橡胶树热垦525胚性悬浮细胞系的建立及其胚性能力的维持

易碎胚性愈伤组织和胚性悬浮细胞系都是基因工程和细胞工程的理想受体材料。然而橡胶树(Hevea brasil-iensis)易碎胚性愈伤组织诱导频率低、耗时长,且其胚性能力通常随继代次数的增加而下降甚至完全丧失,限制了相关研究的持续开展。因此,快速获得易碎胚性愈伤组织,建立具有高效体胚发生能力的胚性悬浮细胞系,并尽可能较长时间维持其胚性能力是当前橡胶树基因工程和细胞工程研究的重要内容。本研究以橡胶树热垦525未成熟花药为外植体进行愈伤组织的诱导和胚性悬浮细胞系的建立,分析比较固液2种长期继代方式对维持其胚性能力的影响。结果表明:花药外植体在愈伤诱导培养基中获得的黄色致密初代愈伤组织体胚发生能力低,分散性差,不适合进行悬浮培养。将初代愈伤组织转移至胚性愈伤组织诱导培养基中培养70~80 d后,可观察到有胚性结构的形成和早期体细胞胚发生,同时周围长出鲜黄色小颗粒状易碎胚性愈伤组织。通过常规方法建立的Ⅰ型胚性悬浮细胞系具备胚性细胞的典型特征,体胚发生能力显著高于胚性愈伤组织,但在体胚发生过程中容易重新愈伤化;而通过筛选特定形态的胚性愈伤组织低密度启动悬浮培养建立的Ⅱ型胚性悬浮细胞系,在显微镜下可观察到细胞处在有序的胚性结构中,其体胚发生频率可达100%。在含2 mg/L2,4-D的液体培养中持续继代2 a后细胞明显老化且增殖缓慢,体胚发生能力几近丧失;而在去除2,4-D并添加低浓度脱落酸(0.1 mg/L)和水解酪蛋白(0.5 g/L)的固体培养基上持续继代2 a后,体胚发生能力仍能维持在较高水平。所建立的Ⅱ型胚性悬浮细胞系可为橡胶树遗传转化及原生质体培养等相关研究长期提供优质充足且状态相对稳定的材料来源。

水稻胚性悬浮细胞系建立过程中的生理生化变化

本文详细分析了水稻广亲和中粳品系02428胚性悬浮细胞系建立过程中的培养液渗透值、pH值,呼吸作用,过氧化物酶同工酶,碳、氢及矿质元素的变化。结果如下:1、前期、中期和后期悬浮细胞系（即胚性悬浮细胞系）的培养液渗透值在一次继代培养的0—3天期间剧升,并继续上升至第5天达峰值,尔后有所回降;培养液pH值的变化正好相反。2、中期和后期悬浮细胞比前期悬浮细胞更多地利用氨基酸作为代谢底物。后期悬浮细胞的EMP途径相对稍低,而HMP、TCAC途径较前期、中期稍强。3、从前期→中期→后期,过氧化物酶同工酶阴极区带显著变窄、减弱。后期的阳极区过氧化物酶同工酶也较前期为弱。4、后期悬浮细胞和前、中期悬浮细胞相比较,氮、镁的含量较高,而钙、铁的含量较低。上述生理生化变化与悬浮细胞能否适合于进行原生质体培养有一定的相关性。

水稻、玉米胚性悬浮细胞系的有效建立

研究了水稻、玉米胚性悬浮细胞系有效建立的几个关键性技术问题。指出外植体是影响初代愈伤组织状态的因素之一，提出了愈伤组织继代改造的一些措施、影响胚性悬浮细胞系建立的几个因素和判别某材料能否建成胚性悬浮细胞系的参考标准。

黑麦胚性悬浮细胞系的建立和植株再生

禾谷类作物胚性细胞悬浮系的相继建立,为获取大量原生质体、进行体细胞杂交和将外源DNA直接导入可再生细胞（贾敬芬,1990）奠定了坚实基础。黑麦是重要的禾谷类作物之一,具有耐酸、耐瘠、耐旱、耐寒等许多优良特性（李杨汉,1979）。为利用细胞工程技术对黑麦进行改良和将其优良性状转移到其它禾谷类作物中,建立可高频再生的黑麦胚性细胞悬浮系十分必要。本文报道了黑麦胚性悬浮细胞系建立和植株再生的实验结果。

