RNA干扰技术抑制新加坡石斑鱼虹彩病毒感染细胞多肽ICP46与绿色荧光蛋白融合基因的表达

新加坡石斑鱼虹彩病毒(singapore grouper iridovirus,SGIV)是一种严重的能引起全身性疾病的病原体,对石斑鱼养殖造成了重大的经济损失。将含有SGIV感染细胞多肽ICP46(infected cell polypeptides 46)基因的真核表达载体pEGFP-ICP46转染到胖头鲤细胞(fathead minnow cells,FHM)中进行融合表达,用荧光显微镜观察到ICP46-GFP融合蛋白主要分布于FHM细胞的细胞质中。根据SGIVICP46的序列,设计并体外化学合成了特异性干扰SGIVICP46的siRNA(siRNA-ICP46),与pEGFP-ICP46共转染到FHM细胞中,通过荧光显微镜观察不同时间点荧光强度的变化。转染后24～48h,实验细胞(共转染siRNA-ICP46和pEGFP-ICP46)和阳性对照细胞(共转染siRNA-GFP和pEGFP-ICP46)中的荧光微弱,发荧光的细胞数量较阴性对照(共转染siRNA-Negative和pEGFP-ICP46)少70%左右,但其后实验细胞和阳性对照细胞的荧光强度开始增强,在转染后72h其与阴性对照组已差别不大。说明体外化学合成的siRNA-ICP46转染后24～48h可有效抑制FHM细胞中外源导入SGIV ICP46基因的表达。

感染性贫血病人红细胞内谷胱甘肽代谢变化

感染性贫血病人红细胞内谷胱甘肽(GSH)含量明显下降,6—磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PD)活性降低,渗透脆性增加,与正常对照组比较有显著差异。急性感染病人红细胞内的GSH合成障碍及消耗增加,使红细胞膜含巯基蛋白不稳定而致细胞破裂,由此而引起的不显性溶血可能是感染贫血的发病原因之一。

血管活性肠肽在肺部感染性疾病鉴别诊断中的价值

检测继发型肺结核患者和社区获得性肺炎患者血清中的血管活性肠肽（VIP）水平变化,及与Th1型细胞因子γ-干扰素（IFN-γ）、Th2型细胞因子白细胞介素-4（IL-4）的相关性,探讨VIP在肺部感染性疾病鉴别诊断中的价值。

胸腺五肽预防晚期肺癌机会性真菌与寄生虫感染的研究

目的 评价胸腺五肽在预防晚期肺癌机会性真菌与寄生虫感染中的作用。方法 将经组织学或细胞学证实的4 2例晚期非小细胞肺癌分为两组,A组(实验组) 2 3例,采用诺维本联合顺铂(即NP方案)进行治疗,同时辅助胸腺五肽1～2mg/d静滴,15天为一疗程;B组(对照组) 19例,只单独采用NP方案,连续应用2～3周期后评价疗效。结果 1.A组、B组在治疗前后,外周血白细胞的变化均有显著性差异(A组:P <0 .0 5 ,B组P <0 .0 1) ;2 .从T细胞亚群的检测来看,B组的CD4 +细胞下降明显,从疗前的4 1.91%下降到33.17% ,治疗前后比较P <0 .0 5 ,有显著性差异;从NK细胞活性的检测来看,A组的NK细胞活性由治疗前的2 1.38上升到2 8.0 7,增加了31.2 9% ,P <0 .0 5 ,有显著性差异。3.两组病人在化疗中出现肺部机会性感染的情况为:A组感染率为8.6 9% ;B组为2 6 .3% ,二组之间有显著性差异(P <0 .0 5 )。结论 胸腺五肽能减少化疗后患者的骨髓抑制现象,预防外周血白细胞、CD4 +细胞的降低,提高患者的细胞免疫功能和NK细胞的活性,对晚期非小细胞肺癌患者机会性感染的发生有一定的预防作用。

