细粒棘球蚴感染者中Tim-3^+CD4^+CD25^+Treg细胞及相关因子的表达

目的通过检测细粒棘球蚴感染者外周血中Tim-3^+CD4^+CD25^+Treg细胞及相关因子的表达水平,探讨细粒棘球蚴感染者中Tim-3与CD4+CD25+Treg细胞的关系及Tim-3+CD4+CD25+Treg细胞对该疾病持续性发展的作用。方法选取30例细粒棘球蚴感染者和30例健康对照人群,用流式细胞术检测感染组和对照组外周血中Tim-3+CD4+CD25+Treg细胞的比例变化;实时荧光定量PCR法分别检测感染组和对照组外周血单个核细胞中Tim-3和Foxp3 mRNA的表达;ELISA法检测感染组和对照组血清中IL-10和TGF-β的水平;Pearson相关法分析感染者外周血中Tim-3 mRNA的表达与Foxp3 mRNA的相关性以及Tim-3+CD4+CD25+Treg细胞与IL-10和TGF-β的相关性。结果与对照组相比,细粒棘球蚴感染组外周血中Tim-3^+CD4^+CD25+Treg细胞的比例均显著升高(P<0.001);外周血单个核细胞中Tim-3和Foxp3 mRNA水平显著升高(P<0.001);血清中IL-10(P<0.001)和TGF-β(P=0.046)水平显著升高;细粒棘球蚴患者外周血Tim-3 mRNA与Foxp3 mRNA表达水平呈正相关;Tim-3+CD4+CD25+Treg细胞与IL-10和TGF-β的水平均正相关。结论细粒棘球蚴感染者中Tim-3在CD4+CD25+Treg细胞上的过表达可能会促进CD4+CD25+Treg细胞的产生及其抑制功能的发挥,从而促使感染的持续性发展。

Tim-3/Galectin-9与Th1/Th2相关因子在人细粒棘球蚴感染中的表达研究

目的探讨人细粒棘球蚴感染中Tim-3/Galectin-9与Thl/Th2的平衡关系及其与该疾病发生、发展的关系。方法用实时荧光定量PCR法分别检测30例慢性细粒棘球蚴感染者和30例健康体检人群外周血中Tim-3、Galectin-9、T-bet和GATA-3mRNA的表达,同时用酶联免疫吸附(ELISA)法检测慢性细粒棘球蚴感染者和健康对照者血清中可溶性Tim-3和Galectin-9及IFN-γ、IL-12和IL-4的水平。结果 (1)实时荧光定量PCR检测结果显示:与健康对照组相比,感染组Tim-3和Galectin-9mRNA水平显著升高,T-bet mRNA水平显著降低,GATA-3mRNA水平显著升高。(2)ELISA检测结果显示:与健康对照组相比,感染组血清中可溶性Tim-3和Galectin-9水平显著升高,IFN-γ和IL-12水平显著下降,IL-4水平显著升高。Tim-3与Galectin-9呈正相关(P=0.000,r=0.776);Tim-3与T-bet呈负相关(P=0.000,r=-0.645);Tim-3与GATA-3呈正相关(P=0.000,r=-0.752)。结论 Tim-3/Galectin-9在人细粒棘球蚴持续性感染中发挥一定的作用,Tim-3/Galectin-9可能通过影响Th1/Th2相关的转录因子T-bet/GATA-3和细胞因子IL-12、IFN-γ和IL-4的水平变化,促进Th1/Th2细胞失衡现象的发生,从而促进感染的持续性发展。

棘球蚴感染长爪沙鼠诱发过敏反应的实验观察

[目的 ]观察棘球蚴感染长爪沙鼠诱发的过敏反应。 [方法 ]取 5 6只及 48只长爪沙鼠 ,分别腹腔接种感染细粒棘球蚴 E.g.及泡状棘球蚴 E.m.,3个月后分别用羊源新鲜囊液、羊源 E.g.粗制囊液抗原及沙鼠 E.m.抗原经腹腔注射攻击 ,观察其过敏反应。在攻击发敏前后 ,检测 Ig E抗体水平和嗜酸性粒细胞直接计数 (directeosinophilic leukocyte count,DEL C)。 [结果 ]沙鼠 E.g.和 E.m.感染率分别为 89.3%和 97.9%。各组过敏反应发生率最低为 6 2 .5 % ,最高为 10 0 %。过敏性休克发生率最低为 12 .5 % ,最高为 12 .7%。沙鼠感染 E.g.和 E.m.后 ,Ig E抗体和 DEL C水平逐渐增高 ,但攻击发敏后 Ig E抗体水平显著降低 ,DEL C显著增多。 [结论 ]E.g.和 E.m.感染沙鼠后 ,采用不同抗原攻击均可出现过敏反应或休克 ;不同抗原引起过敏反应的发生率和程度不同 ,但在感染E.g.与 E.m.沙鼠之间无显著性差异。

