miR-132-3p靶向调节Ptch1减轻慢性压迫性神经损伤小鼠神经性疼痛

背景:神经病理性疼痛的发病机制复杂,病理过程繁多,miR-132在神经病理性疼痛传导通路中异常表达,影响疼痛的发生、发展过程。目的:探讨miR-132-3p在慢性压迫性神经损伤小鼠神经性疼痛中所发挥的作用及机制。方法:①小鼠小胶质细胞BV2经100μg/L脂多糖刺激建立活化模型,采用Western blot检测小胶质细胞激活标记物IBA1的表达,RT-qPCR检测miR-132-3p的表达。将miR-132-3p mimic或inhibitor分别转染至BV2细胞,采用Western blot检测IBA1以及P2X4R的表达。预测并验证miR-132-3p的靶向调节作用,将Ptch1表达载体pcDNA-Ptch1或si-Ptch1转染BV2细胞24 h后用脂多糖刺激培养24 h,采用Western blot检测IBA1、P2X4R以及Shh信号通路标记蛋白的表达。BV2细胞共转染miR-132-3p-mimic和pcDNA-Ptch124 h后用脂多糖刺激培养24 h,采用Western blot检测上述蛋白的表达。②30只C57BL/6小鼠随机分为对照组(n=6),假手术组(n=6),模型组(n=6),NC-mimic组(n=6),miR-132-3p-mimic组(n=6),后两组经鞘内注射NC-mimic和miR-132-3p-mimic,检测各组小鼠机械缩足反射阈值和热阈值,行为学检测后取背根神经节,采用RT-qPCR检测miR-132-3p的表达,Western blot检测Ptch1、P2X4R和Shh通路标记蛋白的表达,进一步验证miR-132-3p在慢性压迫性神经损伤小鼠神经性疼痛中发挥的作用及机制。结果与结论:①与对照组比较,脂多糖刺激促进BV2细胞的激活(P<0.05),下调miR-132-3p的表达(P<0.05);②miR-132-3p通过靶向调节Ptch1抑制Shh信号通路的激活,并进一步抑制BV2细胞的激活以及P2X4R的表达,过表达Ptch1可以逆转miR-132-3p-mimic的作用(P<0.05);③成功建立慢性压迫性神经损伤模型,与注射NC-mimic组相比,鞘内注射miR-132-3p-mimic下调Ptch1的表达(P<0.05),抑制Shh信号通路的激活(P<0.05),减少P2X4R的表达(P<0.05),并显著提高慢性压迫性神经损伤小鼠的机械缩足反射阈值和热阈值(P<0.01);④结果表明,miR-132-3p通过靶向调节Ptch1抑制Shh信号通路的激活,减轻慢性压迫性神经损伤小鼠的神经性疼痛。

慢性压迫性神经损伤大鼠中透明质酸合成变化及其在神经源性疼痛中的作用

慢性神经源性疼痛由于其发病机制尚不完全明确,目前还没有十分有效的治疗手段;神经损伤后炎症反应和免疫调节机制在疼痛的发生中发挥着重要作用,透明质酸(HA)近来被认为是炎症和免疫调节中一个重要的调节分子。为了进一步研究HA是否参与到神经损伤后的病理过程中,我们检测了慢性压迫性神经损伤(CC I)大鼠损伤神经的HA含量。结果显示:与正常神经比较,HA的含量在损伤后7 d明显增加,HA合成酶(HAS)的表达也明显上调。4-甲基伞形酮(4-MU)是HAS的一种抑制剂,我们通过给予4-MU抑制HA的合成,研究HA在慢性神经源性疼痛中的作用,发现给药组CC I大鼠损伤足对热痛刺激的敏感性低于未给药组,同时IL-1β的表达量低于未给药组。以上结果提示HA可能通过对炎症因子的调控参与到损伤后的疼痛机制中,这一结果将有助于慢性神经源性疼痛的治疗。

