大鼠慢性压迫性脊髓损伤后凋亡调控相关基因p53的表达变化及意义

目的:探讨慢性压迫性脊髓损伤(chroniccompressivespinalcordinjury,CCSCI)后脊髓组织中凋亡相关基因p53的表达变化规律及意义。方法:通过制作Wistar大鼠慢性压迫脊髓损伤模型,应用免疫组织化学方法和原位杂交方法,研究压迫组、假手术对照组脊髓组织中p53mR-NA和p53蛋白表达的灰度值差异。结果:p53mRNA在脊髓受压后4h脊髓组织即有表达,1d后增高,7d后仍有表达,14d后无表达,而p53蛋白受压1d后呈弱阳性,之后无明显表达。结论:p53的表达规律提示它参与了CCSCI内源性机制的调控过程。

大鼠慢性压迫性脊髓损伤后胶质纤维酸性蛋白的表达及意义

目的:探讨大鼠慢性压迫性脊髓损伤后胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达变化,并研究GFAP与压迫程度的关系,以及对脊髓功能恢复的影响。方法:通过制作Wistar大鼠CCSCI模型,分成A组(假手术对照组)、B组(椎管侵占率25%压迫组)和C组(椎管侵占率50%压迫组),结合大鼠的生物行为评分,应用免疫组织化学SABC法,分别于术后1、2、3、5、8、12周检测各组脊髓组织中GFAP蛋白表达的灰度值差异。结果:GFAP表达在3周时达高峰,同时间点A组表达最低,C组最高。BBB评分显示术后3周内压迫组脊髓功能恢复较快。结论:GFAP在CCSCI中的表达水平与压迫程度有关,适度的GFAP表达增高和胶质化反应有助于大鼠脊髓功能的恢复。

大鼠慢性压迫性脊髓损伤及减压后神经营养素的表达

目的 观察神经营养素在慢性压迫性脊髓损伤后及减压后的表达变化 .方法 同龄 Wistar大鼠 6 0只 ,设 A组正常对照组、B组行后路渐进式慢性压迫、C组减压组、D组手术组 ,应用免疫组化方法观察各组脑源性神经营养因子、(BD-NF ) ,胶质源性神经营养因子 (GDNF) ,神经营养素 - 3(NT-3) ,神经营养因子 (NGF)及其受体 Trk A,Trk B,Trk C表达的变化 .结果 行慢性压迫后及减压后神经营养素及其受体表达变化明显 ,各组差异有显著性意义 .与正常组与假伤组比较 ,慢性压迫后 1d的标记指数 BDNF(32 .4± 1.6 ) vs(4.8± 1.0 ) ,GDNF(2 1.2± 3.8) vs(3.7± 1.1) ,NT- 3(2 6 .2±2 .8) vs (5 .5± 0 .6 ) ,NGF (9.2± 0 .9) vs(1.7± 0 .4 ) ,Trk A(2 3.7± 1.7) vs (0 .6± 0 .5 ) ,Trk B (34.3± 3.3) vs(3.2± 0 .5 ) ,Trk C(30 .1± 3.9) vs(1.2± 0 .4 ) (P<0 .0 5 ) .与正常组与压迫 30 d组比较 ,减压后 1d的标记指数 BDNF(30 .2± 1.6 ) vs(5 .8± 1.8) ,GDNF (2 0 .0± 3.6 ) vs(3.6± 1.1) ,NT- 3(2 5 .8± 2 .3) vs(5 .6± 0 .5 ) ,NGF(8.7± 0 .7) vs(1.7± 0 .4 ) ,Trk A(2 1.4± 4 .2 ) vs(0 .7± 0 .4 ) ,Trk B(32 .7± 3.3) vs(3.5± 0 .5 ) ,Trk C (2 8.7± 3.8) vs (1.2± 0 .6 ) (P<0 .0 5 ) .