不同地区周期型马来丝虫感染蚴的同工酶电泳比较分析

本文应用圆盘电泳对我国七个不同地区——贵州独山、贵州荔波、四川乐山、安徽泾县、浙江安吉、湖北谷城和福建建阳的周期型马来丝虫感染蚴的七种酶进行了区带分析和此较。结果显示,七个地区马来丝虫感染蚴的GPI、G6PD、LDH、PO、EST这五种酶的同工酶型没有差异。但是,MDH和PGM各出现两种同工酶型,位于贵州省内的两个地区的结果完全相同,而与另外五个省(地区)的结果不同。

细粒棘球蚴感染对小鼠肝纤维化及炎症因子水平的影响

目的:研究细粒棘球蚴感染对小鼠肝纤维化及炎症因子水平的影响。方法:将20只小鼠随机分为对照组和感染组(每组10只),感染组小鼠腹腔注射200 m L细粒棘球蚴原头节液,感染16周,对照组不作处理。比较两组血清中肝功能指标谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)及纤维化指标层黏连蛋白(LN)、透明质酸酶(HA)水平;苏木精-伊红(HE)染色法观察肝组织形态学特征;实时荧光定量PCR(qPCR)法检测肝组织中炎症因子白细胞介素(IL)-17A、IL-6、γ干扰素(IFN-γ)、人单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA相对表达量。结果:感染组血清GOT、GPT、LN、HA水平显著高于对照组(P<0.05)。HE染色结果显示,感染组小鼠肝组织中汇管区有大量纤维组织增生。感染组小鼠肝组织中IL-17A、IL-6、IFN-γ、MCP-1和TNF-αm RNA相对表达量均显著高于对照组(P<0.05或P<0.01)。结论:细粒棘球蚴感染可导致小鼠肝纤维化的发生,感染期间炎症因子表达水平增高。

棘球蚴感染绵羊并诱发休克期间特异性IgG、IgE抗体对特异性抗原的识别

目的 探讨细粒棘球蚴(E.g.)囊液粗制抗原和B抗原(EgB)识别绵羊感染E.g.后及诱发过敏性休克期间特异性IgG和IgE抗体的特异性反应,并对抗原特性及分子量进行描述。 方法 制备E.g.囊液粗制抗原及EgB,应用免疫印迹技术检测经剖杀证实感染E.g.并诱发过敏性休克的20只绵羊血清特异性IgG和IgE抗体对两种抗原的抗体反应性,并对抗原特性和分子量进行描述。 结果 特异性IgE抗体与耐热、低分子量的EgB(8、12和16 kDa)抗原未见明显的反应条带,而与E.g.囊液粗制抗原在43 kDa处可见明显的反应条带。IgG抗体与E.g.囊液粗制抗原未见明显的反应条带,但与EgB抗原反应后在31、43和66.2 kDa处可见较为明显的反应条带。 结论 EgB可能不是特异性IgE抗体的特异性抗原,而是IgG抗体的特异性抗原。E.g.粗制囊液抗原中含有特异性IgE抗体的特异性抗原组分,其分子量大于43 kDa,可能是导致棘球蚴病患者过敏性休克的主要致敏原。

泡状棘球蚴感染大鼠排斥同种异体移植心脏的初步观察

目的 :用 SD大鼠对 Wistar大鼠心脏移植模型 ,观察大鼠感染泡球蚴后 ,免疫系统的变化对移植心脏的影响。方法 :16只健康的 SD大鼠心脏作供心 ,8只未感染泡球蚴的 Wistar大鼠及 8只感染泡球蚴的 Wistar大鼠作受者。建立 SD大鼠对 Wistar大鼠心脏移植模型。实验分组 :(1)对照组 :SD大鼠→ Wistar大鼠 (未感染泡球蚴 ) (n =8) ;(2 )泡球蚴组 :SD大鼠→ Wistar大鼠 (感染泡球蚴 ) (n =8)。 结果 :感染泡球蚴组移植心脏平均存活时间为 (11.63± 6.0 2 ) d,对照组移植心脏平均存活时间为 (6± 0 .5 3 ) d,感染泡球蚴组移植心脏存活时间较对照组移植心脏存活时间明显延长 ,两者差异有显著性 (P<0 .0 5 )。结论:泡状棘球蚴感染能造成 Th2 类细胞因子偏移 ,从而有利于同种异体移植物的存活 ,嗜酸性粒细胞的浸润可能是造成移植排斥的原因之一。

