短期低频脉冲磁场诱导经典瞬时感受器电位通道1对肱二头肌最大自主收缩力与力量耐力的影响

背景:力量素质是人类进行身体活动的必备要素,短暂的低频脉冲磁场刺激可诱导和激活经典瞬时感受器电位通道1(classical transient receptor potential channel 1,TRPC1),并引发小鼠骨骼肌生长与重塑,从而对肌组织产生一系列生理支持效应,该机制是否会引发人体骨骼肌生理结构与工作能力的变化,并作为一种全新的人体肌力提升手段尚无研究。目的:选用可激活TRPC 1的特定低频脉冲磁场作为外源性刺激,以观察并验证短期刺激对人体肱二头肌最大自主收缩力与力量耐力的影响。方法:选择普通成年健康受试者27例,随机分为训练组、照射组、训练+照射组,每组9例。训练组采用抗阻训练,训练+照射组每次接受10 min低频脉冲磁场刺激(强度1.5 mT,频率3300 Hz)后即刻进行抗阻训练,照射组只进行10 min低频脉冲磁场刺激,试验周期9 d,间隔48 h进行1次训练或照射,为了观察低频脉冲磁场与抗阻训练结合是否会产生增益效果,训练组与训练+照射组在5次训练前后采集最大自主收缩力的肌电信息,照射组只在第1,3,5次进行最大自主收缩力测试,跟踪肌力变化情况。试验后观察3组受试最大自主收缩力值、1次重复最大力量、耐力持续时间、中值频率的变化。结果与结论:①在试验过程中,所有被试的最大自主收缩力值变化与时间交互效应显著(P<0.01),随时间的推进均出现显著变化,各组内最大自主收缩力值变化与时间交互显著(P<0.05),组间无交互效应;②各组被试后测最大自主收缩力值、1次重复最大力量、耐力持续时间、中值频率相比前测均显著提升,其中训练组各指标提升率依次为19%,23%,28%,18%,训练+照射组提升率依次为11%,10%,53%,18%,照射组各指标提升率依次为28%,18%,27%,6%;③训练+照射组的中值频率显著高于照射组(P<0.05),与训练组无显著性差异;④通过对训练组与训练+照射组每次训练前后的最大自主收缩力肌电均方根振幅平均值对比发现,训练组前2次训练后最大自主收缩力肌电均方根振幅平均值显著下降(P<0.05)。⑤结果证实:在强度1.5 mT,频率3300 Hz的脉冲磁场短期刺激方案下,人体肱二头肌最大自主收缩力值和力量耐力显著提升,低频脉冲磁场诱导TRPC1促进肌组织工作能力提升这一机制在人体上得到有效验证;在最大力量提升效果上,低频脉冲磁场刺激与该试验进行传统抗阻训练的两组最终力量水平一致;抗阻训练结合脉冲磁场刺激在训练过程中可体现出更好的抗疲劳能力,以及保持肌力稳定增长的功效,这种结合在训练初期可在相同负荷下使局部肌群更多的运动单位获得训练刺激,提升整体训练效率;在力量耐力提升效果上,低频脉冲磁场刺激可使肌肉等长收缩时间延长,抗疲劳能力提升,低频脉冲磁场刺激结合抗阻训练相比单纯进行低频脉冲磁场刺激可带来更加有效的力量耐力增益效果。