慢性压迫性脊髓损伤减压后骨骼肌的变化

目的 :观察慢性压迫性脊髓损伤减压后骨骼肌的微观形态学、凋亡相关蛋白 (Fas,Caspase8)表达及钙泵活性的变化 .方法 :80只Wistar雌性大鼠 ,随机分为正常组、慢性压迫组和减压组 .慢性压迫组及减压组置入平头塑料螺钉对大鼠脊髓进行后路渐进性压迫 ,于 2mo后压迫到 6 0 %左右程度 .慢性压迫组处死大鼠后取腓肠肌作为标本 ;减压组彻底减压后分别于 5 ,10 ,15 ,2 0 ,2 5及 30d取材 .且各组在取材前对大鼠进行运动功能测定 .所有标本做HE染色和Fas,Caspase8免疫组化染色及钙泵活性测定 .并用图像分析仪测定肌细胞直径及截面积和Fas,Caspase8灰度值 .结果 :压迫组的大鼠腓肠肌细胞萎缩、直径变细 (9 9± 1 1μmvs 18 8± 2 7) μm](P <0 0 1)及截面积变小 [(4 6 3± 6 1) μm2 vs (894± 84 )μm2 ](P <0 0 1) ,肌细胞Fas表达增高 (0 0 9± 0 0 2vs0 0 2± 0 0 1) (P <0 0 1) ,Caspase8表达增高 (0 0 7± 0 0 2vs0 0 1± 0 0 1) (P <0 0 1) ,钙泵活性降低 [(0 0 8± 0 0 3)kat·g-1vs (0 16± 0 0 5 )kat·g-1](P <0 0 1) ;而减压后则有明显的恢复 .结论 :慢性压迫性脊髓损伤所导致的骨骼肌退变在减压后有明显的恢复 。

胰岛素样生长因子1对大鼠慢性压迫性脊髓损伤后神经功能恢复的影响

目的观察胰岛素样生长因子1(IGF-1)对慢性压迫性脊髓损伤后神经功能恢复的影响。方法50只Wistar雌性大鼠,随机分为正常组、慢性重度(60%)压迫组、减压组、生理盐水(NS)组及IGF-1组。正常组不做任何处理,其余各组置入平头塑料螺钉对大鼠脊髓进行后路渐进性压迫,于2个月后达到60%左右重度压迫程度,然后减压组、NS组和IGF-1组彻底减压,NS组和IGF-1组分别于减压后1、3、5、7、9d在蛛网膜下腔给予NS和IGF-1(25μl),并于减压后2、4、6、8、10d后肢运动功能评分和检测运动诱发电位(MEP)。结果压迫组大鼠后肢运动功能障碍,MEP波幅(P1～N1峰峰值)降低、潜伏期延长;IGF-1组大鼠后肢运动功能及MEP波幅及潜伏期有明显的恢复(P<0.05),且于4～6d后显著优于单纯减压组和NS组(P<0.05)。结论IGF-1可明显促进慢性压迫性脊髓损伤后大鼠后肢运动功能及MEP波形的恢复。

大鼠慢性压迫性脊髓损伤后EphA2在脊髓前角运动神经元中的表达

目的探讨慢性脊髓损伤后红细胞生成素诱导肝癌细胞株受体A2(EphA2)在脊髓中的变化规律,寻找脊髓损伤后治疗的靶点。方法将40只Wistar大鼠分为假手术组、轻度压迫组(CR 20%)、中度压迫组(CR 40%)、重度压迫组(CR 60%)4组。T_(10)水平脊髓背侧加压,压迫方法采用塑料螺钉渐进性加压,分次完成手术。对大鼠进行后肢运动功能评分及所取脊髓标本进行原位杂交分析,对脊髓前角EphA2阳性细胞率进行统计分析,比较各组之间的差异。结果EphA2阳性细胞主要存在于压迫远端脊髓灰质中,其中以脊髓前角运动神经元为著。假手术组有很少量EphA2阳性细胞,压迫组EphA2阳性细胞明显升高(P<0.01),中度压迫组及重度压迫组较轻度压迫组升高(P<0.05),中度压迫组及重度压迫组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论慢性压迫性脊髓损伤后脊髓前角运动神经元EphA2表达升高。慢性脊髓压迫可以诱发脊髓EphA2表达升高,对脊髓损伤是一个保护性因素。

