肺癌恶性胸腔积液来源肿瘤细胞的小鼠PDX模型构建及实验验证

目的·构建肺癌患者恶性胸腔积液(malignant pleural effusion,MPE)肿瘤细胞来源的肿瘤异种移植(patientderived tumor xenograft,PDX)模型,并进行实验验证。方法·从基因表达综合数据集(Gene Expression Omnibus,GEO)下载人肺癌伴MPE单细胞转录组测序公共数据GSE131907和人肺癌实体瘤单细胞转录组测序公共数据GSE203360,对数据进行聚类、差异基因本体功能富集分析,明确应用MPE建模的可行性。同时收集肺癌患者的MPE样本,经离心、裂解红细胞等富集细胞操作后,将其植入非肥胖型糖尿病重症联合免疫缺陷(non-obese diabetic/severe combined immunodeficient,NOD/SCID)小鼠皮下,待移植瘤生长至1000 mm³时进行瘤体传代及保存。对稳定传代移植瘤进行组织病理学检测,通过苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,H-E染色)观察细胞组织形态,免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)检测肺癌标志物表达情况。结果·经单细胞数据分析发现MPE中肿瘤细胞的增殖功能更强,提示MPE中肿瘤细胞PDX建模或具备更佳成瘤效果;共收集35例肺癌MPE样本,成功构建13例PDX模型,成功率达37.14%;在组织病理学检测中,H-E染色可见移植瘤组织细胞异型性明显,IHC检测显示细胞角蛋白7(cytokeratin 7,CK7)、甲状腺转录因子1(thyroid transcription factor-1,TTF1)和天冬氨酸蛋白酶A(Napsin A)等肺癌标志物均呈阳性表达。结论·通过富集肺癌患者MPE中的肿瘤细胞,成功构建了更为简便高效、可实时动态建模的PDX模型。该模型保留了肺癌患者肿瘤细胞的恶性特征及蛋白表达特性,为肺癌伴MPE患者的基础研究和临床用药指导提供了重要的实验模型工具。

肿瘤患者来源的异种移植(PDX)模型

将患者新鲜肿瘤组织移植于免疫缺陷小鼠建立的患者来源异种移植(patient-derived xenograft,PDX)模型较好地保持了原发肿瘤的遗传特性和异质性,在肿瘤的个体化治疗研究中具有独特的优势。常用PDX模型的移植方法主要有皮下移植、肾包膜移植和原位移植。移植瘤的溯源方法包括组织形态学比较、肿瘤特异性标志物分析、短片段重复序列分型和测序分析。在PDX模型研究中,需要重点关注影响模型成功率的因素、人源化问题、淋巴瘤的发生和药物评价中治疗策略的选择。虽然从目前临床数据来看,基于PDX模型的个体化治疗还没有显示出实质性疗效,仍处于临床验证阶段,但PDX模型的建立和应用为肿瘤学研究,特别是肿瘤的个体化治疗提供了良好的实验平台。我们在强调PDX模型个体化的同时,要善于应用共性思维,开展基于PDX模型基因组学的肿瘤靶向药物筛选。

基于人源化免疫重建的患者来源肿瘤组织异种移植模型的研究进展

将患者的肿瘤组织移植于免疫缺陷小鼠体内建立的肿瘤移植模型(patient-derived xenograft, PDX)较好地保留了原发瘤的生物学特性,但瘤组织基质成分会在小鼠体内传代过程中逐渐被鼠源性基质代替,缺乏免疫系统的小鼠体内环境也会改变肿瘤的微环境,原发肿瘤的异质性会逐渐丢失,从而限制了该类模型的应用;将人的造血干细胞(hematopoietic stem cells, HSCs)移植于低剂量X线全身照射或其他方法清理骨髓的重度免疫缺陷小鼠,然后再将患者的瘤组织移植于该小鼠建立的人源化肿瘤模型(humanized patient-derived xenograft, Hu-PDX),具有与人相似的免疫系统,可以更好的保留原发瘤的异质性。研究证实人的HSCs在小鼠体内可以产生各种免疫细胞,使肿瘤生长微环境与人体更相似,更好的保留了肿瘤的异质性,为肿瘤的个体化研究提供了良好的动物模型。