血管活性肠肽对感染性休克大鼠肠道的保护作用

目的：探讨血管活性肠肽(VIP)对感染性休克大鼠肠道的保护作用及其机制。方法：采用盲肠结扎加穿 孔(CLP)法制备感染性休克模型。30只健康 SD 大鼠随机分成3组：对照组(假手术组，SO)、CLP 组和 VIP 组。SO 组和 CLP 组术后经股静脉注射生理盐水，VIP 组则注射 V1P 5nmol，持续监测平均动脉压(MAP)、采集血样，采用酶联免 疫吸附试验(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-10(IL-10) 水平，并取小肠标本行病理和电镜检查。结 果：与对照组比较，CLP 组术后 MAP 进行性下降，血清 TNF-α、IL-10水平升高，显微镜和电镜下小肠有明显的病理改 变。VIP 能有效阻止 MAP 的下降，降低血清 TNF-α和提高 IL-10水平，显微镜和电镜下小肠的病理损害明显改善。结 论：VIP 对感染性休克大鼠及其小肠结构和功能有明显的保护作用，其机制可能与影响细胞因子的产生有关。

家兔中性粒细胞防御素的纯化及其对念珠菌抗菌活性的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化兔中性粒细胞防御素，兔中性粒细胞防御素ＮＰ２具有抗白念珠菌Ｍ１０１２Ｒ，ＮＩＨ Ａ－２０７，乳酒念珠菌，热带念珠菌和高里氏念珠菌等菌的活性，且抗菌活性随防御素浓度的升高而增强．

猪圆环病毒2型重组病毒ZJ-R感染性克隆的构建

利用无缝克隆方法构建ZJ-R全长基因组的单拷贝分子克隆以及双拷贝串联分子克隆;通过生物信息学技术预测ZJ-R病毒结构蛋白的B细胞抗原表位,人工合成选定的表位肽,然后偶联KLH免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体;免疫组化试验证实该多抗与转染PK15细胞的ZJ-R双拷贝串联分子克隆具有反应性。结果表明构建的ZJ-R双拷贝串联分子克隆具有感染性。

IL-22对Hp感染的UC模型小鼠的影响

目的探究白细胞介素-22(IL-22)对幽门螺旋菌(Hp)感染的溃疡性结肠炎(UC)模型小鼠的影响。方法无特定病原级雌性Balb/c小鼠80只,依次分为空白对照组(自由饮用蒸馏水7 d,于第1、3、5天注射0.9%氯化钠溶液)、Hp感染组(灌服Hp菌液,自由饮用蒸馏水7 d,于第1、3、5天注射0.9%氯化钠溶液)、Hp+DSS组[灌服Hp菌液,自由饮用3%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液7 d,于第1、3、5天注射0.9%氯化钠溶液]、IL-22干预组(灌服Hp菌液,自由饮用3%DSS溶液7 d,于第1、3、5天注射重组小鼠IL-22),每组20只,分别重复上述1~3个周期。每日观察小鼠一般情况、收集粪便做大便隐血实验、采用疾病活动指数(DAI)评分判断疾病活动指数;均于建模成功7 d后采用断头法处死小鼠,免疫组化染色/Western blot法检测肠黏膜中紧密连接蛋白occludin、STAT3表达,透射镜下观察结肠上皮细胞间连接程度,苏木素-伊红(HE)染色检测评估UC炎症程度,提取结肠蛋白检测肠道屏障功能指标二胺氧化酶(DAO)、血浆D-乳酸(D-Lacc)。结果空白对照组第3、7、21天DAI评分低于Hp感染组低于Hp+DSS组低于IL-22干预组(P<0.05),空白对照组第7、21天体质量百分比高于Hp感染组高于Hp+DSS组,高于IL-22干预组(P<0.05)。IL-22干预组小鼠较Hp+DSS组小鼠结肠黏膜上皮完整、管壁增厚,腺体和隐窝结构基本正常、排列完整,炎性细胞浸润更少;空白对照组组织病理学评分低于IL-22干预组,低于Hp+DSS组,低于Hp感染组(P<0.05)。空白对照组occludin蛋白表达量高于Hp感染组,高于Hp+DSS组,高于IL-22干预组(P<0.05),空白对照组和Hp感染组STAT3蛋白表达量低于Hp+DSS组,低于IL-22干预组(P<0.05)。透射电镜结果显示,IL-22干预组小鼠较Hp+DSS组和Hp感染组小鼠有更完整屏障功能。空白对照组D-Lac含量低于IL-22干预组,低于Hp+DSS组,低于Hp感染组(P<0.05),空白对照组和Hp感染组DAO含量低于Hp+DSS组,低于IL-22干预组(P<0.05)。结论IL-22干预后Hp感染的UC模型小鼠受损的肠道黏膜上皮细胞得到改善,肠道杯状细胞及紧密连接蛋白增加,考虑IL-22可作为一种新的治疗靶点。