老年大鼠慢性压迫性脊髓损伤后病理学变化与重要分子Shh mRNA的相关性

目的探讨老年大鼠慢性压迫性脊髓损伤后病理学变化与重要分子Shh mRNA的相关性。方法 60只大鼠随机分为慢性脊髓压迫组(n=50)和对照组(n=10),对照组椎板钻孔,慢性脊髓压迫组腹腔内麻醉,比较两组脊髓损伤后不同时间点改良Tarlov评分及斜扳试验变化、脊髓损伤后4 w病理组织学改变、脊髓损伤后Shh mRNA在距损伤区不同距离处表达。结果慢性脊髓压迫组脊髓损伤后1、3 d、1、2、4 w的改良Tarlov评分均显著低于对照组(P<0.05),3 d、1、2、4 w的斜扳试验也均显著低于对照组(P<0.05);慢性脊髓压迫组灰质和白质细胞中Shh mRNA表达及分布范围均显著高于室管膜细胞(P<0.05)。结论老年大鼠慢性压迫性脊髓损伤会激活重要分子Shh mRNA表达,进而对神经细胞再生产生重要作用。

缺氧诱导因子-1α/血管内皮生长因子信号通路对慢性压迫性脊髓损伤的双向作用机制

慢性压迫性脊髓症是临床常见的病理状态，脊髓型颈椎病、椎管狭窄症、后纵韧带骨化症、椎管内肿瘤等均可引起慢性压迫性脊髓损伤。其病理机制尚未完全明确，脊髓受到慢性机械压迫、微循环缺血继发血管和神经损害是其重要的致病原因^[1-3]。缺血缺氧条件下，缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达上调并诱导其下游靶基因血管内皮生长因子（VEGF）表达，进而介导一系列信号级联反应^[4]。

大鼠慢性渐进分级压迫脊髓损伤的神经细胞凋亡

目的：探索不同程度慢性压迫脊髓损伤后的各种神经细胞凋亡现象。方法：采用T9椎板切除后还渐进分级压迫装置，多次不同程度旋进螺钉造成39只大鼠慢性压迫性脊髓损伤实验动物模型；应用Feulgen染色、TUNEL技术观察了不同程度慢性压迫性脊髓损伤后直接受压区各种神经细胞凋亡的特点。结果：三个月后试验组动物椎管内螺钉形成12．3-82．5％的侵占率。根据椎管侵占率分成轻度压迫组（椎管侵占率＜30％）、中度压迫组（30－60％）；重度压迫组（＞60％）。组织病理学检查发现三组动物基本再现了轻、中、重度慢性压迫性脊髓损伤的病理学特点。不同程度损伤直接受压段中，中度损伤的凋亡现象最为显著，重度损伤组神经细胞的变性坏死更为显著，三组的神经细胞凋亡率相比有显著性差异；凋亡细胞主要分布在白质纵向传导束上脱髓鞘的区域，主要为少突胶质细胞．神经元也存在少量凋亡现象，分布在Ⅲ─Ⅳ板层，主要集中在后角。假手术对照组未发现凋亡现象。结论：慢性压迫性脊髓损伤后神经细胞凋亡和变性坏死同时存在，凋亡是慢性压迫性脊髓损伤继发性病理变化的重要组成部分，尤其在中度慢性压迫性损伤中，神经元和胶质细胞凋亡是损伤后神经细胞死亡的主要原因之一；少突胶质细胞凋亡可能是白质脱髓鞘的重要因素。

慢性压迫性脊髓损伤后神经前体细胞的增殖情况

目的 通过分析成年大鼠慢性压迫性脊髓损伤后及减压后巢蛋白表达的变化 ,探讨神经前体细胞的增殖。 方法 选用健康Wistar大鼠 5 0只 ,体重 2 80～ 32 0g。制备慢性压迫性脊髓中度、重度损伤及重度压迫损伤减压后 3,10d模型 ,自距压迫边缘至 5mm段脊髓组织切片。正常成年健康大鼠作为正常对照组。巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白采用免疫组织化学染色 ,计算机图像分析仪定量分析 ,观察神经前体细胞的增殖情况。 结果 成年大鼠慢性压迫性脊髓中、重度损伤及重度压迫损伤减压后 3d ,巢蛋白在白质、灰质及脊髓中央管的室管膜细胞和减压后 10d组白质中均有明显表达 (P <0 .0 5 ) ,以重度压迫组最为显著 (P <0 .0 1)。减压后 10d组灰质与正常对照组比较 ,差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。与正常对照组相比 ,各损伤组脊髓内胶质纤维酸性蛋白表达增强 ;胶质纤维酸性蛋白阳性细胞数目增多 ,胞体肥大 ,突起增粗、增长。 结论 成年大鼠慢性压迫性脊髓损伤及减压后早期存在神经前体细胞增殖。星形胶质细胞参与神经前体细胞的增殖与迁移 ,对脊髓具有重要的营养修复作用。

