5-HD对慢性低氧肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌PKC-ɑ表达的作用

目的:研究线粒体ATP敏感钾通道(mitoKATP)抑制剂5-羟基癸酸盐(5-HD)对慢性低氧肺动脉高压大鼠的影响及其潜在机制。方法:雄性SD大鼠48只,随机分成4组(n=12):①正常对照组;②慢性低氧组;③慢性低氧+5-HD组;④慢性低氧+Diazoxide(mitoKATP开放剂)组;除正常对照组外,其余3组置于氧舱内(氧浓度10%±0.3%),每天低氧8 h,并接受不同的干预,共4周。干预结束后右心导管法测各大鼠肺动脉压,RT-PCR和Westernblot检测各组大鼠肺动脉PKC-ɑ蛋白和mRNA的表达。结果:①慢性低氧组肺动脉压显著高于正常组(P<0.01),同时慢性低氧+Diazoxide组与慢性低氧+5-HD组肺动脉压较慢性低氧组显著减低(P<0.01)。②慢性低氧组PKC-ɑ蛋白及mRNA的相对表达显著高于正常组(P<0.05)。结论:5-HD对慢性低氧肺动脉高压起保护作用,其机制可能是抑制线粒体ATP敏感钾通道。

补肺益肾活血法对慢性低氧性肺动脉高压大鼠血管活性物质的影响

目的探讨补肺益肾活血法治疗肺动脉高压的作用机制。方法取健康SD大鼠40只,随机分为空白对照组、模型组、中药芪葶合剂组、卡托普利组。各组动物在同等条件下饲养,将后3组大鼠放入常压缺氧箱内缺氧造模4w,各组分别用等量生理盐水、芪葶合剂及卡托普利溶液灌胃。4w之后用右心导管法检测大鼠肺动脉平均压(mPAP)、颈动脉平均压(mCAP);用放免法检测内皮素(ET-1)、血栓素(TXB2)。结果芪葶合剂组、卡托普利组与模型组比较肺动脉平均压降低,而颈动脉平均压则无明显变化。芪葶合剂组、卡托普利组肺组织中ET-1和TXB2水平下降(P<0.05或P<0.01)。结论芪葶合剂能降低肺组织中ET-1和TXB2含量,改善肺动脉高压。

慢性低氧性肺动脉高压鼠原代培养肺动脉平滑肌细胞内钙的检定

用共聚焦激光扫描显微镜观察经Ｆｌｕｏ－３／ＡＭ负荷的慢性低氧性肺动脉高压（ＨＰＨ）大鼠原代培养的肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）的形态与内游离Ｃａ２＋浓度的动态变化。结果表明：原代培养的（ＨＰＨ）大鼠的ＰＡＳＭＣ与正常大鼠相比，①细胞内游离Ｃａ２＋浓度增加，但其收缩性减弱；②随培养日数增加，咖啡因（Ｃａｆｅｉｎ）所致的细胞内储钙池－肌浆网的Ｃａ２＋释放作用逐渐减弱，直至消失；③血管紧张素Ⅱ（ＡＴ－Ⅱ）升高细胞内钙作用明显增强；④部分呈大红色细胞对多种缩血管物质敏感性增强。结果提示，ＨＰＨ大鼠的ＰＡＳＭＣ的内钙明显增加，其调节机制处于紊乱状态。