郁金提取物对慢性压迫性神经损伤大鼠镇痛效果及脊髓P2X4R表达的影响

目的：探讨不同剂量郁金提取物对慢性压迫性神经损伤（CCI）大鼠痛阈及脊髓P2X4R表达的影响。方法：建立CCI大鼠模型,将SD大鼠分为正常组,模型组,郁金提取物低、中、高剂量组,加巴喷汀组和溶媒组,对各组大鼠进行机械缩足阈值测定,采用蛋白免疫印迹法检测大鼠L4~L6脊髓中P2X4R表达。结果：1与正常组相比,造模后大鼠机械痛阈值显著下降（P〈0.05）,说明神经病理性模型造模成功;与溶媒组相比,高剂量组和加巴喷汀组显著上调CCI模型大鼠机械痛域值（P〈0.05）。2造模后大鼠L4~L6脊髓的中P2X4R表达灰度值与内参的比值成上升趋势,均较正常组显著增加（P〈0.05）;与溶媒组相比,高剂量组和加巴喷汀组能显著降低L4~L6脊髓的中P2X4R的表达（P〈0.05）。结论：高剂量郁金提取物可能通过降低CCI模型大鼠脊髓的中P2X4R而发挥抗神经病理性疼痛的作用。

电针对慢性坐骨神经压迫性损伤大鼠神经病理学及背根神经节P2X_3受体表达的影响

目的:观察EA对CCI大鼠坐骨神经组织病理学及DRG P2X3受体表达的影响,探讨电针对神经组织学的影响及P2X3受体在电针镇痛效应中的作用。方法:将32只成年雄性SD大鼠,分为假模组、模型对照组、健侧EA组、患侧EA组,每组8只,模型对照组及EA组结扎坐骨神经造成CCI疼痛模型。各组于术前(0天)及术后3、57、1、01、2、14天分别测量大鼠患侧足MWT和TWL,EA组于术后第8天电针"足三里"-"阳陵泉"连续7天,每天1次。术后14天对坐骨神经标本行组织学观察,采用Estebe评分方法行组织学评分,免疫荧光组织化学检测患侧L5背根神经节中P2X3受体的表达情况。结果:与术前比较,CCI各组大鼠痛阈明显降低,出现痛觉过敏(P<0.01),而电针干预后EA组较CCI模型组痛阈明显增加(P<0.05)但仍低于假模组。各组大鼠坐骨神经组织学观察无明显差异,各组评分差异无统计学意义(P>0.05)。术后14天EA组较模型对照组患侧DRG L5中P2X3受体表达显著减少(P<0.05),并且患侧EA组较健侧EA组减少明显。结论:电针对坐骨神经压迫性损伤的镇痛效果可能是通过抑制大鼠DRG中P2X3受体的表达产生作用;患侧电针较健侧电针镇痛效果明显;电针后坐骨神经未见明显的病理组织学改变。

电针“足三里”、“阳陵泉”穴对坐骨神经慢性压迫性损伤大鼠脊髓背角酪氨酸激酶B受体的影响

目的:观察电针治疗后,坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)大鼠行为学变化与脊髓背角酪氨酸激酶B(Trk B)受体的表达情况,探讨Trk B受体是否参与电针镇痛。方法:大鼠随机分为4组:正常组、假模组、模型组、电针组,电针组于术后7 d开始电针"足三里"、"阳陵泉"穴。各组于术前及术后3、5、7、10、12、14 d分别测量患侧足机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL)的表达,术后14 d处死大鼠取L4~6脊髓段用免疫组化检测Trk B受体表达。结果:与假模组相比,CCI模型组痛阈明显降低,电针组MWT和TWL值相对于模型组有所提高(P<0.001),且术后14 d电针组较模型组L4~6脊髓背角中Trk B受体表达明显减少(P<0.05)。结论:脊髓背角Trk B受体可能参与了大鼠神经病理性疼痛的产生和维持,电针可能是通过减少大鼠脊髓中Trk B受体的表达产生镇痛作用。

