淫羊藿多糖的硫酸化修饰及其对IBDV感染细胞的影响

按正交试验设定氯磺酸-吡啶法的9种修饰条件,对淫羊藿多糖(EPS)进行硫酸化修饰,得到9种硫酸化淫羊藿多糖(sEPS),用MTT法比较了9种sEPS抵抗鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)感染鸡胚成纤维细胞(CEF)的作用。结果表明,硫酸化修饰后sEPS较未修饰的EPS显著提高了CEF抵抗IBDV感染的作用,以sEPS2和sEPS5的效果较好,且与sEPS的硫酸基取代度和糖含量有一定的相关性,反应温度80℃、氯磺酸与吡啶的配比1∶8、反应2h为最佳修饰条件。

中药粗提物对鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染细胞能力的影响

将黄芪、连翘等八味中药的粗提物与鸡传染性法氏囊病病毒以三种顺序 (先加中药后加病毒、先加病毒后加中药、中药和病毒同时加入 )加入至培养 2 4 h、已长成完整单层的鸡胚成纤维细胞 (CEF)上 ,观察其对病毒感染细胞能力的影响。结果表明 ,在细胞安全浓度范围内 ,仅黄芪粗提物在先于病毒或与病毒同时加入时抑制 IB-DV病毒感染 。

监测降钙素原与感染细胞在呼吸机相关性肺炎的早期诊断价值

目的通过早期监测血降钙素原（PCT）和支气管肺泡灌洗液中感染细胞水平，探讨其在呼吸机相关性肺炎（VAP）早期诊断中的价值。方法采用前瞻性临床研究，以2011年1月1日至2012年6月1日连续收住重症医学科（ICU）接受机械通气超过48h、临床诊断为VAP的患者为观察对象，并排除进入ICU时已存在明确感染以及在观察期间并发肺外器官感染者。监测临床诊断当日患者的咀PCT水平。行支气管肺泡灌洗，支气管肺泡灌洗液涂片经迈格吉染色（MGG），计数100个吞噬细胞内有病原微生物的“感染细胞”百分比（PIC）。将监测结果与最后确诊病例进行统计学分析。结果机械通气／〉48h的421例患者中，共纳入76例研究对象，最后确诊64例，未确诊12例。确诊组在疑诊VAP当日PCT水平为（3．48±1．46）rig／mL，PIC为（3．11±1．47）％，显著高于未确诊组[（1．53±0．60）ng／mL和（1．08±0．29）％，P〈0．05]。监测PCT以2ng／mL、PIC以2％为截断值时诊断VAP的敏感度、特异度分别为78．12％、75．00％及78．12％、91．67％，ROC曲线下面积分别为0．87（95％CI78．9％～95．9％）及0．874（95％CI79．2％～94．9％）。两种方法串联诊断敏感度及特异度分别为97．36％、97．36％，ROC曲线下面积为97．9％。结论在临床诊断的基础上，通过监测PCT与PIC的水平，能早期、快速、便捷诊断VAP，使有效抗生素治疗时间提前，值得临床推广。

RNA干扰技术抑制新加坡石斑鱼虹彩病毒感染细胞多肽ICP46与绿色荧光蛋白融合基因的表达

新加坡石斑鱼虹彩病毒(singapore grouper iridovirus,SGIV)是一种严重的能引起全身性疾病的病原体,对石斑鱼养殖造成了重大的经济损失。将含有SGIV感染细胞多肽ICP46(infected cell polypeptides 46)基因的真核表达载体pEGFP-ICP46转染到胖头鲤细胞(fathead minnow cells,FHM)中进行融合表达,用荧光显微镜观察到ICP46-GFP融合蛋白主要分布于FHM细胞的细胞质中。根据SGIVICP46的序列,设计并体外化学合成了特异性干扰SGIVICP46的siRNA(siRNA-ICP46),与pEGFP-ICP46共转染到FHM细胞中,通过荧光显微镜观察不同时间点荧光强度的变化。转染后24～48h,实验细胞(共转染siRNA-ICP46和pEGFP-ICP46)和阳性对照细胞(共转染siRNA-GFP和pEGFP-ICP46)中的荧光微弱,发荧光的细胞数量较阴性对照(共转染siRNA-Negative和pEGFP-ICP46)少70%左右,但其后实验细胞和阳性对照细胞的荧光强度开始增强,在转染后72h其与阴性对照组已差别不大。说明体外化学合成的siRNA-ICP46转染后24～48h可有效抑制FHM细胞中外源导入SGIV ICP46基因的表达。