结直肠癌PDX模型成瘤率的影响因素及临床意义

目的建立结直肠癌(CRC)患者来源的肿瘤组织异种移植(PDX)模型,评估PDX模型成瘤率的影响因素,并初步进行化学治疗实验。方法选取2019年11月至2020年10月绍兴市人民医院择期手术CRC患者。将手术获取的肿瘤组织接种于NSG小鼠右侧腰背部,建立PDX模型,并传至F3代,分析PDX模型成瘤率的影响因素;化学治疗药物选择5-氟尿嘧啶、奥沙利铂以及丙泊酚。结果本研究共纳入60例CRC患者,PDX模型成瘤为37例,成瘤率62%;平均成瘤时间为(34±12)d;原发瘤恶性程度(CRC分期和细胞分化程度)、术前癌胚抗原(CEA)水平以及肿瘤位置等因素影响PDX模型成瘤率(P<0.01)。CRC-PDX移植瘤组织与患者肿瘤组织生物学特征高度一致。4种化学治疗方案均能抑制肿瘤生长,致肿瘤组织破坏,丙泊酚可以抑制小鼠腹泻,对肠黏膜具有保护作用。结论本研究建立的CRC-PDX模型,较好地保持原发肿瘤的生物学特性,可作为CRC患者个体化治疗的参考模型。原发肿瘤恶性程度是PDX模型成瘤率的主要影响因素。

用于预测癌症患者临床治疗方案的小鼠mini人源肿瘤异种移植模型的建立

背景与目的患者来源的类器官(patient-derived organoids,PDOs)和异种移植物(patientderivedxenografts,PDXs)具有较强的预测抗癌药物药效的能力,是功能检测的重要模型。然而,移植失败、构建PDX模型和随后检测药效的耗时过长、体外器官培养无法进行系统性给药等限制因素严重阻碍了其在临床上的应用,无法快速地筛选正确、可行的治疗方案。本研究旨在开发一种名为'miniPDX'的改良的PDX模型,用于快速检测药效,提高其在个体化癌症治疗中的应用价值。方法我们开发了一种快速检测体内药物敏感性的方法——OncoVee?MiniPDX,用于筛选癌症临床治疗方案。本模型将患者来源的肿瘤细胞注入中空纤维胶囊内,皮下植入小鼠体内培养7 d。系统评价了细胞的活性形态和药代动力学。以PDX为对照评估miniPDX的性能(敏感性、特异性、阳性和阴性预测值)。分别采用PDX和miniPDX模型以肿瘤生长抑制率和肿瘤细胞生长抑制率为指标检测药物反应。评价miniPDX模型对临床疗效的预测能力。结果MiniPDX胶囊内肿瘤细胞的形态学和组织病理学特征与PDX模型和原发肿瘤细胞的形态学和组织病理学特征均保持一致。26例(包括14例胃癌、10例肺癌和2例胰腺癌)来自患者的PDX肿瘤移植试验的药物反应与相应的miniPDX试验的药物反应结果具有良好的相关性。MiniPDX阳性预测值为92%,阴性预测值为81%,敏感性为80%,特异性为93%。通过扩大临床肿瘤样本,miniPDX检测显示出广泛的临床应用潜力。结论我们建立了基于胶囊植入技术的miniPDX快速体内检测方法,用于评估PDX肿瘤移植物和临床肿瘤标本的药物反应。PDX模型和其对应的miniPDX药效结果具有良好的相关性,结合转化研究数据最终表明miniPDX模型是一种先进的个体化癌症治疗工具。