大麦花药培养及其胚性悬浮细胞系的高频快速建立

研究了 (1)在低温预处理过程中 ,不同相对湿度对大麦花药出愈率的影响 ;(2 )低温处理愈伤组织对植株分化的影响 ;(3)高频快速建立大麦胚性悬浮细胞系 .结果表明 ,低温预处理的较大相对湿度能明显促进花药的出愈率 ;低温处理愈伤组织能提高绿苗率 ;以 7周龄的花药胚性愈伤组织为起始材料高频快速建立了均质、分散性好的胚性悬浮细胞系 ,建立频率约为 2 5 %～ 5 0 % ;已 8～ 9周龄的花药胚性愈伤组织作为起始材料 。

郑麦9023胚性悬浮细胞系的建立和植株再生

为建立高效稳定的小麦遗传转化体系,以小麦郑麦9023的幼胚为外植体诱导愈伤组织,研究了培养基中不同质量浓度2,4-D、KT对愈伤组织诱导和愈伤组织继代培养的影响,进而完成整个植株再生的进程。结果表明:以小麦郑麦9023的幼胚作为外植体来诱导愈伤组织,诱导效果最好的培养基是含有3.0 mg/L 2,4-D的MS培养基,出愈率最高达92.5%;愈伤组织进行继代培养的最佳培养基是含有1.0 mg/L 2,4-D和0.1 mg/L KT的MS培养基;最佳的悬浮培养基是含有1.0 mg/L 2,4-D和0.1 mg/L KT的MS培养基;最佳的悬浮系继代时间为16 d;悬浮系中的成熟胚在基本培养基上可以发育成正常的植株。所建立的悬浮系可以用来进行小麦基因工程遗传改良和体细胞无性系突变体的筛选。

通过花药直接液体培养建立大麦胚性悬浮细胞系

通过花药直接液体培养建立大麦胚性悬浮细胞系郑泳，王君晖，黄纯农（杭州大学生命科学学院杭州３１００２８）体细胞胚胎发生是禾本科作物离体培养的组织和细胞进行植株再生的主要方式，胚性悬浮细胞系由于其细胞大小和生理状态比较一致，因而成为研究禾本科植物细胞分化...

香蕉胚性悬浮细胞系建立过程中非胚性成分的去除

[目的]研究香蕉胚性悬浮细胞系建立过程中非胚性成分的去除方法.[方法]以巴西蕉的花蕾进行诱导培养后,运用孔径在250～ 500 μm的不锈铜筛网进行过滤,并用倒置显微镜对培养物进行实时观测.[结果]运用孔径在250～500 μm的不锈钢筛网能够有效去除悬浮细胞系中的褐化坏死组织和分生组织小球,但如果在悬浮细胞系诱导后3d立即进行去除,则易使之后胚性细胞的增殖变得困难;如果在悬浮细胞系诱导后14 d左右去除,则褐化坏死组织释放的酚类物质很容易损伤并杀死正在增殖的胚性细胞.悬浮细胞系诱发后7d是一个比较恰当的过滤去除时间点.[结论]在培养的过程中,将悬浮细胞系定期放置在倒置显微镜下进行观察,用移液器能将液泡化的细胞和胚去除.在操作前,需将倒置显微镜放置在超净工作台内,用紫外线长时间照射进行表面灭菌.这样即可以将悬浮细胞系中的非胚性成分过滤去除,又能预防感染.

曲阜香稻胚性愈伤组织培养及悬浮细胞系的建立

水稻 (OryzasativaL .)曲阜香系 10 3成熟胚在MS1培养基上诱导培养 ,初始愈伤组织为深黄色、瘤状 ,非松脆类型 .当在MS2 培养基上继代培养 ,经 3～ 4月初始愈伤组织转变为浅黄色、小颗粒状 ,松脆型胚性愈伤组织 .将胚性愈伤组织置于液体培养基中悬浮培养 ,经 4月多可得分散性好、生长快的胚性悬浮细胞系 .