单纯疱疹病毒2型感染细胞蛋白27重组真核表达质粒的构建及表达

目的构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)感染细胞蛋白27(ICP27)基因与pcDNA3.1(+)真核表达质粒的重组质粒pcDNA3.1(+)/ICP27。方法通过RT-PCR方法从HSV-2培养物中提取RNA制备ICP27的编码基因UL54DNA,将其与载体pcDNA3.1(+)连接。通过双酶切和测序鉴定重组质粒是否构建成功,Western blot法鉴定重组质粒在真核细胞COS-7中表达。结果重组质粒pcDNA3.1(+)/ICP27构建成功,可在COS-7中表达。结论成功构建了可在真核细胞内表达的pcDNA3.1(+)/ICP27重组质粒,为下一步研究该重组质粒作为DNA疫苗的免疫学效应奠定了基础。

在HSVI感染细胞中类PEBP蛋白基因的克隆及分析

在细胞对病毒感染后的基因反应研究中 ,从克隆的HSVI感染后细胞特异cDNA文库中筛选出一个 70 5bp克隆基因—HSP 714,基因测序分析表明为一新的全基因序列 (GeneBankAccessionNumber:AF372 6 2 4) ,含有完整的ORF框架 ,编码 12 6个氨基酸 ;信息生物学分析结果表明该蛋白含有磷脂酰乙醇胺结合蛋白 (PEBP)结构域 ,与植物、哺乳动物等多物种类CEN家族产物有高度的同源性 ,此外该基因的进化分析结果表明此基因更接近于植物的类CEN家族。据此推测 。

一类具有潜伏感染细胞的时滞病毒感染模型

提出了一类具有潜伏感染细胞的时滞病毒感染模型,定义了基本再生数,给出了每个平衡点存在的充分条件。通过构造Lyapunov函数和利用LaSalle不变集原理,证明了当基本再生数小于或等于1时,无病平衡点是全局渐近稳定的;当基本再生数大于1时,慢性感染平衡点是全局渐近稳定的,但无病平衡点是不稳定的。结论表明,模型中的潜伏感染时滞、内时滞和病毒产生时滞并不影响模型的全局稳定性,并通过数值模拟验证了所得理论结果。

IFN-γ作用于沙眼衣原体感染细胞后Fas mRNA的检测

探讨了IFN γ能否通过上调Ct(Chlamydiatrachomatis ,简称Ct)感染细胞FasmRNA的表达而调节机体对Ct感染细胞的免疫应答。应用IFN γ作用于感染Ct (K血清型 )的McCoy细胞 ,通过观察细胞形态改变及MTT法检测细胞毒作用 ,选出IFN γ的最佳作用浓度和检测时间 ,用RT PCR方法检测McCoy细胞FasmRNA的表达。结果显示 :(1)形态学观察结果显示IFN γ作用于Ct感染细胞 2 8h后细胞膜下出现大量空泡 ,整个细胞内充满颗粒 ,且随着IFN γ作用时间延长 ,细胞体积变小 ,细胞变稀疏。 (2 )MTT法检测结果显示 2 0U/mLIFN γ对Ct感染的McCoy细胞已产生显著的细胞毒作用 ,IFN γ浓度继续增大 ,细胞毒作用的增大不明显。 (3)RT PCR法检测FasmRNA的表达 ,结果显示IFN -γ上调了McCoy细胞FasmRNA的表达 ,Ct感染McCoy细胞没有影响FasmR NA表达的上调。IFN

带有治愈率的病毒感染细胞与细胞感染细胞的HIV-1时滞病毒动力学模型

研究了一类具有治愈率和时滞的HIV-1(获得性免疫缺陷病)病毒动力学模型的性质,在模型中同时考虑了病毒感染细胞和细胞感染细胞的感染机制.通过计算和分析,得到了基本再生数的显式表达式,并且得到当基本再生数小于1时,无病平衡点全局渐近稳定,当基本再生数大于1时,病毒在宿主体内是持续生存的.

