两种生态型芦苇胚性悬浮培养物对渗透胁迫的生理响应——Ⅱ.抗氧化酶类活性的变化

渗透胁迫处理下,沙丘芦苇和沼泽芦苇培养细胞的H_2O_2含量变化不大,MDA含量随时间延长而降低。抗氧化酶中,沙丘芦苇的SOD、CAT、POS和APx的活力均显著高于沼泽芦苇,显示出比沼泽芦苇更强的ROS清除能力。胁迫初期(0.5h～1d)沙丘芦苇细胞中主要表现出SOD、CAT活力的提高,胁迫2d后4种酶活力均明显被诱导。两种生态型芦苇的PEG适应性培养物APx及SOD酶活力显著提高,POD活性仅沼泽芦苇中升高。提示SOD、CAT主要参与沙丘芦苇在渗透胁迫下的短期响应,而APx与长期响应有关。

西洋参愈伤组织悬浮培养物细胞分化与皂苷合成关系的研究

研究了西洋参愈伤组织悬浮培养物细胞生长曲线 ,观察了细胞形态结构和组织化学变化。结果表明 ,在延滞期愈伤组织细胞无分化 ,皂苷含量低 ;对数生长期细胞刚刚开始分化 ,皂苷开始积累 ;到直线生长期 ,培养物细胞导形成较多 ,皂苷大量积累 ;到静止期 ,皂苷积累达到高峰 ,此时用高效液相色谱法测定培养物 ,皂苷含量为 3.2 0 8% ,Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2 、Rd含量分别为 0 .0 2 %、0 .2 8%、1 .1 6%、0 .1 6%、0 .1 6%和 0 .2 2 % ,说明西洋参皂苷合成与细胞分化呈正相关。

两种生态型芦苇胚性悬浮培养物对渗透胁迫的响应Ⅰ .生长及渗透调节物质的变化

在浓度为20%的PEG-8000介导的渗透胁迫下,沙丘芦苇的胚性悬浮培养物的生长受抑程度小于沼泽芦苇,相对细胞活力也较高,表现出比沼泽芦苇较高的耐渗透胁迫能力。对渗调物质含量的分析显示:两种生态型芦苇细胞中脯氨酸含量均随处理时间逐渐增高。沙丘芦苇的可溶性蛋白含量、蔗糖含量等表现出比沼泽芦苇更为显著的积累。两种生态型芦苇的渗透适应性细胞中均大量积累脯氨酸和糖类。说明有机渗透调节物质的积累对提高芦苇细胞抗渗透胁迫能力有显著贡献。

发根农杆菌A_4菌株转化苜蓿悬浮培养物

将苜蓿无菌苗下胚轴切割后，在附加２ｍｇ／Ｌ２，４Ｄ的ＭＳ培养基上诱导愈伤组织。愈伤组织在附加０５ｍｇ／Ｌ２，４Ｄ的ＳＨ培养基中悬浮培养。悬浮培养物在用于转化之前，用０４５ｍｏｌ／Ｌ甘露醇处理１ｈ，然后用０１６ｍｏｌ／ＬＣａＣｌ２·２Ｈ２Ｏ洗涤两次。预处理后的悬浮培养物用ＳＨ培养基悬浮（１０ｍｌ／ｇ悬浮培养物），再加０２ｍｌ农杆菌悬浮液，于２５±２℃共培养２ｄ。共培养的悬浮培养物洗涤后在附加０５ｍｇ／Ｌ羧苄青霉素的无激素培养基上选择培养。悬浮培养天数、悬浮培养基激素组成和选择培养基种类明显影响转化频率。纸电泳分析表明７０％的转化体可以合成农杆碱和甘露碱。

荔枝胚性悬浮培养物的建立、保持和优化原生质体分离的研究

将松散颗粒状的荔枝胚性愈伤组织转入液体培养基，2～3周后即可建立起优质的悬浮培养物，长时间（＞10代）悬浮培养后，荔枝胚性悬浮培养物的生长势和分化能力下降，但液体培养基（6代）＋固体培养基（1代）交替培养可使其保持稳定良好的状态。材料来源、继代时间、酶液浓度、酶液渗透压和高渗预处理对胚性悬浮培养物的原生质体分离均有明显影响。分离原生质体的合适程序是：取4d龄细胞，经13％的甘露醇预处理1h后，在CPW盐附加10％～11％甘露醇、纤维素酶（CelluaseR－10）0．8％和离析酶（MacereaseR－10）0．4％的混合酶液中分离。在最适条件下，原生质体产量可达107／g．fw以上，活力达90％以上。

人粒细胞-单核巨噬细胞集落刺激因子在转基因西红柿悬浮培养物中的生产和分泌

克隆了编码人粒细胞-单核巨噬细胞集落刺激因子(hGM—CSF)的互补DNA，并通过根瘤农杆菌介导的转化导入西红柿(Lycopersicon esculentum cn.Seokwang)。

评价植物悬浮细胞培养物两项测定指标的建立(简报)

由于在细胞培养研究中缺乏一些可操作性强的且定量化的细胞状态评价指标,人们对植物细胞状态的有些性状的评价只能停留在定性描述水平,如对悬浮细胞培养物褐化程度的评价仅能作出定性判断。这里我们提出了两项悬浮细胞培养物细胞状态评价指标。

人参悬浮细胞低温保存的研究

在人参悬浮细胞培养物的低温保存中,逐级冷冻比直接冷冻的细胞存活率高。使用混合保护剂比单独使用保护剂的效果更佳。低温保存的时间影响细胞存活率,但随时间的延长而趋于稳定。经低温保存的人参悬浮细胞,快速解冻比室温解冻的植板率高,混合冰冻保护剂处理比单一冰冻保护剂处理的植板率高。

微弹轰击介导转化

渗透压处理促进基因枪介导转化 瑞典农业科学院D.Clapham及其同事研究发现,在微弹轰击前后用渗透处理挪威云杉胚性细胞悬浮培养物可使轰击转移及报道基因表达提高3～20倍。0.25M肌醇或蔗糖对轰击一天后表达率的促进效应比甘露醇+山梨醇约高2倍。脱落酸提高肌醇的效应。轰击10天后测定发现,细胞保存在含有肌醇的培养基上可使基因表达率提高5～12倍,且对生长及其形态学无副作用。

芒果体细胞胚发生的优化

研究了培养基成分及其性质对芒果珠心胚发生培养物的生长及体细胞胚发生的影响,以及混合有机附加物、基本培养基配方、固化剂、液体与固体培养基的作用。胚发生培养物在悬浮液中比在固体培养基上生长得好,可是,只有移种到固体培养基上,形态正常体细胞胚发生频率方较高。在这方面,用Gelrite作固化剂比用Difco Bacto琼脂好。改良B—5基本培养基比MS或WPM培养基更适于维持培养物和产生形态上正常的体细胞胚。5％—6％的蔗糖最适于体细胞胚的发生,而且可提高分化正常的早期心形体细胞胚的回收频率。椰子水(20％、v/v)使体细胞胚发生增加18％。与无附加物的培养基相比,其它有机附加物无论是单独使用,还是与椰子水混合使用,结果不是无效(水解酪蛋白),就是呈抑制作用(酵母提取液)。