一种感受态细菌的制备方法

目前,尽管分子克隆实验中通常采用的感受态细菌的制备方法可满足一般的实验要求,但对于获得比较困难的DNA分子而言,最大限度地提高质粒转化细菌菌株的效率,对提高实验成功率无疑具有重要意义[1].我们通过摸索,建立起一种方便、快捷、重复性好,转化效率高的感受态细菌的制备方法,介绍如下.

虹鳟肿瘤坏死因子(TNFα)基因体外表达与纯化的研究

将虹鳟两种肿瘤坏死因子TNFα1和TNFα2基因的成熟肽编码区域 ,用带有BamHI和HindIII酶切位点的基因特异性引物进行PCR扩增。扩增片段用限制性内切酶消化并连接到pQE30表达载体上 ,连接产物转化到大肠杆菌JM10 9感受态细菌中。转化子经PCR筛选 ,质粒测序 ,完成了虹鳟两种TNFα基因重组子的构建。重组子经体外培养和诱导后 ,获得了高效表达的TNFα重组蛋白。高效表达的重组TNFα不受诱导剂IPTG的影响 ,并且由于重组子高效表达而形成了包涵体 ;重组蛋白产量约占菌体蛋白总量的 2 5 %— 30 %。应用Ni NTA和固定金属亲和层析 (IM PC)技术 ,在变性条件下获得了高度纯化的重组蛋白 ,纯化重组蛋白的产量约为 0 5— 1mg L。

CD133基因启动子的克隆与序列分析

近些年来,口腔颌面部恶性肿瘤的发病率逐年增加（[1]）。虽然目前针对恶性肿瘤的治疗手段有了很多新的进展,但仍有部分肿瘤患者不能治愈。自从肿瘤干细胞（CSCs）理论提出后,给肿瘤患者带来了新的曙光（[2]）。有研究表明,CD133是某些头颈部肿瘤干细胞的表面特异性标记（[3,4]）,我们推测CD133＋细胞可能是头颈部肿瘤的干细胞。

Quicktrans转化试剂盒的应用

目的 :明确快速转化法的转化效率及影响因素。方法 :采用Quicktrans快速转化试剂盒制备感受态细胞 ,对不同类型的质粒进行转化。同时分析菌种、冻存时间对转化的影响 ,并与常规氯化钙法进行转化效率的比较。结果 :快速转化法可有效转化不同类型的质粒 ,对于同一种质粒 ,不同菌种和冻存时间对转化效果无影响。快速转化法转化效率高于常规氯化钙法。结论 :快速转化法是一种快速。