中药复方粗提物对IBDV感染细胞能力的影响

将中药方 1、方 2、和方 3的粗提物与鸡传染性法氏囊病毒以三种顺序 (先加中药后加病毒、先加病毒后加中药、中药和病毒同时加入 )加入到培养 2 4h、已长成完整单层的鸡胚成纤维细胞 (CEF)上 ,观察它们对病毒感染细胞能力的影响。结果表明 :在细胞安全浓度范围内 ,方 1、方 2和方 3的粗提物在先于病毒或与病毒同时加入时均能抑制病毒感染 ,且与浓度和加药方式有关 ;以补气、清热凉血、滋阴为主的方 3优于以补气、清热凉血为主的方 1和以补气为主的方 2。

淋巴瘤细胞(系)克隆和白血病病毒感染细胞系的建立及其分化诱导研究

为了进行白血病病毒病因学研究,本室已先后建成了小鼠L6565病毒性白血病、SRS淋巴瘤和L783移植性白血病等瘤株,对它们的生物学特性已进行了详细的研究。近年来,在动物模型基础上,在体外建立了小鼠SRS-82细胞系及其SAC系列克隆。

马立克病毒糖蛋白D基因转入感染细胞DNA的研究

用ＥｃｏＲＩ，ＰｓｔＩ内切酶将已分离和克隆的马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｄ（ｇＤ）基因从重组ｐＭｇＤ１８质粒中切出，克隆进反转录病毒质粒载体（ＲＣＡＳ）的连接质粒载体ｐＵＣＣｌａ１１２Ｎ的相同位点。用Ｃｌａｌ再将ｇＤ重组ｐＵＣＣｌａ１１２Ｎ中的ｇＤ基因切出，用ＣｌａＩ将ＲＣＡＳ载体切开，将ｇＤ基因构建于ＲＣＡＳ的ＣｌａＩ位点。通过原位杂交筛选重组ＲＣＡＳ，并结合酶切分析鉴定出ｇＤ插入方向正确的重组ＲＣＡＳ。用磷酸钙沉淀法将ｇＤ重组ＲＣＡＳ转染鸡胚成纤维细胞。收集转染后第９天的细胞上清，并用其感染原代ＣＥＦ，在感染后第４天和第６天收集ＣＥＦ。提取ＣＥＦ基因组ＤＮＡ，用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ（ｄｉｇ）标记ｇＤ基因片段作为探针，通过ｄｏｔｂｌｏｔ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ检测基因转移情况。结果表明，转染的重组ＲＣＡＳ不仅在细胞内变成有传染性的完整病毒。

一类具有潜伏感染细胞的时滞HIV-1传染病模型

提出了一类具有潜伏感染细胞的时滞HIV-1传染病模型,定义了基本再生数Ro,给出了无病平衡点P0(x0,0,0,0)和慢性感染平衡点P*(x*, 3*, y*, v*)的存在条件.首先利用线性化方法,得到了无病平衡点和慢性感染平衡点的局部渐近稳定性.进一步通过构造相应的Lyapunov函数,并结合LaSalle不变集原理,证明了当R0<1 时,无病平衡点P0(x0,0,0,0)是全局渐近稳定的;当R0>1时,慢性感染平衡点P*(x*, 3*, y*, v*)是全局渐近稳定的,但无病平衡点P0(x0,0,0,0)是不稳定的.结果表明,模型中的潜伏感染时滞和感染时滞并不影响模型的全局稳定性,并通过数值模拟验证了所得结论.

尿中病毒感染细胞检测及其意义

目的 探讨尿中病毒感染细胞的检测及意义。方法 对 2 8例病毒感染患者的尿液进行细胞染色镜检 ,观察病毒感染细胞特征。并与对照组进行比较。结果 对照组 18例被检者尿中无病毒感染细胞出现 ,2 8例病毒感染者尿染色镜检有 2 5例发现病毒感染细胞 ,且 3种病毒感染细胞形态特征不同。结论 尿中病毒感染细胞的检测对辅助诊断各种病毒感染疾病有较高的实用价值。