慢性低氧性肺动脉高压大鼠内源性一氧化氮代谢及其外源性吸入的研究

目的 :研究一氧化氮 (NO)在大鼠慢性低氧性肺动脉高压发生发展中的代谢变化 ,观察外源性吸入NO对肺血流动力学的疗效。方法 :6 7只SD雄性成年大鼠 ,随机分为 7组 :常氧对照组 (n =9) ,慢性间断性低氧 (6h d ,7d 周 ) 1周组 (n =7) ,低氧 2周组 (n =11) ,低氧 3周组 (n =11) ,L -NAME(NO合成酶抑制剂 ,30mg kg ,灌饲 )处理组 (n =10 ) ,L -Arg (NO合成前质 ,10mg kg ,灌饲 )处理组 (n =9) ,NO吸入 (0 0 0 0 4% ,2 0min)组 (n =10 )。插管测肺动脉平均压 (MPAP) ,分离右心室 (R)、室间膈 +左心室 (S +L) ,计算R (S +L) (g g)和R Wt(Wt:体重 ,g kg)。结果 :①低氧 1周组MPAP显著高于对照组 [(3 2± 0 3)kPavs (1 8± 0 3)kPa],低氧 2周时更高 ,R (S +L)和R Wt也显著高于对照组 ;②血浆NO-2 NO-3含量在低氧 2周组显著高于对照组 [(34 0± 11 7) μmol Lvs (19 4± 8 5 ) μmol L],而在低氧 3周组显著低于低氧 2周组和低氧 1周组 ;低氧 1周 ,血浆ET - 1含量显著高于对照组 ,血浆ET - 1含量与MPAP和R (S +L)均呈显著正相关 ,r分别为 0 43和 0 46 ,P值均 <0 0 1;③L -NAME组大鼠血浆NOˉ2 NOˉ3含量降低 33 2 % ,R (S +L)显著增加 15 2 % ,P <0 0 5 ;④L -Arg组大鼠血浆NO-2 NO-3含量和PAPM无显著?

丹参治疗慢性低氧性肺动脉高压的疗效观察

慢性低氧性肺动脉高压（CHPH）是大部分慢性阻塞性肺疾病（COPD）发展成肺源性心脏病而死亡的原因。因此通过治疗逆转或延缓病程会提高患者的生存时间及生存质量。笔者在综合治疗的基础上加用丹参粉针剂治疗CHPH患者63例,在改善患者的临床症状及低氧状态、血液流变学上取得了良好效果。

VEGF和PCNA在慢性低氧性肺动脉及高压大鼠主动脉、肺动脉平滑肌细胞中表达

目的：研究慢性低氧性肺动脉高压（PAH）发生过程中，血管内皮生长因子（VEGF）及细胞核增殖抗原（PCNA）在体循环血管、肺循环血管平滑肌细胞中的表达。方法：利用低压缺氧舱建立大鼠缺氧性肺动脉高压模型。实验分为3组：即正常氧组、缺氧2wk组和缺氧3wk组。用免疫组化染色和图像分析，检测主动脉、肺动脉主干及肺内小动脉平滑肌细胞中VEGF及PCNA的表达量。

慢性低氧通过上调Skp2的生成而减少p27在大鼠肺动脉的表达

目的 研究慢性低氧对细胞周期抑制蛋白p27及S期蛋白相关激酶2的影响,探讨低氧性肺动脉高压的机制.方法 复制慢性低氧性肺动脉高压大鼠模型,将大鼠分为常氧对照组（Normoxia）和低氧模型组（Hypoxia）两组.待模型复制完毕后,测定大鼠RVPSP和RV/LV＋S,然后进行组织病理分析,测定MA%和MT%.利用Western-blot实验和RT-PCR实验检测p27、Skp2蛋白及RNA水平的变化.结果 慢性低氧显著增加大鼠RVPSP、RV/LV＋S、MA%和MT%,引起大鼠肺动脉压力增高、右心室肥厚和肺中小动脉中膜增厚及外膜增生.Western-blot实验发现,低氧组大鼠肺动脉中p27蛋白表达显著减少,Skp2蛋白表达上调.结论 慢性低氧导致Skp2表达升高,p27表达减少.p27表达减少而对平滑肌细胞抑制作用减弱,进而导致细胞增殖.因此,把p27或Skp2作为靶点可能为治疗低氧性肺动脉高压提供新的思路.