粉纹夜蛾细胞系QB-Tn9-4s的克隆以及克隆株生物学特性的研究

对粉纹夜蛾Trichoplusiani细胞系QB-Tn9-4s进行细胞克隆,获得了8个细胞克隆株,分别命名为QB-Tn-A、B、C、D、E、F、G和H。对基因组DNA进行RAPD-PCR鉴定,各细胞克隆株与原始细胞系具有相同的DNA扩增谱带。各细胞克隆株在形态和生物学特性方面表现出一定的差异。克隆株QB-Tn-A、B、C、D和E以梭形细胞为主,大约占细胞总数的60%～80%;F、G和H以棒状细胞为主,比例分别为44.5%、49.5%和80.0%。8个克隆株对苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)均较敏感,感染率均在92%以上,平均每个细胞病毒多角体(OBs)产量在78～110个之间,其中克隆株QB-Tn-A多角体产量最高达110个,略高于BTI-Tn5B1-4和QB-Tn9-4s,明显高于Sf-9细胞;克隆株QB-Tn-E、H、A和C的出芽性病毒(BV)产量与原始细胞系(3.37×107TCID50/mL)接近,而其它4株均低于原始细胞系。

杂交粳稻3优18胚性悬浮细胞系的建立

杂交粳稻3优18是天津水稻研究所选育的强优粳型杂交新组合,其成熟胚在MS1培养基上诱导形成的初始愈伤组织呈深黄色、瘤状,为非松脆型.初始愈伤组织MS2培养基上经3～4个月继代培养,转变为浅黄色、小颗粒状、松脆型胚性愈伤组织.将胚性愈伤组织置于悬浮培养基中培养,经4个多月可得分散性好、生长快的胚性悬浮细胞系.

香蕉胚性悬浮细胞分化能力及染色体数目变异研究

以野生阿宽蕉(Musa itinerans Cheesman,AA)、抗枯1号(Kangku 1,AAA)、大蕉(Musa ParadidiacaL.,ABB)3个香蕉品种为试材,研究其胚性悬浮细胞在长期继代培养后的分化能力和染色体数目的变异。结果表明,3个香蕉品种ECS在继代培养过程中,胚性悬浮细胞染色体数目均不稳定,染色体数目从6个到116个不等,各ECS均为整倍体和非整倍体组成的混倍体,随继代次数的增加,染色体数目变异的细胞比例随之增多,体细胞胚胎分化能力逐渐下降。野生阿宽蕉、抗枯1号和大蕉的ECS继代培养1.5 a后,细胞变异率分别为96.3%、93.0%和94.0%,而体胚分化能力分别为0.96×103、0.55×103、0.65×103个/mL PCV。试验为进一步研究香蕉ECS染色体变异机理提供新的线索。

小麦胚性悬浮系与原生质体植株再生

普通小麦(Triticum aestivum)昌乐5号(冬性)胚性悬浮细胞系的组成成分对原生质体再生频率发生影响。此种悬浮系是由混合型愈伤组织建立起来的,建成的悬浮系中含有2—3mm的小愈伤组织和分散好的几十至上百个细胞的细胞团。分别用悬浮系中的小愈伤组织和细胞团分离原生质体进行培养。结果表明,由小愈伤组织来源的原生质体再生植株的频率显著高于由细胞团分离的原生质体的再生频率。培养基中不同成分对原生质体分裂的影响也作了研究。

植物细胞悬浮培养影响因子研究

植物细胞悬浮培养已广泛应用于育种和生产次生代谢产物,在生物工程中发挥着重要作用。本文综述了愈伤组织继代改良的措施,影响胚性悬浮细胞系建立的几个因素,存在问题及前景展望。

提高香蕉胚性愈伤诱导成功率的可能途径

香蕉是我国重要的热带亚热带农作物。由于绝大多数食用香蕉是三倍体,不能通过授粉进行遗传改良,转基因技术就变得尤为重要。建立胚性悬浮细胞系是进行香蕉遗传转化的第1步。但是,建立香蕉胚性悬浮细胞系的成功率极低,直到现在多数实验室还不能自己建立香蕉胚性悬浮细胞系。然而,为什么香蕉胚性悬浮细胞系如此难以建立,在香蕉体细胞向胚性细胞转化的过程中,发生了哪些关键事件,如何提高香蕉胚性愈伤诱导的成功率,关于这些问题,目前还未见到报道。文中对近年来香蕉胚性悬浮细胞系建立方面的工作进行综述,针对香蕉胚性悬浮细胞系建立过程中发生的关键事件进行阐述,对香蕉胚性悬浮细胞系建立困难的原因进行讨论,并提出了若干提高香蕉胚性愈伤诱导成功率的可能途径。