人巨细胞病毒感染细胞的种类及演变和命名

作者通过对10例婴幼儿全身性巨细胞包涵体病（CID）尸检切片的观察，发现各例累及器官数目悬殊，为2～18个不等．好发器官为肺、肝、肾。据每张切片上典型巨细胞数大于10个的7张HE切片光镜检查，可将巨细胞病毒感染细胞（CIC）分为肿胀细胞、典型巨细胞和退变巨细胞三类，其构成比分别为0～43．5％、48．9％～74．2％和7．6％～38．9此如结合近期文献中采用核酸杂交技术和减）免疫组化等检测结果的报道，则进一步可依CIC演变过程分为四期．第一期隐匿期，第二期肿胀期，第三期包涵体期和第四期退变期。作者还就命名问题进行了探讨。

白血病病毒感染细胞系的生物学和病毒学研究

对花费近10年时间建立的3个感染了白血病病毒的细胞系,已从生物学和病毒学研究深入到分子病毒学研究。

单纯疱疹病毒2型感染细胞多肽27真核表达质粒的构建及表达

为了构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)感染细胞多肽27(ICP27)真核表达质粒,应用PCR技术从HSV-2 333株的基因组中扩增ICP27基因,并连接至真核表达载体pEGFPC2,对阳性克隆进行菌落PCR、酶切和测序鉴定后,成功构建了重组质粒pEGFPC2-ICP27。用X fect转染试剂盒将重组质粒pEGFPC2-ICP27转染至Vero细胞中,并用RT-PCR及W estern b lot-ting检测其表达情况。结果显示,ICP27基因在Vero细胞中得到正确表达。真核表达质粒pEGFPC2-ICP27的构建成功,为进一步研究ICP27对宿主细胞的影响奠定了基础。

博尔纳病病毒持续感染细胞系中病毒RNA的原位PCR检测

目的建立检测博尔纳病病毒(BDV)RNA的原位PCR方法。方法首先设计BDV特异性引物以及检测BDV-RNA的原位PCR扩增系统,然后对BDV持续感染细胞(BDV/OL)和正常细胞(OL细胞)爬片进行原位PCR扩增,进而分别用DNA酶或RNA酶消化处理BDV/OL细胞爬片后,再进行原位PCR扩增。结果经原位PCR扩增后,约60%～70%的BDV持续感染细胞核中出现了阳性反应信号,但正常细胞无信号出现,并且病毒感染细胞中的阳性信号在RNA酶消化作用下消失,但不受DNA酶作用的影响。结论该研究建立的PCR检测方法具有BDV和RNA特异性,可以应用于检测相关动物或神经精神疾病患者的脑组织中BDV-RNA,为进一步证明BDV的致病性奠定基础。

青霉素耐药对抗生素治疗肺炎链球菌感染细胞疗效的影响

目的:评价青霉素耐药对抗生素治疗肺炎链球菌感染细胞疗效的影响。方法:选取2018年3月-2019年3月间通过青霉素诱导获得耐青霉素肺炎链球菌感染患者,将其分为耐青霉素肺炎链球菌感染获得耐青霉素肺炎链球菌感染细胞模型为耐青霉素组,另将肺炎链球菌感染BEAS-2B细胞获得细胞模型为非耐青霉素组,所有模型均实施抗生素治疗,分析其两组患者细胞毒性及IL-6水平值的变化情况及两组患者治疗后不同时段对细胞毒的影响。结果:耐青霉素组患者细胞感染后12 h、24 h细胞毒性及感染后6 h、12 h、24 h IL-6水平测得均显著低于非耐青霉素组(P<0.05);耐青霉素组患者给予头孢曲松及阿奇霉素治疗后在细胞感染后24 h的细胞毒性和IL-6下降量均显著低于非耐青霉素组(P<0.05)。结论:青霉素耐药易导致抗生素治疗肺炎链球菌感染细胞的疗效下降,临床在治疗此类患者时应高度重视。

流行性出血热病毒持续感染细胞的建立

目前已知流行性出血热病毒（EHFV）对原代细胞敏感,如长爪沙鼠肾原代细胞,金黄地鼠肾原代细胞等,对传代细胞敏感的如如非洲绿河猴肾细胞（Vero-E6。）,人胚肺癌细胞(A549)等,但未见EHFV在传代细胞上呈持续感染状态,现将EHFV浙37株在地鼠肾传代细胞（BHK）上连续传代的结果报道如下。