慢性肾衰竭血液透析患者医院感染病原学及Th22和IL-22的诊断价值

目的分析慢性肾衰竭(CRF)血液透析患者医院感染病原学特点及辅助性T细胞22(Th22)和白细胞介素-22(IL-22)的诊断价值,为临床提供诊断依据.方法选取2018年2月-2020年2月郑州市第七人民医院收治的82例行血液透析治疗的CRF患者,根据有无发生医院感染分为感染组(n=32)和未感染组(n=50),分析感染病原学特点,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估外周血Th22细胞、IL-22水平诊断CRF血液透析患者并发医院感染的价值.结果32例行血液透析CRF患者医院感染类型主要为呼吸系统感染,占43.75%;共培养出病原菌56株,主要以革兰阴性菌为主,占62.50%;感染组外周血Th22细胞及IL-22水平高于未感染组(P<0.05),且随感染程度的加重而升高(P<0.05);ROC曲线分析显示,外周血Th22细胞和IL-22水平联合诊断CRF血液透析患者并发医院感染的曲线下面积(AUC)为0.848,敏感度和特异度分别为94.00%,60.00%.结论CRF血液透析患者并发医院感染的病原菌以革兰阴性菌为主,外周血Th22细胞、IL-22水平呈高表达,且与医院感染病情程度有关.

IL-22和IL-22 R1与MMP-9及MCP-1对感染性早产的诊断价值

目的探讨白细胞介素-22(IL-22)、白细胞介素-22受体1(IL-22R1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)对感染性早产的诊断价值.方法选择2019年12月-2022年12月于新乡市中心医院进行分娩产妇作为研究对象,根据其绒毛膜羊膜炎和早产情况,分别纳入感染性早产组(102例)、感染性足月产组(25例)、非感染性早产组(50例)、非感染性足月产组(196例);分析四组血清IL-22、IL-22 R1、MMP-9、MCP-1表达水平以及妊娠结局,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清指标单独及联合检测对感染性早产的预测价值.结果非感染性足月产组、非感染性早产组、感染性足月产组、感染性早产组血清IL-22、IL-22 R1、MMP-9、MCP-1水平呈升高趋势(P<0.05);将感染性早产纳入阳性,非感染性早产纳入阴性,绘制ROC曲线分析IL-22、IL-22R1、MMP-9、MCP-1单独及联合检测对感染性早产的预测价值,曲线下面积(AUC)为0.727、0.898、0.885、0.840和0.937;感染性早产组剖宫产发生率高于非感染性足月产组,产后出血发生率高于非感染性早产组、非感染性足月产组,新生儿肺炎发生率高于感染性足月产组、非感染性早产组、非感染性足月产组(P<0.05).结论感染性早产组产妇血清IL-22、IL-22 R1、MMP-9、MCP-1水平升高,检测产妇血清IL-22、IL-22 R1、MMP-9、MCP-1有助于感染性早产的诊断,进而制定有效、及时的干预措施,最终改善母婴结局.