短期低频脉冲磁场诱导经典瞬时感受器电位通道1对局部肌肉肌力提升后的保持与衰减变化轨迹

背景:短暂的低频脉冲磁场刺激可诱导和激活经典瞬时感受器电位通道1,并可提升人体局部肌肉(如肱二头肌)的最大自主收缩力与力量耐力。目的:通过可激活经典瞬时感受器电位通道1的特定低频脉冲磁场作为肌力提升手段,并观察短期刺激对人体肱二头肌最大自主收缩力与力量耐力提升后的变化衰减过程。方法:选取普通成年健康受试者27例,随机等分为训练组、照射组、训练+照射组。训练+照射组每次接受10 min低频脉冲磁场刺激后即刻进行抗阻训练,照射组只进行10 min低频脉冲磁场刺激,训练组采用抗阻训练,试验时间为8周,在正式试验的第1-12天进行短期肌力提升方案及力量水平后测,随后6周观察各组最大自主收缩力与力量耐力的衰减变化过程。结果与结论:(1)所有被试者随着试验时间的不断推进,最大自主收缩力值变化显著(P <0.01),时间交互效应明显,组间无交互效应,时间与分组交互效应不显著。(2)与初测值相比,照射组肌力衰减最大自主收缩力跟踪的第1,2,3,4周均显著高于初测值;训练组肌力衰减最大自主收缩力跟踪的第1,4周均显著高于初测值;与后测值相比,照射组最大自主收缩力值肌力衰减跟踪的第5,6周显著低于后测值;训练组最大自主收缩力肌力衰减跟踪的第5,6周显著低于后测值;训练+照射组肌力衰减最大自主收缩力跟踪的第1,5,6周显著低于后测值。(3)通过对3组最大自主收缩力变化曲线进行相关性分析可以看出,照射组整体最大自主收缩力肌力变化与训练组及训练+照射组最大自主收缩力变化趋势高度正相关,变化趋势高度一致。与照射组相比,训练组与训练+照射组最大自主收缩力具有更强的正相关性。(4)各组被试随着时间的推进,中值频率值均发生显著性变化(P <0.01),时间交互效应明显,时间点和分组交互作用对中值频率值变化具有显著性影响(P <0.05)。(5)与初测值相比,照射组肌力衰减中值频率值跟踪的第2周显著高于初测值;训练+照射组所有肌力衰减中值频率值跟踪的第2周显著高于初测值;与后测值相比,照射组肌力衰减中值频率值跟踪均与后测无显著性差异;训练组肌力衰减中值频率值跟踪的第1,4周显著低于后测值;训练+照射组肌力衰减中值频率值跟踪的第1,2周显著低于后测值。(6)3组受试者力量耐力中值频率值变化曲线进行相关性分析可以看出,照射组与训练组和训练+照射组之间具备较低的正相关性,与训练组相比,训练+照射组与照射组之间的相关程度略高。(7)结果显示,在强度1.5 mT、频率3 300 Hz的脉冲磁场短期刺激方案使肌力增强后,最大自主收缩力衰减到初测值的周期为6周,与该试验抗阻训练的衰减周期及提升后的衰减速度一致,在衰减过程中相比进行抗阻训练的2组变化波动较小,无疲劳累积的影响,肌力保持水平较佳。力量耐力提升后至少可保持6周。相比抗阻训练的力量耐力变化,低频脉冲磁场刺激可免于疲劳累积的影响,抗疲劳能力持续增长与保持水平较好,抗阻训练结合脉冲磁场可观察到对耐力水平带来一定影响与增益效果,减少衰减过程的波动,利于耐力水平的保持。

瞬时感受器电位离子通道V亚家族成员4基因敲除对小鼠血脂和脂肪组织的影响

目的探讨瞬时感受器电位离子通道V亚家族成员4(TRPV4)基因敲除对小鼠血脂水平以及脂肪组织的影响。方法观察野生型C57BL/6J小鼠和TRPV4基因敲除(TRPV4^(-/-))小鼠在高脂饮食饲养后体质量、脂肪质量、血脂水平变化以及肩胛间棕色脂肪组织(iBAT)、腹股沟白色脂肪组织(iWAT)及附睾白色脂肪组织(eWAT)的激活情况;利用3T3-L1脂肪细胞观察TRPV4激动剂对脂肪棕色化基因PR结构域蛋白16(PRDM16)表达的影响。结果在高脂饮食喂养16周后,TRPV4^(-/-)小鼠的血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)均较野生型小鼠升高,差异有统计学意义(P<0.05);体质量和脂肪组织质量均较野生型小鼠减轻,但差异无统计学意义(P>0.05),TRPV4^(-/-)小鼠脂肪组织呈棕色化趋势较野生型小鼠明显;加入TRPV4激动剂后,3T3-L1脂肪细胞PRDM16基因和蛋白表达水平上调(P<0.05)。结论TRPV4基因敲除能够升高血脂水平并促进脂肪组织棕色化。