大鼠脊髓慢性压迫性损伤动物模型的建立

目的 建立一种大鼠脊髓慢性压迫性损伤模型。方法 应用平头不锈钢螺钉从大鼠C_4椎体前侧钻入压迫脊髓腹侧,术后保留螺钉30 d,并用联合行为评分(CBS)、神经电生理、光镜、电镜检查进行综合评判。结果 模型动物脊髓慢性压迫随着螺钉轻、中、重程度的不同,其术后行为学、运动诱发电位(MEP)及组织学观察符合脊髓慢性压迫症病理改变的特点。结论 建立了大鼠脊髓慢性压迫性损伤模型,此模型制作简便,可重复性强,脊髓损伤能表现出不同的压迫深度,为进一步研究脊髓慢性压迫损伤病理机制奠定了基础。

电针治疗对慢性渐进性压迫性脊髓损伤大鼠行为功能改变的影响

目的:探讨慢性渐进性压迫性脊髓损伤过程中电针对脑源性神经营养因子(brain-derivedneurotrophicfactor,BDNF)表达的影响及其与行为功能改变的关系。方法:50只Wistar大鼠,体质量(200±50)g,采用大鼠后路渐进性脊髓压迫动物模型,在大鼠实验性脊髓损伤后,分别用电针刺激强度为1,10,20mA的电针进行治疗。观察联合行为评分(combinedbehavioralscore,CBS),常规病理及免疫组化检测BDNF的变化。结果:脊髓损伤后BDNF在神经元及胶质细胞中表达增强,经过电针治疗后,治疗组B(10mA)神经元和胶质细胞中BDNF表达下降,CBS值显示,治疗组B优于压迫组,治疗组B与压迫组比较统计学差异具有显著性(P<0.05)。而治疗组A(1mA)和C(20mA)与压迫组比较统计学无差异。结论:电针能促进损伤脊髓的修复,电针疗法可能具有电流特异性。

慢性脊髓压迫及减压后骨骼肌细胞凋亡的实验研究

目的:研究大鼠慢性压迫性脊髓损伤及减压后骨骼肌萎缩与细胞凋亡的关系以及凋亡相关基因P53的表达意义。方法:45只SD大鼠分成3组,压迫组15只,作成轻、中和重度慢性脊髓压迫损伤;减压组25只,将重度压迫组的压迫装置取出;正常对照组5只,不做任何处理。应用苏木精-伊红染色、终末脱氧核苷酰转移酶介导的原位末端标记法和原位杂交技术研究慢性脊髓压迫及减压后肌细胞萎缩、凋亡的特点。结果:随着压迫程度的增加肌细胞凋亡数量增加,P53mRNA表达增高;减压后肌细胞凋亡数量明显减少,P53mRNA表达减少。结论:慢性脊髓压迫后肌细胞出现凋亡,骨骼肌细胞的凋亡是肌肉失神经萎缩的机制之一,减压可通过抑制细胞凋亡阻止肌肉萎缩。

鼠慢性脊髓压迫及减压后骨骼肌细胞的凋亡

目的 :研究慢性压迫性脊髓损伤及减压后骨骼肌细胞的凋亡 .方法 :36只SD大鼠分成 3组 :①压迫组 16只 ;②减压组 16只 ;③正常对照组 4只 .应用HE染色和TUNEL技术观察慢性脊髓压迫及减压后肌细胞的萎缩和凋亡 .结果 :正常对照组偶见凋亡细胞核 ,慢性脊髓压迫性损伤后骨骼肌细胞凋亡的数量增加 ,减压后肌细胞凋亡数量明显减少 .结论 :慢性脊髓压迫性损伤后肌细胞出现凋亡有重要意义 ,它是引起骨骼肌萎缩的原因之一 .