患者来源结直肠癌异种移植模型的构建及初步应用

目的构建结直肠癌患者来源的异种移植(PDX)模型,探讨中药"消癥方"对结直肠癌PDX模型的抑瘤作用。方法收集2016年12月至2017年2月5例结直肠癌组织标本构建PDX模型,传代培养。选择1例患者来源的肿瘤构建P3代模型,将10只P3代小鼠随机分为对照组和消癥方组,每组5只。对照组小鼠给予饮用水,消癥方组给予中药汤剂,均自由饮用,持续24天。观察两组小鼠的生存状态,测量体质量、瘤体积和瘤质量,计算抑瘤率。结果 5例结直肠癌组织标本,P1代建模成功4例,P2代建模成功3例。PDX模型基本保留了患者来源肿瘤的组织学特征。10只P3代荷瘤鼠在给药过程中未出现死亡,摄食量正常,饮水(药)量正常,无明显不良反应。实验结束时,消癥方组小鼠肿瘤体积均值略小于对照组,瘤质量略大于对照组,差异均无统计学意义(P>0.05)。消癥方组的抑瘤率为-4.8%。结论结直肠癌PDX模型建模及给药技术基本成熟,但中药消癥方在实验中未显示抑瘤作用。

小鼠移植瘤模型对SPIO增强MRI信号变化原因的初步研究

目的建立小白鼠肝脏原位移植瘤模型,初步探讨临床上影响肝癌超顺磁性氧化铁(SPIO)增强MRI信号变化的因素。资料与方法(1)对25例肝病患者行SPIO增强MRI扫描的临床、影像及病理学相关资料进行分析;(2)给小白鼠注射H22肝癌细胞建立肝脏原位移植瘤模型40只;(3)成瘤后给小鼠进行MRI平扫及SPIO增强扫描;(4)所有的瘤鼠做HE及普鲁士蓝铁染色并进行相关病理学分析。结果(1)25例患者中经病理证实为原发性肝癌2例、海绵状血管瘤1例及肝硬化结节1例,DSA及介入治疗有典型肝癌表现者2例。(2)肝脏移植瘤组在SPIO增强后的T2WI上有10个移植瘤的信号未见下降;普鲁士蓝铁染色3只瘤鼠的瘤灶呈阳性,内见枯否细胞;7个瘤灶与肝组织明显呈浸润生长。结论SPIO能提高肝脏占位性病变定性诊断率,但存在SPIO增强MRI信号变化与病理机制不相符的现象;在少数纯瘤株移植瘤结节内及周边可见枯否细胞,成为影响肝癌的SPIO增强MRI信号变化的重要原因;移植瘤的生长方式成为影响肿瘤的SPIO增强后信号变化的相关因素。

PDX模型在肿瘤研究中的应用现状与展望

在我国,癌症的发病率呈现继续上升的趋势[1]。尽管过去几十年中,抗肿瘤药物的开发取得了爆炸式的发展,但大多数新疗法都不能顺利通过III期临床试验[2]。究其根源,缺乏合适的体内模型是主要障碍。患者来源的异种移植瘤(PDX)模型是指患者肿瘤组织或者细胞植入的免疫缺陷小鼠,被认为和原始肿瘤有很高的相似度,目前广泛应用于各类肿瘤的研究中。

人源非小细胞肺癌异种移植模型的建立和鉴定

目的建立人源非小细胞肺癌(NSCLC)异种移植模型,鉴定移植模型与原代肿瘤组织间组织形态结构、病理结构的一致性。方法取临床肺癌新鲜手术切除组织块26例,12 h内移植于裸小鼠背部皮下组织内,肿瘤长至500mm^3取出再传至下一批裸小鼠背部,如此重复,稳定传代至第4代,分别采用HE染色和免疫组织化学比较原代患者肿瘤组织与移植瘤组织结构和病理结构是否具有一致性。结果成功建立并稳定传至第4代的患者来源的移植瘤(PDX)模型共9例,6例肺鳞癌,3例肺腺癌。PDX模型保留了原代患者肺癌细胞的异型性和原有排列结构。病理学特性有些变化,但没有统计学意义上的差异。结论建立的NSCLCPDX模型保留了原代患者肺癌细胞的异型性、原有排列结构和病理学特性,为临床前药效的个性化筛选评估以及肺癌的研究提供了有效工具。