水稻原生质体培养及其进展

生物科学发展到今天,已进入了以生物工程为主体的一个崭新时代。细胞工程则是其中最为重要最为活跃的领域。目前细胞工程可分为:组织培养、原生质体培养、细胞融合及细胞器工程等。

Studies on Parameters Affecting Embryogenesis of Protoplasts Isolated from Suspension of Embryogenic Cells in Loblolly Pine

Protoplasts of embryogenic suspension cells of loblolly pine (Pinus taeda L).were isolated at exponential growth stage.Influences of various concentrations of basal medium,levels of BA,and concentrations of inositol on the differentiation of embryonal suspensor mass (ESM),early stage somatic embryos (ESE) ,and lae stage somatic embryos (LSE) were investigated .A study of the effect of various concentrations of LP basal medium sowed that the optimal basal medium concentration of ESM,ESE,and LSE differentiation was 1.25 LP medium.The effects of various levels of BA and inositol showed that the optimal concentrations of BA for the formation of ESM,ESE and LSE were 4 mg/L ,2mg/L and 1mg/L,respectively ,and the optimal concentrations of inositol for the ESM ,ESE and LSM formation were 400mg/L,800mg/L and 1,200mg/L,respectively.

甘薯遗传转化研究现状和问题

甘薯是世界上重要的粮食、饲料和工业原料作物，由于遗传改良进展缓慢，转基因技术逐渐成为研究的热点，并应用于常规育种。到目前为止，甘薯已利用叶片、叶柄、茎、原生质体、愈伤组织、新鲜块根、胚性愈伤组织和胚性悬浮细胞系作为遗传转化受体材料。以前大多以叶片、叶柄为主，而目前利用胚性愈伤组织和胚性悬浮细胞系作为转化受体的研究越来越多。

甘薯遗传转化研究现状、问题及展望

甘薯是世界上重要的粮食、饲料和工业原料作物，由于遗传改良进展缓慢，转基因技术逐渐成为研究的热点，并应用于常规育种中。到目前为止，甘薯已利用叶片、叶柄、茎、原生质体、愈伤组织、新鲜块根、胚性愈伤组织和胚性悬浮细胞系作为遗传转化受体材料，其中早期以叶片、叶柄为主，目前利用胚性愈伤组织和胚性悬浮细胞系作为转化受体的研究越来越多。用于甘薯遗传转化的方法有农杆菌介导法、电击法和基因枪法，其中以根癌农杆菌介导法为主。

不同外植体对橡胶树原生质体分离和再生的影响

为了探寻橡胶树原生质体培养再生植株的较佳途径,本研究以橡胶树热研7-33-97花药和内珠被为起始外植体分别诱导愈伤组织,进行悬浮培养建立稳定的胚性悬浮细胞系,并分别对其进行原生质体的分离和培养研究,分析比较不同起始外植体来源原生质体的产量、活力及其在看护培养过程中的分裂生长、体胚发生及植株再生情况。结果显示,在含1.5%纤维素酶、0.15%果胶酶和0.5%离析酶的酶液中酶解处理12 h后,花药和内珠被来源的悬浮细胞原生质体产量分别为7.6×106个/m L PCV和12×106个/m L PCV,平均活力分别为75.2%和83.9%;在看护培养基上这两种来源的原生质体均能发生持续分裂,45 d后从5×105个原生质体形成2 mm以上的小愈伤组织数分别为247个和480个;经体胚诱导培养60 d后获得的体胚数分别为56个和18个,最终花药来源原生质体发育的体胚约有4.7%转化成完整植株,而内珠被来源的原生质体没能得到正常的植株。研究结果表明,经花药培养建立的胚性悬浮细胞系是获得具有植株再生能力原生质体的最佳材料,可为进一步优化橡胶树原生质体培养体系及进行橡胶树品种间体细胞杂交提供依据和参考。