姜黄素改善慢性肺动脉高压肺血管重塑作用途径的研究

目的：探究姜黄素改善慢性低O2高CO2大鼠肺动脉高压肺血管重塑作用途径的研究。方法：建立慢低O2高CO2肺血管重塑模型，以24只雄性大鼠为受试对象，随机分为四组（n=6）：I组（常氧空白对照组），Ⅱ（低O2高CO2模型组），Ⅲ组（色甘酸钠对照组），Ⅳ组（姜黄素实验组）。将后3组动物放入常压低O2高CO2舱中，吸入O2浓度8％～11％，CO2浓度3％～5％，每天8h，每周6d，连续4周，Ⅲ组给予色甘酸钠以20mg／kg体重腹注射处理，Ⅳ组给予姜黄素混悬液按150mg/kg体重灌胃处理。光镜下、透射电镜下观察肺动脉血管壁及其周围大细胞超微结构形态学改变，甲苯胺蓝染色法和免疫组织化学法对肺动脉周围的肥大细胞及其脱颗粒状态进行性定量测定。结果：①电镜下，Ⅱ组肺细小动脉中膜平滑肌增生，外膜胶原纤维密集，内弹力板扭曲，内皮细胞起，血管外肥大细胞内颗粒减少，胞膜不完整；光镜下，Ⅱ组相比1组肺细小动脉管腔／管总面积（WA／TA）明显升（P〈0．05）、管腔／管总面积（EA／TA）明显降低（P〈0．05），甲苯胺蓝染色肥大细胞细胞数（NMC）、肥大细胞脱颗率（DR）及免疫组化检测类胰蛋白酶阳性细胞数（TBS）高于I组（P〈0．05）；②干预后，电镜下，Ⅲ组、Ⅳ组血管结基本正常，平滑肌增生及胶原增生较Ⅱ组轻，肥大细胞膜完整；光镜下，两干预组相比Ⅱ组WA／TA明显降低（P〈0．05）、ET／TA明显升高（P〈0．05），甲苯胺蓝染色NMC、DR、TBS阳性细胞数分别低于Ⅱ组（P〈0．05）。结论：姜素可通过Mc途径抑制慢性低O2高CO2导致的大鼠肺血管重塑改变。

内皮素对大鼠肺动脉平滑肌细胞膜钾通道的影响

目的 观察内皮素 (ET 1)对大鼠肺动脉平滑肌细胞 (PASMCs)膜电压门控钾通道 (KV)的作用。方法 用全细胞膜片钳记录方法研究ET 1对膜电位 (Em)、膜电容 (Cm)、电压门控钾电流 (IKV)的影响。结果 ET 1可引起PASMCs去极化 ,并抑制IKV,抑制IKV 时间明显早于其对Em 变化的影响 ,ET 1对IKV 的影响呈可逆性和浓度依赖性 ,在有钙的环境中 ,ET 1对IKV 峰电流的抑制率明显高于无钙时。结论 ET 1可浓度依赖性的抑制IKV ,使常氧大鼠PASMCs去极化 ,且ET 1对IKV 的抑制作用早于对Em 的影响 ,这些作用不完全依赖于钙的参与 ,但钙可加强ET 1对IKV 的抑制作用。

L-精氨酸脂质体对慢性低氧高二氧化碳大鼠一氧化氮及其合酶基因表达的影响

目的 :探讨L 精氨酸脂质体 (L Arg)对慢性低氧高二氧化碳大鼠一氧化氮代谢及内皮型一氧化氮合酶基因(ecNOSmRNA)表达的影响。方法 :将 4 0只健康雄性SD大鼠随机分为 4组 ,正常对照组 (NC组 ) ,低氧高二氧化碳 4周组 (HH组 ) ,低氧高二氧化碳加L Arg4周组 (HL组 )和低氧高二氧化碳加L Arg脂质体 4周组 (HP组 )。采用硝酸还原酶法测定血浆一氧化氮代谢产物 (NOx-)含量 ,组织原位杂交、光镜和图像分析等方法观察肺细小动脉显微结构以及肺细小动脉ecNOSmRNA的表达变化。结果 :①HH组mPAP和RV/ (LV +S)高于NC组 ,HP组均明显低于HL组与HH组 ;②HH组的血浆NO含量显著低于NC组 (P <0 .0 1) ,HL组与HP组均明显高于HH组(P <0 .0 1) ;③HH组的肺细小动脉ecNOSmRNA的平均吸光度值低于NC组 (P <0 .0 5 ) ;而HP组明显高于HH组和HL组 (P <0 .0 1) ;④HP组的肺细小动脉管壁面积 /管总面积比值 (WA/TA)和中膜厚度 (PAMT)均明显低于HH组 (P <0 .0 1) ,且低于HL组 (P <0 .0 5 )。结论 :L Arg脂质体较L Arg有更明显的降低慢性低氧高二氧化碳大鼠肺动脉压和减轻肺血管重建的治疗作用 ,其机制可能与L Arg脂质体促进L Arg的跨膜转运有关。