肝癌患者来源异种移植瘤模型的建立及药物敏感性研究

目的通过建立肝癌患者来源的异种移植瘤模型(PDX)探究肝癌索拉菲尼敏感性相关的长链非编码RNA(lncRNA)。方法选取上海市第一人民医院2021年5月至2022年10月的17例肝癌标本建立PDX模型。PDX模型传代14 d后通过随机数表法分为对照组与索拉菲尼给药组。给药21 d,观察7 d后收取肿瘤组织,给药期间记录小鼠体重。根据公式:肿瘤生长抑制(TGI)指数=ΔT/ΔC,计算PDX肿瘤组织TGI指数并评价药物敏感性,通过lncRNA测序筛选肝内胆管癌(ICC)索拉菲尼敏感与耐药的差异lncRNA。在人ICC细胞系HuCCT1中转染小干扰RNA(siRNA)降低lncRNA SCDAL的表达,根据siRNA序列分组为ctr、si-1、si-2和si-3。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖能力,根据给药浓度分组为0μmol/L(0.1%二甲基亚砜)、4μmol/L、10μmol/L。组间比较采用t检验,多组间两两比较采用单因素方差分析,Turkey事后检验确定组间差异。结果肝细胞肝癌(HCC)及ICC PDX模型鼠索拉非尼给药组与对照组体重差异无统计学意义[HCC:(24.72±2.21)g比(25.80±2.30)g,t=0.486,P>0.05;ICC:(24.87±4.30)g比(23.11±2.78)g,t=0.478,P>0.05];lncRNA SCDAL在PDX耐药样本中表达显著低于敏感组(|log2FoldChange|=Inf,P<0.05);Si-3敲减组lncRNA SCDAL相对表达量显著低于对照组(0.586±0.080比1.000±0.234,P<0.05)。索拉菲尼给药条件下敲减组细胞吸光度值显著高于对照组(4μmol/L:1.11±0.06比0.86±0.07,t=4.635,P<0.01;10μmol/L:0.52±0.03比0.42±0.02,t=4.389,P<0.05)。结论通过构建肝癌患者PDX模型并测序验证发现lncRNA SCDAL表达与ICC索拉菲尼敏感性呈正相关。

BRAF和EGFR抑制剂联合用于BRAF突变型复发转移性结直肠癌PDXs模型的研究

背景与目的:结直肠癌患者中BRAF基因突变的概率为5%~15%,临床预后明显差于无突变者。该研究将BRAF与表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)抑制剂联合用于BRAF V600E突变型复发转移性结直肠癌的患者来源异种移植(patient-derived xenografts,PDXs)模型,观察其安全性、可行性及疗效。方法:2016年1月—2016年12月,复旦大学附属肿瘤医院34例疑似结直肠癌术后复发或转移的患者利用CT引导下的穿刺活检方法获取组织标本,建立复发转移性结直肠癌的PDXs模型,筛选BRAF突变者传代培养至F2代进行药物实验,实验组分为BRAF抑制剂组(A组)、EGFR抑制剂组(B组)、BRAF和EGFR抑制剂联合组(C组)及安慰剂对照组(D组)。给药3周后处死实验动物,统计建模成功率及抑瘤率。结果:34例患者中共23例病理证实为结直肠癌复发或转移,成功建立16个PDX模型,建模成功率为69.6%(16/23)。共筛选出4例BRAF V600E基因突变者,成功建立4个BRAF突变型复发转移性结直肠癌的PDXs模型。实验组无明显药物毒性相关性死亡,实验组抑瘤率分别为21.57%、21.61%和66.81%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CT引导下的穿刺活检建立复发转移性结直肠癌的PDXs模型成功率高,针对EGFR和BRAF的双重打击治疗安全、可行,能够明显提高BRAF突变型结直肠癌的疗效。