坐骨神经慢性压迫性损伤大鼠相应脊髓背角神经元K_(ATP)通道表达的变化

目的探讨脊髓背角神经元KATP通道（ATP-sensitive potassium channel）在慢性神经病理性疼痛所致机械痛觉超敏中的作用。方法雄性SD大鼠（体重250-350 g）,随机分为两组：坐骨神经慢性压迫性损伤组（chronic constric-tion injury,CCI组）6只,假手术组（sham组）6只。在术前1 d、术后1、5、10、14 d分别测量各组大鼠机械缩足阈值（me-chanical withdrawal threshold,MWT）的变化,于第14天行灌注固定,取腰段脊髓切片后行KATP通道的免疫组织化学染色,观察各组大鼠腰段脊髓背角神经元KATP通道免疫组织化学染色后积分光密度（IOD）值的变化。结果坐骨神经慢性压迫性损伤模型大鼠自术后第5天起出现明显的机械性异常性疼痛,持续到术后14 d;而假手术组无明显痛觉过敏表现。术后14 d,坐骨神经慢性压迫性损伤模型组大鼠腰段脊髓背角神经元KATP通道IOD值与假手术组比较明显下降,差异有统计学意义。结论 KATP通道在脊髓背角神经元表达的改变可能与神经病理性疼痛所致机械痛觉超敏的发生机制相关,KATP通道可能成为治疗这类疼痛的靶点。

ANA-12在大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤中对星形胶质细胞活化和自噬的作用

目的探究ANA-12在大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤(chronic constriction injury,CCI)中对星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)活化和LC3B自噬水平的作用,为ANA-12在坐骨神经慢性压迫性损伤中的应用提供新的见解。方法18只大鼠随机分为3组:假手术组、坐骨神经慢性压迫性损伤大鼠模型组(CCI组)和ANA-12组(坐骨神经慢性压迫性损伤大鼠+ANA-12干预组),每组6只。大鼠麻醉后,通过外科手术建立大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤模型,并给予ANA-12腹腔注射持续处理14 d。于CCI诱导后第0、3、5、7、14天测定机械性反射阈值(MWT)和热收缩潜伏期(TWL)。动物处死后取脊髓组织做GFAP和LC3B免疫荧光表达检测。结果与假手术组相比,CCI大鼠的术后MWT和TWL值显著降低(P<0.05),脊髓组织星形胶质细胞活化和LC3B表达水平显著升高(P<0.05)。ANA-12治疗促进了CCI大鼠术后MWT和TWL值的恢复(P<0.05),抑制了脊髓组织星形胶质细胞活化但促进了LC3B的表达(P<0.05)。结论ANA-12治疗改善了大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤的机械和热缩足痛阈值,可能与抑制星形胶质细胞活化和促进LC3B的自噬作用有关。

电针足三里对坐骨神经慢性压迫性损伤大鼠脊髓背角ERK1/2蛋白表达的影响

目的观察电针足三里对坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)模型大鼠ERK1/2蛋白表达的影响,探讨镇痛可能的效应机制。方法将成年雄性SD大鼠进行热痛阈筛选并选取24只,随机分为空白组、模型组、电针后即刻组、电针后0.5 h组,每组各6只。采用坐骨神经结扎法建立CCI大鼠模型,电针组于造模后第7天进行电针双侧足三里,空白组、模型组同样固定,不进行任何处理,电针相应时间后处死大鼠。观察各组大鼠干预前后热痛阈值以及脊髓腰膨ERK1/2蛋白的表达。结果与空白组相比,模型组的大鼠热痛阈明显降低(P<0.05),电针后0.5 h组大鼠脊髓背角的ERK1/2蛋白表达显著下降(P<0.05);与模型组比较,电针后0.5h组大鼠的热痛阈及脊髓背角ERK1/2蛋白表达明显改善(P<0.05)。结论电针可能通过抑制脊髓背角ERK1/2的表达对CCI模型大鼠发挥镇痛作用,以电针后30min的镇痛效果最为显著。

坐骨神经压迫性损伤大鼠背根神经节NaN/SNS2钠通道表达的变化

目的 :观察电压门控钠通道NaN /SNS2在大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤 (chronicconstric tioninjury ,CCI) 14天后的变化 ,探讨慢性神经痛的发生机制。方法 :以逆转录多聚酶链反应(RT PCR)半定量分析CCI后大鼠背根神经节 (Dorsalrootgamglion ,DRG)钠通道NaN/SNS2转录物的变化 ,以及全细胞膜片钳技术记录CCI对急性分离大鼠背根神经节TTX R钠电流的影响。结果 :CCI术后 14天 ,感觉神经元特异性的TTX R钠通道转录物NaN/SNS2下调 ,与对照组相比 ,下降了大约 30 % ,TTX R钠电流密度明显减弱 ,但不影响其激活与稳态失活。其激活曲线的V1/2 分别为 - 2 6 .6 378mV、- 2 6 .6 30 6mV ,k为 6 .786 4mV、6 .732 3mV ;失活曲线的V1/2 分别为 -35 .5 84 4mV、- 37.2 188mV ,k为 8.2 792mV、8.4 6 47mV。结论 :钠通道NaN/SNS2与慢性神经痛后初级感觉神经元过度兴奋有关。