ATP钾通道开放剂对大鼠慢性低氧性肺动脉高压的作用

目的 研究ATP敏感性钾通道开放剂左旋克罗卡啉 (levcromakalim )和克罗卡啉(cromakalim)对慢性低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞钾通道 (KATP)和低氧性肺动脉高压的作用。方法 90只Wistar大鼠随机分为正常对照组 (15只 )和低氧组 (75只 )。应用膜片钳技术 ,在对称性高钾溶液中 ,将急性分离的大鼠肺动脉平滑肌细胞的内面向外式膜片上 ,分离出ATP敏感性KATP电流。应用右心插管技术 ,测定给药前、后大鼠平均肺动脉压 (mPAP)。结果 慢性低氧 3周大鼠肺动脉平滑肌细胞KATP通道活性与正常组大鼠比较无明显变化。但钾通道开放剂levcromakalim和cromakalim可明显激活慢性低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞KATP电流。给低氧大鼠静脉注射levcromakalim和cromakalim ,可对其mPAP产生剂量依赖性的降压作用 ,而对平均体动脉压也有一定的降低作用。结论 虽然KATP可能没有直接参与大鼠慢性低氧性肺动脉高压的产生 ,但levcromakalim和cromakalim可通过激活KATP通道而拮抗低氧对其它钾通道的抑制作用 。

长期应用左旋精氨酸对慢性低氧肺动脉平滑肌细胞钾通道的作用

目的 探讨长期应用左旋精氨酸 (L Arg)对慢性低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)膜钾通道的作用 ,为慢性低氧性肺动脉高压的防治手段提供理论依据。方法 雄性Wistar大鼠 18只 ,每组 6只 ,随机分为三组 :生理盐水对照组 (A组 )、慢性低氧组 (B组 )和慢性低氧 +L Arg组 (C组 )。单个大鼠的PASMC获得采用急性酶分离法 (胶原酶Ⅰ型和木瓜蛋白酶 )。用全细胞膜片钳技术测定三组PASMC的静息膜电位 (Em)、电压门控钾通道 (Kv通道 )电流和钙激活钾通道 (KCa通道 )电流。结果 (1)B组大鼠PASMC的静息膜电位为 (- 31± 8)mV ,A组为 (- 4 2± 5 )mV ,两组比较差异有显著性 (P <0 0 1)。C组大鼠PASMC的静息膜电位为 (- 39± 4 )mV ,与B组比较差异有显著性 (P <0 0 5 )。(2 )对Kv通道 (在 +5 0mV电压刺激时峰值电流 ) :B组大鼠PASMC的峰值电流为 (6 2± 5 )pA/pF ,A组为 (12 1± 9)pA/pF ,两组比较差异也有显著性 (P <0 0 1)。C组大鼠PASMC的峰值电流为 (95± 3)pA/pF ,与B组比较差异也有显著性 (P <0 0 0 1)。 (3)对KCa通道 (+5 0mV电压刺激时的峰值电流 ) :B组大鼠PASMC的峰值电流为 (74 7± 4 1)pA/pF ,A组为 (5 3 6± 5 9)pA/pF ,两组比较差异有显著性 (P <0 0 5 )。应用L Arg后 。