β-catenin和cyclin D1在人泡球蚴感染病灶旁肝细胞中的表达及其意义

目的探讨泡球蚴感染宿主病灶旁肝细胞中β-catenin和cyclin D1的表达及其意义。方法采用免疫组化方法检测β-catenin和cyclin D1在32例人泡球蚴感染病灶旁肝细胞中和12例对照组肝组织中的表达情况;同时检测Ki-67和p53在病灶旁肝细胞和对照组的表达情况。结果β-catenin在23例(71.8%)泡球蚴感染病灶旁肝细胞胞膜和胞质呈异常表达,对照组12例肝细胞均呈细胞膜正常表达;cyclin D1在21例(65.7%)泡球蚴感染病灶旁肝细胞胞核呈阳性,对照组12例肝细胞均呈阴性。β-catenin与cyclin D1在病灶旁肝细胞表达具有显著相关性(P<0.05);Ki-67和p53在病灶旁肝细胞分别呈34.4%(11/32)和18.8%(6/32)阳性,对照组Ki-67和p53均呈阴性。结论Wnt/β-catenin通路中关键因子β-catenin和cyclin D1在病变周围肝细胞内呈异常表达,结合组织学改变,认为泡球蚴感染宿主病灶旁肝细胞呈再生状态,部分呈异型增生改变。

泡状棘球蚴感染纯系小鼠诱导免疫耐受的实验研究

目的探讨感染泡球蚴的小鼠皮肤移植后免疫系统的变化对移植物的影响。方法采用小鼠尾部皮肤移植建立小鼠皮肤移植模型。将64只C57BL/6小鼠及64只BALB/c小鼠各随机分为4组,每组各16对小鼠,其中16只C57BL/6小鼠为供体,16只BALB/c小鼠为受体。A组:空白对照组(非同系移植不予以任何干预);B组:实验组1,以健康C57BL/6小鼠尾部皮肤移植至BALB/c小鼠(感染泡球蚴1个月后);C组:药物对照组,采用非同系移植加药物[西罗莫司(商品名:雷铂霉素)]干预,皮肤移植术后5d每日给予西罗莫司1.5mg/kg干预;D组:实验组2,以健康C57BL/6小鼠尾部皮肤移植至BALB/c小鼠(感染泡球蚴3个月后)。术后观察BALB/c小鼠尾部移植皮肤生长情况。每组留8只用于观察BALB/c小鼠术后尾部移植皮肤生存期,每组于术后3、5、7、9d4个时间点各取2只小鼠尾部移植皮片,用于观察小鼠尾部移植皮肤病理变化情况。结果 A、B、C、D组移植皮肤存活时间平均为(6.00±0.76)、(7.50±0.93)、(13.25±1.04)、(11.5±0.93)d。C组小鼠移植皮片存活时间较D组长,差异有统计学意义(P<0.05)。C、D组移植皮肤存活时间较A、B组延长,差异有统计学意义(P<0.01)。组织病理学检查:A、B组移植皮片均在术后1周左右发生明显的逐渐加重的急性免疫排斥反应,C、D组移植皮片的免疫排斥反应较A、B组轻。结论小鼠感染泡状棘球蚴后有利于同种异体移植皮片的存活,可以延长移植皮片的生存时间。该模型为研究感染泡球的免疫实验研究提供了良好的实验平台,为进一步研究泡球蚴感染后机体免疫状态的变化提供了理论依据。

内脏裂头蚴感染误诊为结核性心包炎1例

患者女,27岁.患者2个月前无明显诱因出现发热,体温最高38.5℃,伴咽痛及胸闷,无畏寒及寒战,用“退热药”体温可降至正常,伴大汗.无头痛、呕吐,无咳嗽、咳痰,无胸痛,无腹痛、腹泻,无尿频、尿急、尿痛,无皮疹及关节肌肉疼痛,无明显盗汗及消瘦,2014年5月21日曾在当地医院住院治疗,诊断“心包炎、上呼吸道感染”,予以抗感染、营养心肌、增强免疫力等对症治疗后,无明显好转,查T-spot（＋）,考虑结核性心包炎,于6月5日开始诊断性抗结核（HRE）治疗,1个月后病情无好转,为进一步诊治于7月22日入住我院.