大鼠坐骨神经慢性压迫对前扣带皮层中星形胶质细胞激活和白介素1表达的影响

目的:探讨坐骨神经慢性压迫对前扣带皮层中星形胶质细胞激活和白介素1表达的影响。方法:松结扎大鼠右侧坐骨神经。在手术后不同时间点,用行为学方法测定双侧后爪热痛敏和机械痛的变化;取前扣带皮层蛋白,用WesternBlot方法测定星形胶质细胞标记物GFAP和白介素1β的表达。结果:坐骨神经结扎术后12小时即出现明显的热痛觉过敏和机械痛,14天达到高峰,到24天仍未恢复。前扣带皮层中星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和细胞因子白介素1β表达在术后两天出现增高,维持到14天,24天恢复正常。结论:前扣带皮层可能通过胶质细胞和细胞因子参与对慢性坐骨神经疼痛的调节。

损伤性C类初级感觉神经元膜上唾液酸对其兴奋性的影响

目的:研究坐骨神经损伤后,大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)C类初级感觉神经元膜表面唾液酸含量变化对其电生理特性的影响。方法:制作大鼠慢性压迫性神经损伤(chronic constriction injury,CCI)痛觉模型,以正常大鼠为对照,采用胞内电生理记录法检测损伤及正常C类神经元的电生理特性,随后用Ca^(2+)去中和损伤及正常C类神经元膜表面唾液酸所带负电荷或用唾液酸酶(neuraminidase,NA)分解膜表面唾液酸,观察电生理特性的变化。结果:损伤性C类神经元的静息电位(rest potential,RP)较正常C类神经元移向去极化方向,诱发动作电位(action potential,AP)发生率增加,所需阈强度减小,兴奋性增加;使用Ca^(2+)和唾液酸酶使损伤性C类神经元膜电位向超极化方向移动,诱发AP所需阈强度增加,兴奋性降低。而Ca^(2+)和唾液酸酶对正常C类神经元的电生理特性及兴奋性无影响。结论:损伤C类神经元膜表面唾液酸含量增加,导致其RP去极化且兴奋性增加。

右美托咪定对大鼠坐骨神经阻滞及LRRC4/SDF-1/CXCR4信号通路的影响

目的:研究右美托咪定对大鼠坐骨神经阻滞及富含亮氨酸重复序列C4蛋白(LRRC4)/基质细胞衍生因子1(SDF-1)/CXC趋化因子受体4(CXCR4)信号通路的影响。方法:取60只Wistar大鼠构建坐骨神经慢性结扎损伤(CCI)模型,以随机数字表法分为5组:模型组、右美托咪定(3μg/kg)组、LRRC4 siRNA质粒组、空载质粒组、右美托咪定(3μg/kg)+LRRC4 siRNA质粒组;另选12只大鼠只暴露坐骨神经,不结扎,作为假手术组。大鼠以3μg/kg的右美托咪定和LRRC4 siRNA质粒分组经留置管鞘内给药干预后,检测大鼠疼痛症状,比较机械缩足阈值和热缩足潜伏期;检测大鼠坐骨神经阻滞持续时间,比较其运动和感觉阻滞持续时间;以试剂盒测定大鼠血清炎性因子前列腺素E_(2)(PGE_(2))、白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-6(IL-6)水平和脊髓组织氧化应激因子超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平;以实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)实验检测大鼠脊髓组织LRRC4、SDF-1及CXCR4 mRNA表达水平;以免疫印迹法检测大鼠脊髓组织LRRC4/SDF-1/CXCR4信号通路蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠机械缩足阈值、热缩足潜伏期、脊髓组织SOD、GSH-Px、LRRC4 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05),血清PGE_(2)、IL-18和IL-6水平、脊髓组织MDA水平、SDF-1、CXCR4 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与模型组、右美托咪定+LRRC4 siRNA质粒组分别比较,右美托咪定组大鼠机械缩足阈值、热缩足潜伏期、坐骨神经运动和感觉阻滞持续时间、脊髓组织SOD、GSH-Px、LRRC4 mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05),血清PGE_(2)、IL-18和IL-6水平、脊髓组织MDA水平、SDF-1、CXCR4 mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05);LRRC4 siRNA质粒组大鼠机械缩足阈值、热缩足潜伏期、脊髓组织SOD、GSH-Px、LRRC4 mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05),血清PGE_(2)、IL-18和IL-6水平、脊髓组织MDA水平、SDF-1、CXCR4 mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05);空载质粒组大鼠各指标水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:右美托咪定可通过上调LRRC4表达,抑制SDF-1/CXCR4信号激活,从而增强坐骨神经阻滞,抵抗炎症和氧化应激反应,明显减轻CCI大鼠疼痛症状。