瞬时感受器电位香草素受体亚家族Ⅳ型抑制剂HC067047对脂多糖诱导的小鼠焦虑样行为的影响

目的探讨瞬时感受器电位香草素受体亚家族Ⅳ型(TRPV4)抑制剂HC067047对脂多糖(LPS)模型小鼠焦虑样行为的影响。方法48只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组(NS)、模型组(LPS)和药物干预组(HC+LPS)。腹腔注射0.83 mg/kg LPS建立焦虑样小鼠模型,HC+LPS组于LPS注射前30 min腹腔注射HC067047(10 mg/kg),NS组及LPS组注射等体积溶媒;旷场实验以及社会交往实验观察小鼠焦虑样行为;免疫组织化学及Western blotting检测海马TRPV4、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、神经型一氧化氮合酶(nNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达情况。结果免疫组织化学和Western blotting实验发现,与NS组相比,LPS组小鼠海马中TRPV4表达显著上调(P<0.0001);旷场实验中,与NS组比较,发现LPS组小鼠活动的总距离(P<0.0001)、在中央区域活动的距离(P<0.01)以及在中央区域活动的时间均明显减少(P<0.01),HC067047干预可增加LPS模型小鼠的活动总距离(P<0.05)、在中央区域活动的距离(P<0.001)以及在中央区域的活动时间(P<0.01);社会交往实验中,与NS组相比,LPS组小鼠与陌生小鼠的交往时间显著降低(P<0.01),HC067047干预后能显著增加LPS模型小鼠与陌生小鼠的交往时间(P<0.01);Western blotting检测发现,LPS组小鼠海马中iNOS(P<0.05)、nNOS(P<0.001)和eNOS(P<0.001)的表达显著高于NS组,但HC067047干预后可使LPS模型小鼠海马中iNOS(P<0.05)、nNOS(P<0.01)、eNOS(P<0.01)的表达明显降低。结论抑制TRPV4的表达能够改善LPS所致小鼠焦虑样行为,该过程可能与抗氧化应激有关。

瞬时感受器电位通道与老年慢性不明原因瘙痒症的研究进展

术语不明原因慢性瘙痒症(Chronic Pruritus of Unknown Origin,CPUO)指一些病因目前不明的瘙痒。包含之前命名不规范即不明原因全身瘙痒、“Willan′s痒”或“老年瘙痒症”的情况,是一种排他性诊断,治疗困难。瞬时感受器电位(Transient receptor potential,TRP)通道是一类非选择性阳离子通道超家族,目前27个不同的TRP通道中TRPA1,TRPV1,TRPV3,TRPV4,TRPM8和TRPC4与慢性瘙痒有关,因此,关注瞬时感受器电位(TRP)通道与慢性不明原因瘙痒可能使这些通道成为许多拮抗性局部药物的靶点,可能有助于患者更好地应对CPUO。

经典瞬时感受器电位通道对内皮细胞和平滑肌细胞增殖所引起的阻塞性病变的影响

目的:探讨经典瞬时感受器电位通道(TRPC)对内皮细胞和平滑肌细胞增殖所引起的阻塞性病变的影响。方法:选取人体尸检标本的颈动脉中明显有动脉粥样硬化的组织进行处理后经染色检测其TRPC6蛋白表达情况。取小鼠饲养高脂饲料12周后建模对比常规喂养组的TRPC6斑块表达情况。基因敲除后,动脉动脉粥样硬化斑块中的平滑肌细胞及胶原纤维含量情况、血管壁增厚及血流阻力情况。结果:TRPC6在人体动脉粥样硬化斑块中的表达显著更高,经免疫组织化学(IHC)染色其平均光密度显著更高。小鼠模型组(0.004±0.010)高于对照组(0.063±0.012),差异有统计学意义(P<0.05)。基因敲除后,模型小鼠的动脉粥样硬化斑块中的巨噬细胞含量(16.55±1.12)显著少于之前的(28.21±2.23),差异有统计学意义(P<0.05);平滑肌细胞(27.26±2.51)显著高于之前的(20.92±1.61),差异有统计学意义(P<0.05);而胶原纤维差异不明显。基因敲除后,能明显改善小鼠的血管壁增厚及血流阻力情况。结论:TRPC6在动脉粥样硬化斑块中的表达显著调高,提示其参与了动脉粥样硬化斑块的发生及发展过程。

