇的底物添加范围,并获得对柠檬烯具有高耐受度的发酵宿主。

基于16S rRNA测序技术分析桶装水中野生铜绿假单胞菌的系统发育

目的以铜绿假单胞菌16S rRNA为研究对象,利用16S rRNA测序分析技术构建系统发育树,研究湖南省内28株野生水源性铜绿假单胞菌的系统发育。方法收集28株野生阳性铜绿假单胞菌,利用27F/1492R通用引物进行16S rRNA PCR扩增,将胶回收产物进行测序,测序结果利用MEGA 11.0构建系统发育树,并进行遗传距离计算。结果28株铜绿假单胞菌可分为3支,一株来源于永州的菌株单独为一支,3株分别来源于常德、永州、郴州的菌株聚为一支,其余24株聚为一支;28株铜绿假单胞菌平均遗传距离为0.0064。结论28株野生铜绿假单胞菌之间具有高度同源性,通过实验进一步完善了水源性铜绿假单胞菌溯源数据库,为桶装水铜绿假单胞菌污染源监测提供了理论依据。

棘胸蛙恶臭假单胞菌的分离鉴定及药敏分析

为进一步调查研究棘胸蛙(Quasipaa spinosa)的烂皮病,从病蛙皮肤患处分离出一株优势生长菌,经菌落培养、革兰氏染色观察、质谱分析、16S r RNA基因PCR(聚合酶链式反应)产物测序、回归感染试验,鉴定该革兰氏阴性杆菌为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)。药敏试验结果表明:该恶臭假单胞菌分离株对多黏菌素、左氧氟沙星、链霉素、庆大霉素和阿米卡星敏感,对复方新诺明和红霉素中度敏感,对氯霉素、头孢唑林、氨苄西林和青霉素耐药。该研究结果为棘胸蛙烂皮病的理论研究和防治实践提供一定的依据。

恶臭假单胞菌生物滴滤塔净化甲苯废气的研究

在接近于工业化应用的非稳态条件下，采用恶臭假单胞菌为菌源接种生物滴滤塔，处理含甲苯废气．研究了滤塔的挂膜启动情况与稳定运行阶段抗负荷变化能力，并对滤塔内生物膜微观结构进行了观察分析．在停留时间为548和43．28，进气甲苯浓度为544-1044mg·m^-3，环境温度为17-26℃的操作条件下，滤塔气体出口检测不到甲苯，最大体积去除负荷为105．35g·（m^3·h）^-1．结果表明，在非稳定条件下，以未经甲苯驯化筛选的恶臭假单胞菌作为菌源降解甲苯废气是可行的；稳定运行阶段滤塔具有较强的抗负荷变化能力，进气浓度与停留时间的变化不会引起处理性能的下降；通过控制营养液添加间隔可以较好地控制生物膜的快速增长；滤塔内微生物菌落发生了变化，大量微孔结构的存在证明了微孔的吸附是生物膜降解甲苯的重要前提．

黑鲷肠炎病原恶臭假单胞菌的分离和鉴定

2008年3月,浙江省象山港养殖黑鲷暴发了严重的肠炎病情,病鱼肠道肿胀,充满黄色黏液。以ZoBell2216E平板自病鱼肠道黏液分离到4株菌BB01、BB02、BB03和BB04。通过人工感染试验验证了前3株为病原菌,其中BB01菌株96h的半数致死浓度LD50为4.61×104CFU/g鱼体重。3株分离菌革兰氏染色阴性,短杆状,氧化酶试验阳性,氧化葡萄糖,不产气,4℃生长,精氨酸双水解酶阳性,利用麦芽糖、柠檬酸盐,硝酸盐降解阳性,DNA酶、乙酰胺酶阴性;与已发表的恶臭假单胞菌16SrRNA序列的同源性达99%以上;经形态和理化特性鉴定及16SrDNA序列测定,此3株菌同属于恶臭假单胞菌。药敏试验结果表明,菌株BB01对头孢类等多数抗生素种类敏感,而对氧氟沙星耐药。

多药耐药铜绿假单胞菌16SrRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的研究铜绿假单胞菌连续分离株的16S rRNA甲基化酶及氨基糖苷类修饰基因的分布状况。方法以K-B法检测铜绿假单胞菌对17种抗菌药物的耐药性;以PCR法检测20株铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶及氨基糖苷类修饰酶基因;以PCR直接全自动荧光法进行阳性基因测序。结果20株铜绿假单胞菌检出1种16S rRNA甲基化酶基因(rmtB);检出5种氨基糖苷类修饰酶基因,分别为:aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ;1号株和3号株进行甲基化rmtB基因测序,将测得序列翻译成氨基酸序列与美国核酸库已登录的rmtB氨基酸序列比较,均存在氨基酸序列差别,因此均可确认为新亚型。结论医院铜绿假单胞菌氨基糖苷类抗菌药物耐药主要与16S rRNA甲基化酶编码基因rmtB及5种氨基糖苷类修饰基因有关,并发现两种铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶编码基因rmtB新亚型。