神经病理性疼痛大鼠疼痛-抑郁行为学特点及左侧无粒型岛叶皮质背侧区mGluR5/NMDAR2B蛋白的表达

背景:神经病理性疼痛的发生及其所致抑郁可能与大脑皮质代谢型谷氨酸受体5和N-甲基-D-天冬氨酸受体2B型蛋白表达增加有关。目的:探索坐骨神经慢性压迫性损伤大鼠疼痛及其所致抑郁的行为学特点,并观察神经病理性疼痛大鼠左侧无粒型岛皮质背侧区代谢型谷氨酸受体5和N-甲基-D-天冬氨酸受体2B型蛋白表达情况。方法:采用随机数字表法将50只SD大鼠分为假手术组(仅暴露坐骨神经干,不予结扎)和模型组(结扎坐骨神经建立坐骨神经慢性压迫性损伤模型)。于术后1-5周每周使用Von Frey纤维丝检测大鼠机械痛敏缩足阈值;通过糖水偏爱法和强迫游泳法观察抑郁样行为;术后5周采用坐骨神经功能指数及苏木精-伊红染色观察坐骨神经功能及结构状态,通过[18]F-FDG PET-CT观察坐骨神经及大脑代谢情况,采用免疫印迹检测大脑左侧无粒型岛叶皮质背侧区中代谢型谷氨酸受体5和N-甲基-D-天冬氨酸受体2B型表达水平。结果与结论:(1)与假手术组大鼠相比,模型组大鼠机械痛敏缩足阈值和坐骨神经功能指数在术后1周开始显著降低(P<0.05),于2,3周出现明显抑郁样行为并进行性加重(P<0.05);(2)苏木精-伊红染色提示模型组坐骨神经病理改变呈进行性加重;模型组大鼠右侧坐骨神经/肝脏平均标准化摄取值自术后2-4周较假手术组显著增加(P<0.05);(3)术后5周,模型组大鼠大脑左侧无粒型岛叶皮质背侧区中代谢型谷氨酸受体5和N-甲基-D-天冬氨酸受体2B型表达水平较假手术组明显增高(P<0.05);(4)结果说明,坐骨神经损伤后所致机械疼痛、抑郁样行为、坐骨神经功能和病理表现并不完全同步。左侧无粒型岛皮质背侧区中代谢型谷氨酸受体5和N-甲基-D-天冬氨酸受体2B型可能参与神经病理性疼痛和疼痛所致抑郁样行为的发病机制。

大鼠坐骨神经损伤性疼痛的行为观察和背根神经节中Kv1mRNA的表达

目的:探讨坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)钾通道Kv1mRNA的表达及其在疼痛发生机制中的作用。方法:SD雄性大鼠60只,随机分为:A组:CCI组(30只);B组:对照组(30只)。术前及术后3,7,14,28天分别测定大鼠热痛阈值、机械痛阈值和行为学评分。术后3、7、14、28天用RT-PCR分析Kv1mRNA表达的变化。结果:所有CCI动物从术后3天起,出现明显疼痛行为学改变和热痛、机械痛阈值的降低,与对照组比较差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。RT-PCR结果显示A组术后3天Kv1.2,Kv1.4,Kv1.6mRNAs明显减少,术后7天Kv1.1mRNAs明显减少,显著低于B组(P<0.05或P<0.01),术后Kv1.5mRNAs均无减少(P>0.05)。结论:慢性坐骨神经损伤后,背根神经节钾通道Kv1.1,Kv1.2,Kv1.4mRNAs的表达减少,而且表达减少与CCI大鼠的痛过敏、行为变化在时相上基本一致,说明CCI大鼠痛觉过敏与背根神经节Kv1.1,Kv1.2,Kv1.4mRNAs表达的减少有关。