新的临床前研究小鼠模型:肿瘤患者来源的移植瘤

在以往研究中,由裸鼠和肿瘤细胞系来源的皮下移植瘤组成的小鼠模型为研究新的癌症治疗策略提供了一个临床前测试系统。但是这种传统模型缺乏肿瘤异质性和自发性远隔转移的能力,很难准确模拟临床患者的真实病情。近年来,研究者开发出一种更好的临床前模型,即在小鼠体内形成肿瘤患者来源的移植瘤(patient-derived xenografts,PDXs)。研究表明,将各种患者来源的肿瘤组织移植到免疫缺陷或转基因小鼠的恰当部位可以更准确地模拟患者的原发肿瘤,尤其是其远隔转移能力。由于PDXs不仅忠实地保留了患者肿瘤的分子表型和基因型变化,而且能够再现原发肿瘤的异质性,因此可被应用于肿瘤耐药机制的研究。本综述总结了建立PDXs模型的方法,检验患者肿瘤和小鼠移植瘤相似性的方法,以及这种模型在新药研发中的优点和局限性。

患者来源的肿瘤异种移植模型在肝细胞癌中应用现状与挑战

肝细胞癌(HCC)是全球第六大常见肿瘤以及第2位的肿瘤致死性病因[1]。虽然近年来治疗手段不断进步,但大多数新疗法不能顺利通过Ⅲ期临床试验,缺乏合适的临床前动物模型是主要的原因。肿瘤药物研发依赖的传统肿瘤细胞系移植瘤模型不能模拟人体肿瘤微环境的功能和肿瘤的异质性[2]。然而,HCC是一种具有高度肿瘤内和肿瘤间异质性疾病,建立高度模拟人体内肿瘤发生发展的临床前动物模型对于HCC研究至关重要。

人源化免疫肺癌小鼠模型的建立及其在程序性死亡受体1抑制剂疗效评估中的作用

目的·建立表达程序性死亡配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)的人源化免疫肺癌动物模型,并研究该模型在评估程序性死亡受体1(programmed death-1,PD-1)抑制剂疗效中的作用。方法·取晚期非小细胞肺癌患者新鲜的活检组织样本,或恶性胸腔积液中的肿瘤细胞,接种至CB17-SCID小鼠(重症联合免疫缺陷小鼠)皮下,建立患者来源异种移植物模型(patient-derived xenograft model,PDX模型),通过免疫组织化学法检测PDX模型肿瘤PD-L1的表达情况。将成熟的人外周血单个核细胞与PDX模型肿瘤细胞混合后接种NCG小鼠(高度免疫缺陷小鼠),建立人源化免疫的肺癌PDX模型,并在该模型上验证PD-1抑制剂的疗效。结果·在16个临床来源样本建立的PDX模型中,有2个PD-L1表达为强阳性,4个表达为阳性,其余均为阴性。在PD-L1强阳性的人源化免疫肺癌PDX模型中,PD-1抑制剂信迪利单抗在初次给药后21 d的肿瘤生长抑制率为82.6%;在PD-L1阴性的人源化免疫肺癌PDX模型中,PD-1抑制剂未显示出抗肿瘤活性。结论·成功建立了表达PD-L1的人源化免疫肺癌小鼠模型,且能在该模型上评估PD-1抑制剂的疗效。

PDX模型在纳米递送系统评价中的应用

恶性肿瘤是影响人类健康的重大疾病,纳米递送系统本身具有独特的尺寸效应,对其功能化修饰后可实现药物分子的肿瘤靶向聚集、提高治疗效果、减小对正常组织和细胞的毒副作用。将源自患者的癌细胞或小肿瘤组织直接移植到免疫缺陷小鼠体内,可建立患者来源的异种移植(patient-derived xenografts,PDX)模型。相比于肿瘤细胞系模型,该模型可保持原发肿瘤的组织形态、异质性及基因异常等关键特征,并使其在各代之间保持稳定。PDX模型被广泛应用于药物评估、靶标发现和生物标志物开发,尤其为纳米递送系统的诊断和治疗评价提供了可靠研究平台。本综述总结了常见癌症PDX模型在纳米递送系统评价中的应用,以期为本领域科研人员开展相关研究提供参考。