不同温度艾灸对高脂血症大鼠血脂及背根神经节瞬时感受器电位香草酸受体1 mRNA表达的影响

目的观察不同温度艾灸热刺激对高脂血症大鼠血脂及背根神经节瞬时感受器电位香草酸受体1(TRPV1)m RNA表达的影响,验证艾灸调脂疗效与激活TRPV1相关。方法采用高脂饲料喂养制作高脂血症大鼠模型。将60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、38℃艾灸组和45℃艾灸组,每组15只。38℃艾灸组和45℃艾灸组均取"神阙"和双侧"足三里",每穴艾灸10 min/次,隔日1次,连续4周。干预结束后取血,氧化酶法检测血清胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇含量;取背根神经节组织,实时荧光定量PCR检测TRPV1 m RNA表达。结果与模型组比较,艾灸组血脂指标均得到不同程度的调整,45℃艾灸组差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),且45℃艾灸组与38℃艾灸组比较差异有统计学意义(P<0.01);45℃艾灸组较其他3组背根神经节TRPV1 m RNA表达差异均有统计学意义(P<0.01)。结论艾灸调脂疗效与艾灸激活TRPV1相关。

瞬时感受器电位离子通道香草素受体4下游信号分子的确定及其对大鼠背根神经节慢性压迫后痛觉过敏的作用

目的:探讨大鼠背根神经节慢性压迫CCD后瞬时感受器电位离子通道香草素受体4(TRPV4)下游信号分子及其在痛觉过敏中的机制。方法:鞘内分别注射TRPV4拮抗剂钌红(RR)、TRPV4反义寡脱氧核苷酸(ASODN)和一氧化氮合成酶(NOS)抑制剂L-NAME,检测CCD大鼠背根神经节DRG内一氧化氮(NO)代谢产物亚硝酸盐(nitrite)含量变化,并观测热刺激缩爪反应潜伏期(PWL)的变化。结果:鞘内分别注射RR、TRPV4 AS ODN和L-NAME后,均能够显著降低CCD大鼠DRG内亚硝酸盐含量(P<0.05),CCD大鼠的热痛敏行为也能够显著改善(P<0.05)。结论:TRPV4及其下游信号分子NO参与介导CCD大鼠的热痛觉过敏。

血管内皮细胞瞬时感受器电位阳离子通道研究进展

瞬时感受器阳离子通道（transient receptor potential，TRP）是一种跨膜蛋白质．被激活时允许包括钙离子在内的阳离子进行跨膜运输。TRP通道蛋白最初是作为视觉调节因子在果蝇中发现的，携带TRP基因突变的果蝇光感受器。对持续性光刺激产生了一个瞬时而非持续性的感受器电位。此通道蛋白因此被命名。与其他的钙通道如电压门控通道和配体门控通道参与相对特化的细胞功能不同，TRP家族的引入入胜之处在于其潜在的细胞功能的普遍性和多样性。

反转录病毒介导靶向瞬时感受器电位M7基因siRNA抑制RBL-2H3细胞的活化

背景:钙离子在肥大细胞活化后的脱颗粒反应起重要作用。瞬时感受器电位M7(transient receptor potential melastatin7,TRPM7)是肥大细胞重要的候选通道。目的:构建携带大鼠靶向TRPM7-siRNA的反转录病毒载体并检测其对大鼠RBL-2H3细胞抗原活化的影响。方法:实验设计3个TRPM7-siRNA序列和1个无关对照序列,克隆到酶切的pSuper-retro-neo-GFP反转录病毒载体,用重组质粒pSuper-retro-neo-GFP-shTRPM7-(1,2,3)采用脂质体Lipofectamine 2000转染RBL-2H3细胞,采用Western blot检测干扰效率。筛选出最有效的pSuper-retro-neo-GFP-siTRMP7与包装质粒共转染293FT细胞生成反转录病毒并感染RBL-2H3细胞,荧光实时定量PCR及Western blot检测TRPM7-siRNA的沉默效果。检测β-氨基已糖苷酶活性探讨RBL-2H3细胞抗原活化程度的改变。结果与结论:转染后的各组细胞中siTRPM7-3转染组的沉默效率最高(P<0.05)。pSuper-retro-neo-GFP-siTRMP7-3干扰组的TRPM7基因的mRNA水平和蛋白水平显著下调,致敏后其β-氨基已糖苷酶活性明显降低(P<0.05)。结果提示,降低TRPM7基因的表达可抑制RBL-2H3细胞的抗原活化。