孔雀石绿脱色菌恶臭假单胞菌菌株M6的分离、鉴定及其生长特性研究

从养殖池污泥中分离了6株对孔雀石绿具有脱色能力的菌株,经过进一步在孔雀石绿营养肉汤中富集培养及其脱色率的比较,筛选出对孔雀石绿具有较强脱色能力的优良菌株M6。菌株M6在30°C、150r/min条件下对孔雀石绿的脱色率为97.14%,通过革兰氏染色、电镜对其形态进行了观察,用ATB细菌鉴定仪对其进行了生理生化鉴定;通过对其16SrDNA序列进行PCR扩增和测序,与NCBI中收录的与其同源性较高的菌株进行了聚类分析并构建了系统发育树。此外,对其生长特性也进行了研究。实验结果表明,菌株M6革兰氏染色阴性,杆形,端生一根鞭毛,大小约为0.45μm×0.84μm,在孔雀石绿营养琼脂平板上形成的菌落特征为圆形、浅蓝色、粘稠、不易挑取;菌株M6的16SrDNA序列与GenBank基因库中假单胞菌属的细菌菌株的16SrDNA序列有98%~99%的高度同源性,菌株M6与恶臭假单胞菌OW-16(登录号:DQ112328.1)的亲缘关系最近。结合传统的形态与生理生化特性鉴定以及16SrDNA序列分析鉴定的结果,判定菌株M6为恶臭假单胞菌(Pseudomonasputida)(登录号:EU348741.1)。此外,菌株M6在30°C、150r/min条件下摇床振荡培养的生长曲线为:0h^4h为生长延迟期,4h^64h为对数生长期,64h^80h为稳定期,80h以后为衰亡期;其最适生长pH值为7,最适生长温度为30°C,在转速为50r/min^250r/min条件下,其浓度随转速的增加而增大。

16S rDNA用作荧光定量PCR靶基因快速检测铜绿假单胞菌

对20余种细菌16SrDNAs进行多序列比对与进化树分析,设计铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa,PA)荧光定量PCR(fluorescencequantitativePCR,FQ-PCR)特异性引物。提取PA基因组DNA,以特异性引物扩增16SrDNA靶片段,并构建重组质粒pMDT-Pfr。将梯度稀释的pMDT-Pfr质粒作为模板,用于建立定量标准曲线。以SYBRGreenI荧光染料建立20μL反应体系,对不同浓度的PADNA样品进行FQ-PCR检测。同时,以金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌、福氏志贺菌、变形杆菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌和结核杆菌的基因组DNA作阴性对照,验证FQ-PCR方法检测PA的特异性。结果显示,设计的FQ-PCR引物的靶向序列,仅对PA16SrDNA有高度同源性;FQ-PCR方法检测PA,其灵敏度达3.6pg/μL的基因组DNA或(2.1×103±3.1×102)拷贝/μL的16SrDNA基因,并且具有很强的特异性;从细菌DNA提取到FQ-PCR检测,可在2h左右完成PA鉴定。较传统的培养鉴定法而言,以16SrDNA作为FQ-PCR靶基因快速检测PA,具有很好的研究价值与应用前景。

高产嗜铁素恶臭假单胞菌A3菌株的鉴定及其对黄瓜的促生作用

从大棚蔬菜根际土中分离到一株嗜铁素高产菌株A3,铬天青(CAS)法定量检测其嗜铁素相对含量达93.40%,Shenker's实验确定为羧酸型嗜铁素。在不同底物诱导下,该菌株可不同程度地产生吲哚乙酸(IAA)及1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)脱氨酶,并具有一定的溶磷能力。根据形态特征、生理生化、API系统及16S rRNA基因序列分析,将菌株A3鉴定为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)。在缺铁Hoagland营养液中添加难溶性铁及菌株A3嗜铁素发酵滤液的处理组,能够显著提高黄瓜幼苗的株高、根长、叶长、鲜重及叶绿素含量,表明菌株A3产生的嗜铁素在低铁条件下对黄瓜幼苗具有促生作用。