肿瘤个体化治疗新时代——PDX模型

近年来,肿瘤的个体化治疗逐渐进入大众视野;而PDX模型实现了为每位肿瘤患者"量体裁衣",开启了肿瘤个体化治疗新时代. PDX的英文全称是"patient-derived xenograft",直译过来就是"患者来源的异种移植物".概括地讲,就是将肿瘤患者的肿瘤组织移植到免疫缺陷的小鼠体内,从而构建出肿瘤人源化的小鼠模型.之所以选用免疫缺陷的小鼠,是因为免疫系统有缺陷才能保证人源肿瘤组织移植获得成功.PDX模型小鼠与患者的肿瘤具有极高的相似性.从某种程度上说,已经化身为肿瘤患者的"替身".从理论上讲,通过对小鼠试药便可以筛选出对患者更为有效的治疗药物或治疗方案.

人肺鳞癌组织在裸鼠体内的移植成瘤性与其Ki-67表达水平的关系

目的 ：构建人肺鳞癌组织的裸鼠移植模型,并探讨组织移植成瘤性与Ki-67表达水平的关系。方法 ：选取安徽省立医院胸外科2013年8月—2014年1月经手术切除获得的21例人肺鳞癌组织,1 h内移植于裸鼠皮下,观察成瘤情况,并回顾性比较移植成瘤组和未成瘤组对应患者的肿瘤特性。采用免疫组织化学法检测移植瘤和患者肿瘤组织中p63、细胞角蛋白5/6（cytokeratin 5/6,CK5/6）、甲状腺转录因子-1（thyoid transcription factor-1,TTF-1）和Ki-67的表达情况,并以组织化学评分（H-score）法进一步对Ki-67表达进行半定量分析。采用扩增阻滞突变系统（amplii cation refractory mutation system,ARMS）-PCR方法检测裸鼠移植瘤和患者肿瘤组织中表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）基因第18-21外显子突变情况。结果 ：21例人肺鳞癌组织行裸鼠体内移植后有12例成瘤。裸鼠体内移植的成瘤性和患者肿瘤分化程度（Z=-2.821,P=0.005）及大小（Z=-2.809,P=0.005）有关。裸鼠移植瘤组织中p63、CK5/6、TTF-1和Ki-67表达情况以及EGFR基因突变情况均与来源患者的肺鳞癌组织相一致。裸鼠体内移植成瘤的相应患者肿瘤组织中Ki-67的H-score分值为2.76±0.54,显著高于未成瘤的患者肿瘤组织评分1.37±0.77,差异有统计学意义（t=4.855,P=0.001）。结论：成功构建了人肺鳞癌组织的裸鼠移植瘤模型,移植成瘤性与肿瘤组织中Ki-67表达水平有关,且移植瘤保留了患者肿瘤的基本生物学特性,提示该裸鼠移植瘤模型可为肺鳞癌的研究提供良好平台。

人源性食管癌异种移植模型的建立及应用进展

食管癌是全球第十大常见癌症,其发病率和病死率较高,主要包括食管鳞状细胞癌(ESCC)和食管腺癌(EAC),通常发展到晚期才被诊断发现。食管癌的标准治疗方法包括放化疗、内窥镜疗法和外科手术,但其预后效果不甚理想。良好的动物模型可用于研究食管癌的发生发展和生物学机制。患者来源的异种移植(PDX)模型最大程度上保留了原始肿瘤的细胞形态、组织结构特征和与患者相似的遗传特征。PDX模型为研究食管癌患者对放化疗的反应性,寻求新的治疗靶点,改善预后效果提供了新的平台,使个性化精准治疗研究迈入新阶段。就食管癌PDX模型的特点、构建时常用的实验动物、优化模型建立的方法以及PDX模型在食管癌研究中的应用进行综述,并讨论了食管癌PDX模型的局限性和未来发展前景,以期为食管癌的个性化精准治疗、改善患者预后提供新的研究方向。