神经损伤引发实验大鼠痛觉及初级感觉神经元的电生理变化

目的：研究神经损伤后，大鼠的痛觉行为改变及初级感觉神经元的电生理变化。方法：用大鼠慢性压迫性神经损伤（Chmnic Constriction Injury，CCI）的痛觉实验模型，正常大鼠为对照，观察大鼠的热痛敏行为；以胞内电生理记录法检测损伤神经元及正常神经元的膜电位特征及其变化。结果：模型组大鼠的损伤侧肢体的缩腿反应潜伏期较对照侧明显缩短；损伤神经元的静息膜电位移向去极化方向且激发动作电位所需阈强度减小。结论：神经损伤可引起大鼠的热痛敏行为，损伤神经元有异位自发放电产生，其兴奋性增加是行为异常的主要成因。

神经生长因子对坐骨神经损伤大鼠脊髓内神经纤维的影响

目的:确定坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)所致神经病理性痛(NP)是否伴有脊髓背角内有髓或无髓神经纤维长度密度或体积分数的变化,以及神经生长因子(NGF)干预的作用。方法:3月龄雄性SD大鼠随机分为sham组、CCI组和CCI+NGF组,术后28 d取材,将每只大鼠左侧和右侧L5脊髓背角各分成4个组织块并分别制成1张各向同性Epon812环氧树脂包埋超薄切片,利用透射电镜(TEM)在每张超薄切片内等距随机抽选视野拍照后,采用体视学方法计算脊髓背角内有髓神经纤维和无髓神经纤维的体积分数、长度密度以及有髓神经纤维的直径及其髓鞘厚度。结果:与未手术侧比较,三组大鼠手术侧L5节段脊髓背角内有髓神经纤维或无髓神经纤维的体积分数或长度密度以及有髓神经纤维的直径或髓鞘厚度之间的差异均无统计学意义,三组大鼠相同侧别的组间比较其差异也无统计学意义。结论:CCI所致NP以及NGF干预不会引起脊髓背角内有髓神经纤维和无髓神经纤维总体积或总长度的改变。

和厚朴酚对神经病理性疼痛小鼠背根神经节TTX-R钠电流的影响

目的在小鼠坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)模型上,观察和厚朴酚(Honokiol,Hon)对急性分离的背根神经节(DRG)细胞河豚毒素不敏感型(TTX-R)钠电流的作用,探讨其镇痛机制。方法应用CCI方法诱导神经病理性疼痛,全细胞膜片钳技术记录钠电流。结果与正常组比转,CCI模型使TTX-R钠电流明显增加,激活曲线向左偏移4.8 m V,不改变稳态失活曲线。Hon 30 M明显抑制CCI模型TTX-R钠电流的幅度,使激活曲线恢复趋向正常范围,失活曲线较CCI组向左偏移8.9 m V。结论 Hon对CCI模型增加的TTX-R钠电流有抑制作用,并影响其动力学特征。

触液核NGF/ERK信号通路参与CCI大鼠神经病理性疼痛

目的:观察神经生长因子(nerve growth factor, NGF)在坐骨神经慢性压迫性损伤(chronic constriction injury, CCI)大鼠触液核的表达以及拮抗触液核NGF对CCI大鼠痛行为学和触液核p-ERK表达的影响。方法:侧脑室注射CB-HRP逆行示踪触液核,结合免疫荧光双标观察正常大鼠是否表达NGF和p-ERK。第一步:SPF级雄性SD大鼠,体重200~300 g,按数字表法随机分为5组(每组6只):sham组,CCI 1、3、7、14天组。术前1天、术后1天、3天、7天、14天测定机械痛阈(mechanical withdrawal threshold, MWT)和热痛阈(thermal withdrawal latency, TWL)后处死并取触液核进行Western Blot观察NGF和p-ERK的表达变化情况。第二步:将SD大鼠随机分为6组(n=6):CCI+NGF抗体组、CCI+PBS组、CCI+对照抗体组、sham+NGF抗体组、sham+PBS组、sham+对照抗体组。CCI大鼠术后第6天在立体定位仪下侧脑室分别注射NGF抗体、PBS及对照抗体,测定MWT和TWL后处死并取触液核进行Western Blot观察p-ERK的表达变化情况。结果:正常大鼠触液核表达NGF和p-ERK,CCI组大鼠的MWT和TWL明显低于sham组,侧脑室注射NGF抗体后CCI+NGF抗体组大鼠的痛阈较CCI+PBS组和CCI+对照抗体组明显提高,并且其p-ERK表达较其他两组明显降低。结论:触液核NGF/ERK信号通路可能参与了大鼠神经病理性疼痛,侧脑室注射NGF抗体可能通过拮抗触液核NGF/ERK信号通路减轻大鼠神经病理性疼痛。