抗生素肽FALL-39基因大肠杆菌表达载体的构建

细菌对传统抗生素产生耐药性是当今临床医学中的全球性难题之一。内源性抗生素肽是多细胞生物天然进化产生的抵御外源性感染的生物活性肽，历经数百万年而无耐受产生，且其作用迅速、强力、广谱。但是天然获取、固相合成和重组真核表达抗生素肽量少而造价极其昂贵，因此，利用微生物作为生物反应器通过基因工程技术生产抗菌肽，是进行抗菌肽研究开发的最有前途的选择之一。

不同致炎剂诱导大鼠硬脑膜神经源性炎症

目的观察不同致炎剂刺激大鼠硬脑膜的神经源性炎性反应,为建立慢性偏头痛模型提供实验依据。方法雄性SD大鼠24只,随机分为4组,生理盐水组、致炎剂组、降钙素基因相关肽(CGRP)组、致炎剂+CGRP组,每组6只。使用激光多普勒血流仪检测刺激前后各组硬脑膜动脉血流量,甲苯胺蓝染色观察肥大细胞脱颗粒数及脱颗粒比例,伊文思蓝荧光法观察大鼠硬脑膜血管渗出情况。结果与刺激前比较,致炎剂组、CGRP组、致炎剂+CGRP组大鼠刺激后脑血流明显增多。致炎剂+CGRP组大鼠脑血流量较生理盐水组、致炎剂组、CGRP组明显增多;致炎剂组、CGRP组、致炎剂+CGRP组大鼠硬脑膜肥大细胞脱颗粒比例较生理盐水组明显增加。致炎剂+CGRP组大鼠硬脑膜肥大细胞脱颗粒比例较致炎剂组及CGRP组明显增加。致炎剂组、CGRP组、致炎剂+CGRP组大鼠硬脑膜荧光红斑明显多于生理盐水组。结论致炎剂+CGRP较常规致炎剂、CGRP刺激大鼠硬脑膜可以引起脑血流显著增加,肥大细胞脱颗粒及血管渗出,从而发生神经源性炎性反应。

慢性病毒感染性疾病的治疗性树突状细胞疫苗研究进展

树突状细胞（dendritic cells，DCs）是免疫系统的专职抗原递呈细胞（antigen presenting cell，APC），是T细胞特异免疫应答的直接启动者和调控者，是连接天然免疫与特异性免疫的桥梁。DCs在外周血与组织中摄取和处理抗原之后，迁移到引流淋巴结，在淋巴结T细胞富集区将抗原递呈给静止淋巴细胞。未成熟的DCs能摄取和处理抗原，在完全成熟后，DCs表面表达高水平的MHC-抗原肽复合物及共刺激分子，此时才能有效激活T细胞反应。