骨肉瘤精准医学的实践与进展

骨肉瘤（OS）是具有高转移潜能的恶性骨肿瘤。随着化疗药物的应用，OS的临床疗效有了大幅度的改善，5年生存率由不足20%提高到70％。然而近三十年来，旨在提高OS化疗有效率的研究工作进展甚微。肺转移、术后复发、化疗耐药仍是0s临床治疗亟待解决的问题。OS之所以缺乏治疗新药物的重要原因之一即OS异常复杂的遗传学背景，至今未明确特定的驱动基因和相关发病机制。近年来，以基因测序为基础的生物医学发展迅速，生物信息分析技术得到进一步完善，患者来源的移植瘤模型的构建与应用，带动了精准医学的快速发展，将有望在提高OS患者的生存率和生活质量上取得突破性进展。本文将从OS驱动基因的探索、精准诊断与监控预后和OS移植瘤模型的精准研究这三个方面阐释OS在精准医学方向的实践与进展。

胶质瘤初发与自然复发后肿瘤干细胞克隆及分子遗传学特征比较

目的比较初发和复发胶质母细胞瘤(GBM)标本、体外培养的原代胶质瘤干细胞及患者原代肿瘤组织来源的肿瘤移植模型(PDX)的分子遗传学特征。方法(1)取同一患者手术切除的初发及复发GBM标本,免疫组化染色检测标本胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、巢蛋白、Ki-67的表达;基因检测分析标本O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)基因甲基化、异柠檬酸脱氢酶(IDH)基因突变及表皮生长因子受体(EGFR)基因扩增情况。(2)体外原代培养初发及复发GBM干细胞,分别命名为SU5-1和SU5-2细胞。采用免疫荧光染色检测细胞巢蛋白、CD133的表达;诱导分化后采用免疫荧光染色检测细胞GFAP的表达,CCK-8实验检测细胞的生长曲线;Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力;CCK-8实验检测细胞对替莫唑胺(TMZ)、卡铂(CBP)、顺铂(DDP)、阿霉素(ADM)的耐药性;Western blotting实验检测细胞程序性死亡受体-配体1(PD-L1)蛋白的表达;流式细胞仪检测细胞PD-L1阳性率的表达;基因检测分析同上。(3)建立裸小鼠原位初发及复发PDX模型,免疫组化染色检测PDX模型巢蛋白、GFAP、Ki-67的表达,基因检测分析同上。结果(1)与初发GBM比较,复发GBM标本Ki-67、巢蛋白阳性细胞数所占比例较高,而GFAP阳性细胞数所占比例较低,差异均有统计学意义(P<0.05);基因检测分析显示初发及复发GBM组织中IDH基因均无突变,初发GBM组织中MGMT基因呈甲基化状态,EGFR基因未扩增,而复发GBM组织中MGMT基因为非甲基化状态,EGFR基因扩增阳性。(2)SU5-1和SU5-2细胞均表达巢蛋白、CD133。诱导分化后均表达GFAP。生长曲线显示SU5-2细胞的增殖启动期早于SU5-1细胞,第3~5天两者持平,第6天起SU5-1细胞的增殖快于SU5-2细胞。SU5-2细胞的侵袭能力高于SU5-1细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。5、10、15 mmol/L CBP、0.3125、1.25、5 mmol/L DDP,0.5、2 mmol/L ADM,125、500 mmol/L TMZ作用的SU5-2细胞的抑制率低于同浓度、同药物作用的SU5-1细胞抑制率,差异均有统计学意义(P<0.05)。SU5-2细胞中PD-L1蛋白的表达高于SU5-1细胞。SU5-2细胞PD-L1阳性率高于SU5-1细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。基因检测分析结果与初发、复发GBM标本一致。(3)与初发PDX模型比较,复发PDX模型中巢蛋白、Ki-67的表达较高,GFAP的表达较低,差异有统计学意义(P<0.05)。基因检测分析结果与初发、复发GBM标本一致。结论初发及术后未放化疗自然复发的GBM分子遗传特征存在一定差异,后者侵袭性、耐药性、抑制抗瘤免疫能力更强;源于手术标本的原代肿瘤干细胞及相应PDX模型可忠实复制患者脑肿瘤的分子遗传特征,为肿瘤转化医学研究、临床药物靶点筛选提供可靠的实验平台。