椰毒假单胞菌酵米面亚种16S rDNA序列测定与分析

本文对３种不同来源样品的４株椰酵假单胞菌的１６ＳｒＤＮＡ的序列进行了测定，以确定其系统发育位置及与其它菌种的遗传进化关系。实验中设计了７条引物，利用聚合酶链式反应（ＰｏｌｙｍａｓｅＣｈａｉｎＲｅ－ａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）扩增４株细菌的１６ＳｒＤＮＡ，通过扩增产物的克隆测序或直接测序，获得了它们的１６ＳｒＤＮＡ序列，将测得的序列与伯克霍尔德氏菌属中其它菌种的１６ＳｒＤＮＡ序列进行了聚类分析，得到了系统发育进化树状图。树状图及不同菌种之间的同源性比值：椰酵假单胞菌（Ｐ．ｃｏｃｏｖｅｎｅｎａｎｓｓｕｂｓｐ．ｆａｒｉｎｏｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ）与唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａｇｌａｄｉｏｌｉ）、椰毒伯克霍尔德氏菌（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａｃｏｃｏｖｅｎｅｎａｎｓ）的亲缘关系非常近，与其它菌种的亲缘关系相对较远，椰酵假单胞菌、唐菖蒲伯克霍尔德氏菌和椰毒伯克霍尔德氏菌可归属于一个独立的系统发育系。

丙酸杆菌代谢物对恶臭假单胞菌抑制活性

以化学防腐剂山梨酸钾作对照,对天然防腐剂丙酸杆菌代谢物的对恶臭假单胞菌的抑菌特性进行了研究.对比了SLB、脱脂奶粉和葡萄糖碳源培养基3种不同成分的培养基培养得到丙酸杆菌代谢物的抑菌活性,4～8 d的葡萄糖培养基的代谢物抑菌效果很好,第8天达到最大值25.2 AU/mL.从抑菌效果和生产成本考虑,葡萄糖培养基均优于其他两种培养基.研究结果表明:pH值越低丙酸杆菌代谢物抑菌活性越高.在pH 5.5时,丙酸杆菌代谢物的抑菌活性最高,为26.9 AU/mL.

杂交鲟源恶臭假单胞菌的分离鉴定及药敏特性研究

对患肠炎病杂交鲟进行病原分离、鉴定及药敏试验,为杂交鲟肠炎病的防控提供参考。从患病杂交鲟肝、肾、脾及肠道中分离纯化病原菌,经理化特性测定及16S rRNA序列分析对其进行鉴定,开展人工感染试验,并利用K-B法进行药敏特性分析。结果显示,分离到的XY4菌株是本次引发杂交鲟病害的致病菌,其对杂交鲟的LD_(50)为1.30×10~6cfu·g^(-1)。XY4菌株理化特性与恶臭假单胞菌一致,16S rRNA序列与恶臭假单胞菌同源性为100%,综合判定XY4菌株为恶臭假单胞菌。XY4菌株对头孢拉定、氟苯尼考及多西环素等9种抗生素高度敏感。养殖时可选用对恶臭假单胞菌敏感药物进行防控。

覆土层益生菌恶臭假单胞菌TK3对双孢蘑菇的促生作用

为研究恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)TK3对双孢蘑菇(Agaricus bisporus)的促生作用,用红色荧光蛋白rfp基因标记菌株TK3,获得的转化子TK3(rfp)在紫外光照射下发出红色荧光,且转入的rfp基因未对TK3细胞产生毒性。将TK3(rfp)与双孢蘑菇菌丝进行共培养,发现TK3(rfp)可促进双孢蘑菇菌丝的生长并促进菌丝扭结成团。在覆土层中喷施TK3(rfp)菌液,20d后覆土层中细菌总数和TK3(rfp)数量随着TK3(rfp)喷施量的增加而增加,说明TK3(rfp)能在覆土层中定殖,当喷施浓度为每克覆土107cfu时,与对照相比,双孢蘑菇子实体产量增加24.9%。

恶臭假单胞菌对碳酸钙的诱导矿化作用

本文研究一株分离自白云岩表面的恶臭假单胞菌DCB13菌株对CaCO3的诱导矿化作用．将恶臭假单胞菌DCB13菌株接种到修改后的牛肉膏蛋白胨液体培养基（牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g、CaCl2 2g、玻璃粉2g、蒸馏水1L、pH6．5～7．5）中培养7d，每24h取培养基上清液10mL，离心后用于测定培养液pH值、碳酸酐酶（CA）活性、HCO3^-及Ca^2＋浓度，借助X-射线衍射（XRD）、透射电子显微镜（TEM）及能谱分析（EDS）等方法分析培养7d后培养液沉淀物中是否有CaCO3生成；用不同CaCl2浓度的牛肉膏蛋白胨培养基培养该菌，培养7d后用称量法测定CaCO3的生成量，并计算Ca^2＋固定为CaCO3的转化率．实验结果表明，接人恶臭假单胞菌能提高该培养液的pH值，培养液中HCO3^-及Ca^2＋浓度随培养时间有显著下降的趋势，XRD、TEM均检测出培养液底部沉淀物中有生物成因CaCO3生成，Ca^2＋固定为CaCO3的转化率可达25％以上．该研究结果对碳酸盐的微生物诱导合成研究提供了新的线索．