神经病理性疼痛大鼠中脑导水管周围灰质腹外侧区NLRP3炎症小体激活水平研究

目的探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体在神经病理性疼痛大鼠中脑导水管周围灰质腹外侧区(vlPAG)的表达水平及其作用。方法选取SPF级SD大鼠20只,采用随机数字表法分为假手术组(Sham组)与慢性坐骨神经压迫性损伤组(CCI组),每组10只。于手术前后测定2组机械痛阈与热痛阈;Western blot检测2组NLRP3炎症小体各组分蛋白表达水平;RT-PCR检测2组NLRP3炎症小体各组分基因mRNA表达水平;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测2组炎症因子白介素-lβ(IL^(-1)β)及白介素-18(IL^(-1)8)表达水平;免疫荧光检测2组中NLRP3炎症小体在vlPAG的分布情况,并与小胶质细胞标志物IBA1进行共定位分析。结果与Sham组相比,CCI组术后3 d、7 d、14 d、21 d机械痛阈与热痛阈均明显降低(P<0.001);与Sham组相比,CCI组核心蛋白NLRP3、效应蛋白Caspase-1 p10及前体蛋白pro-Caspase-1表达水平均明显升高(P<0.001);与Sham组相比,CCI组NLRP3(P<0.001)、Caspase-1(P<0.001)及IL^(-1)β(P<0.01)mRNA表达水平均明显升高,炎症因子IL^(-1)β(P<0.001)与IL^(-1)8(P<0.01)表达水平也明显升高;与Sham组相比,CCI组在vlPAG的NLRP3阳性细胞数增加,且与IBA1存在共表达。结论神经病理性疼痛大鼠vlPAG中NLRP3炎症小体被激活且表达水平增高,提示NLRP3炎症小体激活水平与神经病理性疼痛大鼠痛阈下降相关。

推拿按揉法对坐骨神经慢性压迫性损伤模型大鼠步态及腓肠肌的影响

目的:通过观察推拿按揉法对坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)模型大鼠右后足步态参数及右侧腓肠肌的影响,探讨推拿按揉法对CCI模型大鼠后肢运动功能的干预作用。方法:将32只雄性SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组及模型+推拿组,每组8只。模型制备通过坐骨神经结扎造成大鼠神经病理痛。模型+推拿组大鼠在造模后第4天开始给予推拿按揉右侧腓肠肌的干预治疗,连续14d。运用CatWalk三维步态系统观察4组大鼠造模前后不同时间点右后足步态参数的改变,步态测试后观察4组大鼠右侧腓肠肌湿重及形态学的改变。结果:空白组、假手术组各时间点CatWalk步态参数差异无统计学意义;模型组及模型+推拿组在CCI造模后各时间点最大接触面积、足印面积及摆动速度3项步态参数均较空白组显著下降(P<0.01,P<0.05),造模后第14、17天,模型+推拿组这3项步态参数较模型组显著升高(P<0.05);模型组及模型+推拿组在CCI造模后各时间点摆动时间较空白组显著升高(P<0.01,P<0.05),造模后第14、17天,模型+推拿组摆动时间较模型组显著降低(P<0.05)。模型组和模型+推拿组的右侧腓肠肌湿重及恢复率较空白组显著降低(P<0.01),但两组之间差异无统计学意义。模型组腓肠肌细胞横截面积显著小于空白组(P<0.05),模型+推拿组显著大于模型组(P<0.05)。结论:推拿按揉法能改善CCI模型大鼠的后肢步态,延缓腓肠肌的萎缩,证实推拿按揉法能够恢复CCI模型大鼠的后肢运动功能。