EV71感染致Reye综合征抢救成功1例

1病例资料 女孩,3岁3月,来自农村。因发热、口腔、足底疱疹4d,呕吐、嗜睡、少动2d入院。本地有手足口病流行史。查体:T37.0°C,P128次/min,R42次/min,BP91/43mmHg,Wt10kg。发育正常,营养欠佳,精神差,呈浅昏迷状,呼吸促。皮肤粘膜无瘀点、瘀斑;浅表淋巴结无肿大,双瞳孔等大等圆约3.5mm,光反射迟钝,颈抵抗,咽部充血,上颚粘膜可见2~3粒0.2~0.3cm大小疱疹,周围绕有红晕,双侧扁桃体无肿大。双肺呼吸音粗糙,未闻及啰音。心率:128次/min,心律齐,心音低钝,未闻及杂音。腹软,肝脏在右肋下5cm,剑下7cm可触及,质地中等,表面光滑,脾未触及,肠鸣音正常。四肢远心端肿胀明显,压之无凹陷,四肢肌张力高。左足底内侧缘皮肤可见3粒红色丘疹,0.2~0.3cm大小,压之褪色,无破溃。压眶有反应,角膜反射减弱,腹壁反射消失,膝腱反射稍亢进,双侧巴彬斯基氏征(+)。急诊血常规示:WBC22.4×109/L,RBC3.03×1012/L,L:0.340,N:0.559, PLT363×109/L,HGB80g/L。尿常规:正常。肝功:ALT294.2U/L、AST 147.4 U/L、ALP 275.9 U/L、GGT 32.2U/L,血浆总蛋白56g\L,白蛋白38g\L,球蛋白18g\L,急诊血生化:GLU 0.53mmol/L、LDH 560.2IU/L、CK 1895.4L、CK-MB137.9U/L、HBDH 474U/L、CREA:40umol/L、BUN 10.8mmol/L、Ca:2.03mmol/L、Fe:33.9umol/L,K:4.7mol/L、Na:135.1mol/L,Cl:107.7mol/L,CO2cp3.3.1mol/L;复查血糖1.53 mmol/L,立即给10~12μg/kg.min的糖速纠正低血糖。心肌标志物:Myo弱阳性, CK-MB阳性,血氨148μmol /L,PT,TT,APTT测不出。血气分析示:pH 7.231,二氧化碳分压28.80mmHg,血中氧分压68.8 mmHg,碳酸氢根12.2 mmol/L,实际碱剩余-15.5,提示:代谢性酸中毒并呼吸性碱中毒。血脂示:总胆固醇1.66mmol/l 甘油三脂2.2mmol/l HDL-C0.46mmol/l LDL-C0.20mmol/l APO-A 0.2g/l APO-B0.5g/l。脑脊液检查:外观清亮,蛋白阴性,有核细胞计数2.0×106/L。糖0.17mmol/L,氯132.5mmol/L。脑电图回报:大脑前部及中央区可见尖波,尖慢波阵发(中央区较明显);头颅MRI示:脑组织水肿,肝炎病毒学全套正常。诊断为:①Reye综合征;②手足口病。给维持血糖在5mmol/L以上,纠酸,甘露醇降颅压1g\kg.q4h,果糖营养心肌,还原型谷胱甘肽保肝;补充维生素K,谷氨酸钠降低血氨处理,反复少量输注新鲜血浆补充凝血因子、胞磷胆碱营养脑细胞、利巴韦林抗病毒等综合处理,入院19h后出现去大脑性强直,意识障碍加重,改甘露醇为1g\kg.q2h+地塞米松0.5kg.q12h,36h后,意识有所恢复,逐渐延长甘露醇的使用时间,根据血糖、血气调整糖速和碳酸氢钠用量。1w后神志逐渐转清,四肢肌张力仍高。反复复查血糖、血氨、肝肾功、电解质逐渐恢复正常,串联质谱检查正常,排外遗传代谢病。鼻咽拭子EV71-PCR(+)、肛拭子EV71-PCR(+),确诊为:EV71感染致Reye综合征。2w后四肢肌张力逐渐恢复正常,20d后能下地学步行走,肝脏大小恢复正常,血脂复查正常,治疗27d出院。出院后定期门诊复查,心肌酶、EEG、3个月后恢复正常,随访2年,各项生化指标及神经系统检查正常,无神经系统后遗症[1-2]。

人中性粒细胞多肽1-3研究进展

人中性粒细胞多肽是近年来在人体内发现的一类天然抗生素,具有很强的抗细菌感染和杀伤病毒作用。人中性粒细胞多肽可降低病菌产生耐药性的概率,现阶段已成为国内外研究的热点。本文将对人中性粒细胞多肽的分子生物学特征、生物学活性和其抗感染作用进行综述。

