辐射与悬浮球培养联合纯化乳腺癌干细胞

目的:利用悬浮球培养联合不同辐射模式,高度纯化人乳腺癌MCF-7细胞中辐射抵抗的CD44+/CD24-/low乳腺癌干细胞。方法:利用含细胞因子的无血清培养体系培养MCF-7细胞,将培养形成的球囊细胞连续传代,选择第2代球囊细胞分别行2Gy×4次及单次8Gy照射。利用滤网收集存活细胞生成的微球囊,流式细胞仪检测纯化后微球囊中CD44+/CD24-/low细胞的含量,克隆形成检测及单击多靶模型曲线拟合分析纯化后微球囊细胞的辐射敏感性。结果:单纯悬浮球培养与联合X线照射组之间CD44+/CD24-/low细胞的含量差异存在显著性(P﹤0.05),联合组高度纯化CD44+/CD24-/low细胞;多次分割及单次大剂量照射对CD44+/CD24-/low细胞的富集作用差异无显著性(P=0.303)。纯化细胞照射后存活分数显著高于贴壁MCF-7细胞。结论:辐射联合悬浮球培养进一步纯化辐射抵抗的CD44+/CD24-/low乳腺癌干细胞的方法是可行的。

悬浮球培养法制备ABCG2阳性表达胃癌细胞株

目的:探讨悬浮球培养法制备具有干细胞特性(ABCG2阳性表达)胃癌细胞株MKN45的可行性。方法:采用悬浮球培养法在含成纤维细胞生长因子(bFGF)及表皮生长因子(EGF)的无血清培养基中培养人胃癌细胞株MKN45,观察细胞球体的形成过程,并检测球体细胞及原代贴壁细胞中干细胞标志物ABCG2的表达水平。结果:在无血清培养基培养条件下,胃癌细胞MKN45能形成悬浮球体;球体细胞ABCG2表达水平高于原代贴壁细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:悬浮球培养法可制备具有肿瘤干细胞特性的ABCG2阳性表达胃癌细胞株,为后续研究奠定了基础。

兔垂体干细胞的培养鉴定及分化

背景:脑垂体是人体重要的内分泌器官。多种疾病可引起脑垂体损伤,如脑垂体瘤、垂体功能减退症等。垂体干细胞因具有自我更新和多向分化潜力的特性,有望成为一种新的治疗方式修复受损的垂体。目的:采用悬浮细胞球培养法分离培养垂体干细胞,鉴定其增殖及分化能力。方法:采用悬浮细胞球培养法从新生新西兰白兔垂体中分离培养垂体干细胞,观察其形态特征;免疫荧光细胞染色检测垂体干细胞标志蛋白SOX2及Nestin的表达;采用EdU标记法检测垂体干细胞增殖能力;经贴壁及诱导分化后,通过ELISA法检测培养基中的激素水平。结果与结论:通过悬浮细胞球培养法可成功分离得到垂体干细胞球,且具有较强的增殖能力;干细胞特异性标记物SOX2和Nestin阳性表达;经诱导分化后培养基中促肾上腺皮质激素、促甲状腺激素、促生长激素、促黄体生成激素、促卵泡素、催乳素水平显著升高(P<0.001),具有较强的分化能力。

乳腺癌干细胞的培养及鉴定

目的从乳腺癌患者的肿瘤组织中获得乳腺癌干细胞,并确定其生物学特性。方法收集乳腺癌患者的肿瘤组织,利用乳腺球悬浮培养法获得乳腺球细胞。用流式细胞仪检测细胞CD44以及CD24的表达,用Western印迹法检测细胞ALDH1,ESA以及Oct4的表达。将2×104、2×105和2×106三种细胞数的原代乳腺球囊细胞及贴壁细胞分别接种到NOD/SCID鼠的脂肪垫,观察其成瘤能力和肝肺转移情况。结果利用乳腺球悬浮培养的原代乳腺癌细胞中有62.36%呈CD44+/CD24-/low表型,且肿瘤干细胞标记物ALDH1,ESA以及Oct4的表达高于贴壁培养的原代乳腺癌细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。与贴壁细胞相比,悬浮培养富集的原代球囊细胞均有更强的成瘤和肝肺转移能力。结论利用乳腺球悬浮培养法可以从人乳腺癌组织中获得乳腺癌干细胞。