瞬时感受器电位M7通道对RBL-2H3细胞增殖及凋亡的影响

【目的】观察瞬时感受器电位M7通道(TRPM7)在大鼠肥大细胞系RBL-2H3的表达,探讨其对RBL-2H3增殖和凋亡的影响。【方法】Western blot及细胞免疫荧光分别检测TRPM7在RBL-2H3的表达。通过离子通道阻断剂2-APB抑制TRPM7通道的表达,以WST-1法检测细胞增殖,流式细胞术及Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡。【结果】Westernblot及细胞免疫荧光法均检测到TRPM7在RBL-2H3的表达,细胞免疫荧光提示TRPM7主要表达于RBL-2H3细胞膜。100μmol/L和200μmol/L的2-APB可明显抑制TRPM7的表达。100μmol/L和200μmol/L的2-APB对RBL-2H3的增殖抑制率分别为(30.4±4.2)%和(42.0±0.8)%,早期凋亡率分别为(36.9±6.7)%和(49.3±1.8)%,总凋亡率分别为(40.2±7.0)%和(76.8±5.5)%。【结论】TRPM7通道表达于RBL-2H3肥大细胞系并参与其增殖和凋亡。

瞬时感受器电位超家族与血管平滑肌功能

血管平滑肌的功能主要是通过多种机制激活Ca^2＋内流使胞内Ca^2＋浓度持续升高来实现的。目前的研究表明这种Ca^2^＋内流与一系列瞬时感受器电位超家族成员有关，瞬时感受器电位超家族主要成员有：瞬时感受器电位C1、C3～6、V1、V2、V4、M4、M7和P2。文章概述瞬时感受器电位在血管平滑肌功能方面的作用。

瞬时感受器电位香草酸受体1在呼吸系统疾病中的研究进展

瞬时感受器电位香草酸受体1(TRPV1)在呼吸系统分布广泛,特别是感觉神经C纤维;另外,TRPV1在平滑肌细胞、上皮细胞、血管内皮细胞、黏膜下腺及炎性细胞也有表达。TRPV1参与呼吸系统疾病相关症状的多个方面,包括气道炎症、黏液分泌、气道高反应性、气道重构、咳嗽等。在呼吸系统疾病中,TRPV1表达及灵敏度均增加,TRPV1通道已经成为新兴的潜在的治疗位点。

TNF-α调控HODs样细胞瞬时感受器电位TRVP2通道蛋白表达的初步研究

目的分析肿瘤坏死因子α(TNF-α)调控人成牙本质细胞(HODs)样细胞中瞬时感受器电位香草酸受体2(TRPV2)离子通道的表达特征和相关受体,进一步丰富对人牙髓TRPV2离子通道生理功能研究的认识。方法收集2016年9月—2017年1月在天津医科大学口腔医院口腔颌面外科门诊因正畸拔除的健康完整第三磨牙20颗,患者年龄18~25岁。获取牙髓组织,在含10%胎牛血清的培养基中孵育、诱导和传代,选取第4~6代细胞进行后续实验。免疫荧光染色检测诱导HODs样细胞标志性蛋白特异性抗体牙本质涎磷蛋白(DSPP)和nestin表达特征,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹法(WB)和流式细胞术(FCM)等方法分别检测0、1、10μg/L TNF-α对TRPV2离子通道表达水平的影响。使用肿瘤坏死因子受体(TNFR)1拮抗剂R-7050处理细胞,分析TNFR1在TNF-α调控TRPV2离子通道表达中的作用。结果免疫荧光染色鉴定HODs样细胞DSPP和nestin表达阳性,RT-qPCR和WB证实,与无TNF-α处理的对照组相比,10μg/L TNF-α能够明显上调TRPV2离子通道mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),FCM也发现TNF-α能够提高TRPV2蛋白表达水平。研究进一步证实,与未用R-7050处理的阴性对照组相比,使用R-7050后TNF-α诱导的HODs样细胞TRPV2离子通道表达水平明显下调(P<0.05)。结论TNF-α主要通过TNFR1调控HODs样细胞TRPV2离子通道表达水平上升。