单核细胞增多性李斯特菌谷胱甘肽还原酶GR的生物学特性

【目的】本文旨在构建单核细胞增多性李斯特菌谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase,GR)基因lmo1433(gr)缺失株,并研究GR在细菌生长和运动过程中发挥的作用及与谷氧还蛋白(glutaredoxin,Grx)系统间的调控关系,探究GR参与细菌抗氧化应激和致病力的生物学功能,为阐明氧化还原蛋白介导细菌环境适应和宿主内感染的机制奠定分子基础。【方法】利用细菌遗传操作系统构建获得gr缺失株及回补株后,通过分子生物学和感染生物学手段,比较野生株和突变株的运动性、生长能力、抗氧化应激、细胞黏附、侵袭和增殖能力;利用整合型质粒构建带GR启动子的荧光报告系统,并结合荧光定量分析GR受Grx调控的情况。【结果】缺失gr后李斯特菌在体外培养基中的生长能力未受明显影响,但在半固体培养基中的运动能力却显著增强;缺失gr后细菌在铜离子、镉离子以及肼中抗氧化应激能力增强,在H_2O_2中无差异;缺失gr后细胞黏附、侵袭和增殖能力均显著增强;荧光报告系统定量分析发现grx缺失后gr的启动子活性显著增强,表明Grx参与对GR的转录负调控。【结论】本研究首次证实了单增李斯特菌谷胱甘肽还原酶GR能调控细菌的运动能力,并且缺失GR增强了李斯特菌的抗氧化应激和感染宿主能力;首次证实了GR的自身转录受Grx负调控,但具体分子机制有待于深入探究。本研究有助于深入理解单增李斯特菌氧化还原蛋白的调控关系以及通过参与诸多生物学过程介导细菌体外环境适应及宿主内感染的分子机制,为防控胞内菌感染提供了新策略。

细菌感染性肺炎患儿血清IL-22和SOCS3表达水平及临床意义

目的探究细菌感染性肺炎患儿血清白细胞介素-22(IL-22)、细胞因子信号抑制因子3(SOCS3)表达水平及临床意义。方法选取2019年3月-2020年5月淮北市妇幼保健院收治的62例细菌感染性肺炎患儿为观察组,根据患儿肺部感染严重程度分为轻度组39例,重度组23例,另选取同期健康体检儿童45人为对照组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测所有患儿血清IL-22、SOCS3表达水平。Pearson相关性分析细菌感染性肺炎患儿血清IL-22和SOCS3的相关性。ROC曲线分析血清IL-22、SOCS3对细菌感染性肺炎发生的诊断价值,多因素logistic回归分析细菌感染性肺炎患儿发生的危险因素。结果与对照组比较,观察组患儿血清IL-22、SOCS3水平均明显上调,差异有统计学意义(P<0.05)。与细菌感染性肺炎轻度组患儿比较,重度组血清IL-22、SOCS3均呈显著性上调,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,细菌感染性肺炎患儿血清IL-22和SOCS3成显著正相关(r=0.481,P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,IL-22、SOCS3对细菌感染性肺炎诊断价值的曲线下面积(AUC)分别为0.859、0.842,截断值分别为41.653 pg/mL、176.655μg/L,敏感度分别为82.40%、88.20%,特异性分别为86.70%、75.62%。多因素logistic回归分析显示,IL-22、SOCS3均为儿童发生细菌感染性肺炎的独立危险因素(P<0.05)。结论IL-22、SOCS3在细菌感染性肺炎中显著上调,二者成正相关关系,共同参与该疾病的发生、发展,且对细菌感染性肺炎的发生具有一定的诊断价值。

慢性心力衰竭患者并发重症感染性肺炎免疫指标变化的临床意义

目的探讨慢性心力衰竭患者重症感染性肺炎血脑钠肽(BNP)、降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)变化及临床意义,分析其在诊治中的临床评价。方法选取2014年1月-2015年1月住院的慢性心力衰竭患者中重症感染性肺炎为感染组,单纯慢性心力衰竭患者设为非感染组,每组各50例,以酶联免疫吸附法检测血浆BNP、血清PCT、IL-6、CRP。结果免疫指标在感染组和非感染组间比较,BNP、PCT、CRP、IL-6水平感染组明显高于非感染组,比较差异有统计学意义(P<0.05);感染组和非感染组不同心功能分级患者免疫指标比较,感染组、非感染组心功能Ⅲ-Ⅳ级患者BNP、PCT、CRP、IL-6均高于Ⅰ-Ⅱ级患者,比较差异有统计学意义(P<0.05);spearman相关性分析显示两组患者随着心功能分级增高血BNP、PCT、CRP、IL-6水平均有增高趋势,存在正相关性(P<0.05)。结论慢性心力衰竭患者合并重症感染性肺炎血BNP、PCT、CRP、IL-6水平均明显升高,与心功能病变严重程度密切相关,随着心功能分级增高而升高。