重组抗原p29免疫保护小鼠细粒棘球蚴感染的差异长链非编码RNA的筛选研究

目的研究在筛选重组抗原p29诱导的免疫保护下细粒棘球蚴感染宿主后长链非编码RNA(lncRNA)差异分子的意义。方法将45只BALB/c小鼠随机分为空白对照组、感染组和p29免疫+感染组。p29免疫+感染组小鼠重组抗原p29免疫3次,末次免疫7周后,采用细粒棘球蚴原头蚴腹腔感染小鼠(包括感染组、p29+感染组);感染24周后,采集小鼠血液,密度梯度离心法获得外周血单个核细胞(PBMCs)。经Trizol提取总RNA后,采用Magnetic Core试剂盒构建lncRNA文库,通过HiSeq 2 000高通量测序与生物信息学方法筛选差异表达的lncRNA。最后,采用qRT-PCR验证候选lncRNA分子。结果高通量测序及生物信息学分析结果表明,与空白对照组相比,感染组小鼠PBMCs中有14个lncRNA显著差异分子(P<0.05);与感染组相比,p29+感染组外周血PBMCs细胞中有30个差异表达的lncRNA(P<0.05);进一步经qRT-PCR验证,确定XLOC-012763、INTE-015204与INTE-028446是p29+感染组的候选差异lncRNA。结论此研究筛选出p29免疫保护细粒棘球蚴感染小鼠PBMCs中的3个lncRNA差异分子,丰富了p29免疫保护理论机制,为其后续作为疫苗应用开发奠定了基础。

牛腹腔唇乳突丝虫及其感染蚴扫描电镜观察

对牛腹腔唇乳突丝虫雌性成虫及其感染蚴扫描电镜观察结果表明,成雌虫头端的口孔、角质围口环、侧唇、背腹唇、亚中乳突和头感器均清晰可见,体表为环行皮纹和纵行皱褶,尾部可见侧附肢、肛孔及尾端刺状突起物,仅极少数成雌虫尾端呈纯圆光滑样,没有突起物.感染蚴的头部基本具备了成虫头部的构造,但发育较原始,其乳交数量较成虫少,尾部可见肛孔、肛唇及一个侧乳突.

细粒棘球蚴感染小鼠肝脏模型的构建

目的通过小鼠肝被膜下注射细粒棘球蚴头节,构建细粒棘球蚴病的动物模型。方法从感染细粒棘球蚴的羊肝上提取细粒棘球蚴头节,体外用细胞培养基培养3~5 d,通过伊红染色检测其活性。将小鼠用5%水合氯醛麻醉,然后固定在手术操作台上,腹部皮肤消毒后,用消毒后的剪刀剪开皮肤。提取活性大于90%头节,用1 m L注射器注射到C57小鼠(6~8周龄,体重18~22g)的肝被膜下,然后缝合皮肤。分别在30、60、90、120、150 d提取小鼠的肝脏,将肝脏组织固定后,切片,HE染色观察炎症的基本病理变化,天狼猩红染色观察胶原纤维在病灶组织的增生情况。结果造模60只小鼠,成功率达95%。病理切片观察到30 d肝脏组织出现大量淋巴细胞的浸润和疏松的胶原纤维增生,随着感染时间的延长,淋巴细胞浸润减少,多核巨细胞和上皮样细胞增多,胶原纤维增多并且致密化。结论本实验构建的动物模型可用于构建细粒棘球蚴病的动物模型,为研究细粒棘球蚴病的治疗奠定基础。

泡球蚴感染过程中宿主CD_4^+细胞凋亡和凋亡相关基因转录水平的研究

目的 为了探讨泡球蚴感染宿主CD+ 4 淋巴细胞缺失的机制 ,以及泡球蚴感染与宿主CD+ 4 淋巴细胞凋亡及凋亡相关基因转录水平的相关性。方法 利用尼龙柱和补体法从泡球蚴感染 12周 ,2 5周和正常对照组BALB/c小鼠脾脏分离出纯CD+ 4 ,CD+ 8细胞 ,在体外分别经EmAg ,anti-CD3 ,IL - 2 ,TNFα ,PWM刺激培养 16h ;Tunel和PI双染后 ,FCM分析凋亡细胞数 ;并用C -myc ,TGF - β ,bcl- 2cDNA探针检测感染 2 5周EmAg诱导CD+ 4 细胞的凋亡相关基因转录水平。结果 FCM分析 ,感染 12周组CD+ 4 ,CD+ 8细胞凋亡数同正常对照组无明显差别 (P >0 0 5 ) ,感染 2 5周组CD+ 4 细胞凋亡数较正常对照组显著增高 (P <0 0 1) ,也显著性高于同组CD+ 8细胞 (P <0 0 1)。CD+ 4 细胞内C -myc,TGF - βmRNA水平较正常对照组显著升高 (P <0 0 5 ) ,而bcl- 2mRNA水平则减弱 (P <0 0 5 )。结论 泡球蚴寄生宿主后期 ,可诱导宿主成熟T细胞中CD+ 4 细胞发生凋亡 ,使宿主处于免疫抑制状态。凋亡的形成与凋亡信号增加 ,抑制信号减弱所引起。