野百合碱预处理对大鼠右心室功能及规范性瞬时感受器电位亚家族表达的影响

目的:探讨腹腔注射野百合碱(MCT)3周对大鼠右心室功能的影响以及规范性瞬时感受器电位(TRPC)亚家族在野百合碱诱导的右心室心肌肥厚中的表达。方法:将20只SD雄性大鼠随机分为对照组(n=10)和野百合碱诱导右心室肥大模型组(MCT组,n=10)。MCT组以2%MCT 60 mg/kg剂量一次性腹腔注射,建立MCT诱导的右心室肥厚大鼠模型。3周后,分别测定以上两组的右心室血流动力学参数和右心室肥大指数(RVMI),右心室心肌病理切片,并通过逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western-blot)来检测信使核糖核酸(mR NA)和TRPC亚型的蛋白表达水平。结果:MCT组与对照组比较,右心室收缩压、RVMI显著升高,右心室内压力最大上升速率显著增加,右心室内压力最大下降速率显著下降,差异均有统计学意义(P<0.01);MCT组右心室心肌纤维增粗,细胞内肌原纤维数量增多,心肌纤维排列紊乱,细胞核深染,形状不整;MCT组较对照组右心室心肌组织TRPC6 mR NA表达升高,(n=6),右心室TRPC6蛋白相对表达水平升高(n=4),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:MCT预处理3周可诱导SD大鼠产生右心室心肌肥厚,上调了右心室心肌细胞TRPC6通道蛋白的mR NA和蛋白的表达,TRPC6可能参与了心肌肥厚的发生发展。

野百合碱对大鼠右心室心肌肥厚功能及规范性瞬时感受器电位6表达水平的影响

目的探讨腹腔注射野百合碱(MCT)对大鼠右心室心肌肥厚功能和规范性瞬时感受器电位6(TRPC6)表达水平的影响。方法采用随机数字表法将大鼠分为对照组(CON组)和MCT给药模型组(MCT组),各25只。CON组大鼠置于常压和正常氧浓度(21%)饲养箱中饲养3周,MCT组大鼠以2%MCT 60 mg/kg一次性腹腔注射,后常规饲养3周。记录两组大鼠右心室收缩压(RVSP)、心率(HR)、右心室内压力最大上升/下降速率(RV±dp/dtmax)、平均动脉压(MAP)以及右心室肥大指数(RVMI)。HE染色观察两组大鼠右心室心肌组织形态。并采用实时定量PCR(RT-PCR)检测TRPC6 mRNA表达水平,采用Western blotting方法检测TRPC6蛋白表达水平。结果饲养3周后,CON组大鼠死亡1只,MCT组大鼠死亡7只。MCT组和MCT组m SAP和HR比较,差异无统计学意义(P>0.05);MCT组RVSP、RVMI、RV+dp/dtmax高于CON组,RV-dp/dtmax低于CON组(P<0.05)。HE染色可见CON组大鼠右心室心肌细胞排列有序,胞核清晰;MCT组右心室心肌纤维粗大,细胞内肌原纤维数量增多,心肌纤维排列紊乱,细胞核深染,形状不整。CON组右心室心肌组织TRPC6 mRNA表达水平为(1.00±0.51),低于MCT组的(2.49±0.96)(t=-3.33,P<0.05)。CON组右心室心肌组织TRPC6蛋白表达水平为(1.00±0.46),低于MCT组的(2.90±0.32)(t=14.99,P<0.05)。结论 MCT可诱导SD大鼠产生右心室心肌肥大,并显著上调右心室心肌细胞编码TRPC6 mRNA和蛋白的表达水平,TRPC6可能参与右心室心肌肥大的发生发展。