慢性渐进性压迫对大鼠行为功能及脊髓运动神经递质表达的影响

目的 :观察脊髓慢性受压后实验动物的行为功能与运动神经递质表达的变化情况。方法 :采用大鼠后路渐进性脊髓压迫动物模型 ,观察联合行为评分 (CBS) ,常规病理及免疫组化检测胆碱乙酰转移酶 (ChAT)的变化。结果 :免疫组织化学染色显示 ,在正常大鼠脊髓前角运动神经元及大小神经元ChAT均表达阳性 ,脊髓损伤后ChAT阳性细胞数减少 ,CBS升高 ,二者具有相关关系。结论 :脊髓受压抑制大鼠脊髓神经元合成ChAT 。

脊髓慢性压迫性损伤后细胞凋亡和BDNF表达的观察

目的探讨大鼠脊髓在遭受到持续进行性压迫损伤后神经细胞凋亡以及脑源性神经营养因子（BDNF）及其Trk B受体的变化。方法将75只SD大鼠分为模型组、对照组和正常组,各25只;根据造模后取材时间,各组再分为1、7、14、21、28 d 5亚组,每亚组5只。胸11～12椎板和硬脊膜之间置入缓膨材料（3 mm×5 mm,厚0.8 mm）制作大鼠慢性压迫性脊髓损伤模型,BBB评分评估行为学变化,TUNEL染色检测细胞凋亡,免疫组化染色检测BDNF及其Trk B受体表达变化。结果造模后7、14、21、28 d,模型组大鼠BBB评分均明显低于对照组和正常组（P〈0.05）,而对照组和正常组均无统计学差异（P〉0.05）。模型组大鼠可观察到从脊髓受压开始,神经细胞开始出现凋亡,中央管及前角区域的神经细胞凋亡明显,邻近灰质的白质部分神经胶质细胞凋亡明显;而对照组和正常大鼠未见明显凋亡细胞。模型组大鼠脊髓内BDNF及其Trk B受体呈强阳性,尤其是神经元部位,BDNF及其受体Trk B表达明显,且主要表达在运动类神经元中,随压迫进行,表达逐渐增强,至相对稳定;对照组和正常组大鼠脊髓内BDNF及其Trk B受体表达较少。结论大鼠脊髓在受到慢性压迫性损伤时,神经细胞凋亡明显,BDNF、Trk B受体表达明显增强。

一种新型慢性压迫性颈髓损伤大鼠模型的建立

目的建立并验证一种新型慢性压迫性颈脊髓损伤大鼠模型。方法2011年6—2011年11月，将54只SD大鼠随机分为对照组（n=6）、急性压迫组（4h、24h，n=6）、慢性压迫组（4h、12h、24h、48h、72h、1周，n=6）。在C5-6硬膜外间隙置入不同规格吸水聚氨酯胶片制作急、慢性压迫性脊髓损伤模型。造模后不同时间行MRI、组织学和组织化学观察，运动功能评分（BBB）评价神经功能。结果①急性压迫组4～24h，T2WI见脊髓明显受压、髓内高信号，组织学见脊髓出血坏死，前角神经元计数显著低于对照、慢性压迫组（P〈0．05），BBB评6．0分。②慢性压迫4—12h，见脊髓水肿、中央管变形，神经元计数、髓鞘染色强度与对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05），BBB评20．6分；24～72h，脊髓受压明显，中央管扩大、静脉淤血，神经元计数减少（P〈0．05），后索神经纤维排列紊乱、断裂，髓鞘染色强度低于对照组（P〈0．05），BBB评19．3分；1周，髓内空泡化，神经元数目减少（P〈0．05），后索髓鞘蓝染强度低于对照组（P〈0．05），BBB评17．5分。LWI示脊髓受压变形，髓内未见出血信号。结论慢性压迫组造模方法可以实现慢性压迫性脊髓损伤，符合慢性压迫性脊髓损伤的病理、影像学和神经功能变化特征。