肾上腺髓质素m RNA在慢性缺氧大鼠右心室中的表达

目的 :探讨肾上腺髓质素 (AM)在慢性低氧性肺动脉高压发病中的作用。方法 :16只大鼠随机分为低氧组和对照组 ,间断常压低氧 14d复制肺动脉高压模型 ,静脉右心导管测定右室收缩压 (RVSP)的变化 ,分离心室检测右室 / (左室 +室间隔 ) (RV/LV +SP)比值 ,原位杂交法检测AMmRNA在右心室中的表达。结果 :低氧组大鼠右室压为 (6 3 6 3± 3 4 2 )mmHg ,显著高于对照组的 (34 13± 3 4 0 )mmHg(P <0 0 1)。低氧组大鼠 (RV/LV +SP)比值为0 4 39± 0 0 39,显著高于对照组的 0 2 3± 0 0 2 5 (P <0 0 1)。AMmRNA在对照组大鼠的右室心肌细胞也有少量表达 ,低氧组大鼠其表达显著多于对照组。图像分析表明 ,低氧组的平均吸光度、平均表达面积分别为 0 10 6 1± 0 0 188,0 14 2 1± 0 0 16 5 ,均显著高于对照组的 0 0 872± 0 0 171,0 0 96 7± 0 0 135。结论 :低氧时右心室AMmRNA表达增加 ,提示可能在肺动脉高压的发病中起保护作用。

丹参酮ⅡA磺酸钠通过骨形态发生蛋白4介导下调慢性低氧诱导升高的大鼠肺动脉平滑肌细胞中活性氧水平

目的探讨丹参酮ⅡA磺酸钠（STS）是否通过骨形态发生蛋白4（BMP4）降低慢性低氧诱导升高的肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）中活性氧（ROS）水平，并最终达到治疗慢性低氧性肺动脉高压（CHPH）的作用。方法30只SD大鼠按随机数字法分为常氧对照组、CHPH组和CHPH＋STS组。CHPH模型成功建立后，采用右心室测压法检测大鼠右心室收缩压（RVSP）并计算右心肥厚指数ERV／（LV＋S）]；Western blot法检测远端肺动脉平滑肌组织（PA）中前体和成熟BMP4的表达；收集各组PA，胶原酶消化法培养大鼠原代PASMCs，72h后用流式细胞术检测各组PASMCs中ROS水平。结果与常氧对照组相比，CHPH组大鼠RVSP及RV／（LV＋S）分别升高至（55．74±4．95）mmHg（1mmHg=0．133kPa）和（0．48±0．021），差异具有统计学意义（t=-24．03、-34．28，P值均〈0．05）；而CHPH＋STS组RVSP及RV／（LV＋S）分别为（36．28±5．65）mmHg和（0．37±0．021），表明STS可有效降低CHPH大鼠模型中RVSP和RV／（LV＋S），差异具有统计学意义（t=-16．26、-17．34，P值均〈0．05）。CHPH大鼠模型组PA中前体、成熟BMP4于常氧对照组的相对表达量分别为（157．09±29．33）％、（196．14±62．13）％；而CHPH＋STS组PA中前体、成熟BMP4于常氧对照组的相对表达量分别为（101．13±16．46）％、（88．21±19．51）％，结果显示STS可显著下调缺氧诱导升高的BMP4，差异具有统计学意义（t=3．10、-3．09，P值均〈0．05）。常氧对照组PASMCs中ROS水平为（29．4±1.90）％，CHPH大鼠模型组ROS水平为（55．00±6．41）％，慢性低氧诱导PASMCs中ROS升高，差异具统计学意义（t=-16.11，P〈0．05）；而CHPH＋STS组ROS水平为（35．07±3．69）％，STS可下调慢性低氧诱导增加的PASMCs中ROS水平，差异具有统计学意义（t=8．53，P〈005）。结论STS显著降低CHPH模型大鼠的RVSP、RV／（LV＋S）和PA中前体和成熟BMP4蛋白表达，其机制可能与其下调PASMCs中ROS水平有关。

丹参酮ⅡA磺酸钠抑制肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌经典瞬时受体电位蛋白的表达

本研究旨在研究丹参酮ⅡA磺酸钠（sodiumtanshinoneⅡAsulfonate，STS）对慢性低氧性肺动脉高压（CHPH）模型及野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠模型中右心室收缩压（RVSP）、有心室肥厚指数、肺组织病理学、远端肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）中细胞内基础钙浓度和钙池操纵性钙内流（SOCE）、PASMCs中经典瞬时受体电位（TRPC）通道蛋白1，6的mRNA和蛋白水平的影响，从而探讨STS对肺动脉高压的治疗作用及其机制。肺动脉高压靶向药物常伴有明显的不良反应，费用昂贵，且疗效有限，因而临床上急需更经济有效的新型药物用于肺动脉高压的治疗。