熊果酸对顺铂致毒小鼠耳蜗瞬时感受器电位香草酸受体1表达的影响

目的研究熊果酸(ursolic acid,UA)对顺铂(cisplatin,CDDP)致毒小鼠耳蜗瞬时感受器电位香草酸受体1(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)表达的影响。方法 60只健康BALB/c小鼠随机分成对照组(腹腔注射等量生理盐水)、UA组(腹腔注射熊果酸80mg/kg)、CDDP组(腹腔注射CDDP 4.5mg/kg)和CDDP+UA组(一侧腹腔注CDDP 4.5mg/kg,同时对侧腹腔注射熊果酸80mg/kg),每组15只。各组动物均连续腹腔注射给药5天,每天1次,给药前及停药后24h行ABR检测,然后应用免疫组织化学染色、显微图像分析及蛋白质印迹技术观察小鼠耳蜗中TRPV1的表达。结果 CDDP组小鼠耳蜗TRPV1表达和ABR阈移均较对照组明显增加(P<0.05),UA+CDDP组小鼠ABR阈移及TRPV1表达较CDDP组明显降低(P<0.05),且TRPV1表达变化与ABR阈移改变高度相关(|r|>0.7,P<0.05)。结论 UA可抑制CDDP所致TRPV1的高表达,有效降低CDDP的耳毒性,改善听功能。

瞬时感受器电位香草酸受体1参与低氧性人肺动脉平滑肌细胞系的增殖

目的探讨低氧培养的人肺动脉平滑肌细胞系中瞬时感受器电位香草酸受体1(TRPV1)的表达及功能改变。方法用RT-PCR、Real-time PCR和Western blot检测人肺动脉平滑肌细胞中TRPV1的表达。用细胞计数法检测细胞增殖。结果低氧能明显上调人肺动脉平滑肌细胞中TRPV1通道的mRNA和蛋白的表达,并促进增殖,TRPV1通道阻断剂Capsazepine呈剂量依赖性地抑制增殖。结论 TRPV1通道可能参与或调控低氧所致细胞增殖。

瞬时感受器电位通道在人脑微血管内皮细胞机械牵张中的作用及其信号转导机制

目的观察瞬时感受器电位(transient receptor potential,TRP)通道在人脑微血管内皮细胞(human brain microvascular endothelial cells,HBMEC)机械牵张刺激中的作用,并对其信号转导入胞内的机制进行初步探讨。方法 HBMEC体外培养,采用多功能小型生物撞击机给予机械牵张刺激,根据不同施加条件将细胞分为对照、单纯牵张、牵张+SKF-96365(非选择性TRP通道阻滞剂)、牵张+低分子量肝素(low molecular weight heparin,LMWH)、牵张+一氧化氮合酶抑制剂(N-nitro-l-arginine methyl ester,L-NAME)共5组。采用激光扫描共聚焦显微镜观察胞内游离Ca2+分布情况,流式细胞仪检测牵张前后胞内Ca2+荧光强度变化;Western blot检测牵张前后一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)蛋白表达情况。结果流式细胞仪检测结果显示,单纯牵张组和牵张+LMWH组细胞内游离Ca2+浓度较对照组显著升高(P<0.05);牵张+SKF-96365组胞内Ca2+浓度较单纯牵张组明显降低(P<0.05)。Western blot检测结果显示,单纯牵张组细胞eNOS蛋白表达水平明显增高(P<0.05);牵张+SKF-96365组和牵张+L-NAME组eNOS蛋白表达水平较单纯牵张组明显降低(P<0.05)。结论 HBMEC胞膜TRP通道可感知机械牵张刺激的激活,继而引起胞内游离钙离子浓度升高,其转导机制可能主要与胞外Ca2+内流相关。

瞬时感受器电位香草酸受体1在低氧诱导肺动脉平滑肌细胞内钙升高中的作用

目的观察记录低氧条件培养的人肺动脉平滑肌细胞中瞬时感受器电位香草酸受体1(transient potential vanilloid receptor1,TRPV1)对细胞内Ca2+浓度(用340nm/380nm的荧光强度比值表示)的影响,探讨TRPV1在低氧性肺动脉平滑肌细胞增生中的作用。方法应用4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(4′,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色、流式细胞周期测定以及细胞内Ca2+浓度测定的方法检测细胞增生及细胞内Ca2+浓度变化。结果低氧能明显促进人肺动脉平滑肌细胞的增生,升高人肺动脉平滑肌细胞内静息Ca2+浓度,显著加强环并偶氮酸(cyclopiazonic acid,CPA)诱发的库容性Ca2+内流(capacitative Ca2+entry,CCE),上述效应均可被TRPV1阻断剂Capsazepine(CPZ)所抑制。结论在人肺动脉平滑肌细胞中,TRPV1可能是低氧所致细胞内Ca2+浓度增加、CCE增强和细胞过度增生的重要途径或调制因素。