推拿对坐骨神经慢性压迫损伤模型大鼠脊髓背角星形胶质细胞的影响

目的:观察推拿对坐骨神经慢性压迫损伤模型(CCI)大鼠脊髓背角星形胶质细胞表达的影响,探讨推拿对神经病理性疼痛(NPP)的镇痛效应及脊髓中枢机制。方法:64只SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、模型+推拿组,每组16只。采用羊肠线结扎的方法建立CCI模型;模型+推拿组造模后第4—13天,每日推拿1次,其余组均不做推拿。观察各组大鼠行为学变化及脊髓星形胶质细胞表达情况。结果:模型组大鼠造模后PWT、PWL均显著低于空白组及假手术组(P<0.01);造模后第10、14天,模型+推拿组与模型组比较,PWT、PWL显著升高(P<0.05,P<0.01);与空白组和假手术组比较,模型组大鼠造模后脊髓背角星形胶质细胞明显激活,GFAP蛋白表达量显著升高(P<0.01);模型+推拿组脊髓背角星形胶质细胞较模型组激活减少,GFAP蛋白表达量显著降低(P<0.01)。结论:推拿能够通过抑制脊髓背角星形胶质细胞激活,降低CCI造模导致的痛觉过敏和触诱发痛。

慢性压迫性损伤模型制备因素及模型评价方法的研究进展

慢性压迫性损伤模型(Chronic construction injury model,CCI)是一种常用的神经病理性疼痛动物模型,制备相对简易,即结扎坐骨神经主干而造成轻微压迫损伤,但其损伤程度较难控制,制备所得的模型成功率不高(50%)。本文就慢性压迫性损伤模型的制备、评价方法以及痛敏感区域等方面进行总结,比较使用不同材料制备模型对疼痛敏感度的影响,论述模型制备过程中的注意事项,及当前模型存在的若干问题,为此模型的改进和研究应用提供参考和依据。

抗神经生长因子抗体对大鼠慢性坐骨神经压迫损伤模型的脊髓胶质细胞激活的抑制作用

目的研究抗神经生长因子抗体(anti-NGF)蛛网膜下腔应用对大鼠坐骨神经病理性疼痛模型痛阈的影响,并观察其对该模型星形胶质细胞激活的影响.方法手术制作大鼠慢性坐骨神经压迫损伤(chronic constriction injury,CC)I模型.实验大鼠采用随机数字表法分为4组:CCI+anti-NGF组(n=8):手术后第7天开始每天单次腹腔注射anti-NGF(10 mg/kg)、CCI模型+生理盐水组(n=8):手术后第7天开始每天单次腹腔注射生理盐水、假手术给anti-NGF组(n=8)和假手术盐水组(n=8).各组均在术后隔天测定大鼠痛行为学观察术后15 d内大鼠机械和热痛阈的变化.各组在手术后15 d,使用4%多聚甲醛灌流后,进行免疫组化染色,观察大鼠脊髓L4～5节段星形胶质细胞标记物GFAP表达情况.结果手术盐水对照组的机械和热痛阈在3 d后出现明显下降,在术后第7天达到高峰期.术后第7天单次给予anti-NGF能短时间内拮抗CCI大鼠的机械和热痛阈下降,连续给予anti-NGF 7 d后可以使大鼠的机械和热痛阈持续显著高于CCI+盐水组.15 d时CCI+anti-NGF组大鼠脊髓L4-5节段的GFAP表达显著低于CCI+生理盐水组.结论腹腔注射anti-NGF能有效拮抗CCI大鼠模型机械和热痛阈的下降.连续注射anti-NGF可以显著的持续改善CCI大鼠模型的机械和热痛阈的下降.CCI+anti-NGF组脊髓GFAP表达显著低于CCI+生理盐水组,这可能与anti-NGF持续改善大鼠的痛行为有关.

不同结扎材料对慢性压迫性损伤模型胶质细胞活化的影响

目的探究不同结扎材料对慢性压迫性损伤(CCI)模型行为学表现、脊髓胶质活化及相关炎症因子表达的影响。方法44只SD大鼠随机分为对照组(n=15)、丝线CCI组(n=15)和铬线CCI组(n=14),术后3、7、11、15 d检测大鼠损伤侧机械缩足反射阈值(MWT)及热缩足反射阈值(TWL)。并采用特殊染色、Western blot法及RT-PCR法检测大鼠损伤部位病理改变、胶质细胞及炎性细胞因子的表达。结果术后3~15 d,丝线组与铬线组的MWT和TWL水平较对照组显著降低(P<0.05),术后3 d铬线组的TWL较丝线组出现显著降低(P<0.05)。坐骨神经染色结果显示丝线组与铬线组均出现了神经干损伤及脱髓鞘改变。Western blot法及RT-PCR法检测结果提示丝线组与铬线组大鼠小胶质细胞标记物(CD11b)及胶质纤维状酸性蛋白(GFAP),以及IL-1β及TNF-αmRNA表达水平接近,并显著高于对照组(P<0.05),而铬线组IL-6 mRNA表达高于丝线组(P<0.05)。结论丝线和铬线制备的CCI模型均产生了胶质细胞激活作用,其中铬线组的炎症反应更加强烈。

坐骨神经脉冲射频对慢性坐骨神经压迫损伤模型大鼠脊髓背角胶质细胞活化水平的影响及其镇痛作用

目的:观察坐骨神经结扎处脉冲射频(PRF)对慢性坐骨神经压迫损伤(CCI)模型大鼠脊髓背角小胶质细胞和星形胶质细胞活化水平的影响,探讨坐骨神经PRF镇痛机制与脊髓背角小胶质细胞和星形胶质细胞活化水平的关系。方法:雄性SPF级SD大鼠40只随机分为CCI假造模PRF假治疗组(SS组)、CCI假造模PRF治疗组(SP组)、CCI造模PRF假治疗组(CS组)和CCI造模PRF治疗组(CP组),每组10只。CCI造模成功后4d行PRF治疗,在坐骨神经结扎处行标准PRF (120s、42℃)。于CCI造模前1d (D0)及造模后1、3、5和7d (D1、D3、D5和D7)测定大鼠患侧机械缩足反射阈(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL)。疼痛行为学测试完成后(D7)取患侧L3～5脊髓背角,Western blotting法检测脊髓背角小胶质细胞特异性蛋白(Iba-1)和胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的蛋白表达水平。结果:与SS组比较,CCI造模后不同时间点CS组大鼠患侧出现足外翻、跛行、脚趾弯曲聚拢和行走时抬足等行为学表现,MWT和TWL均明显下降(P<0.01),脊髓背角Iba-1和GFAP蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与CS组比较,CP组大鼠(D5和D7)PRF后足外翻、跛行、脚趾弯曲聚拢和行走时抬足等行为学变化明显缓解,MWT和TWL值明显升高(P<0.01),脊髓背角Iba-1蛋白表达水平明显下调(P<0.05),GFAP蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:坐骨神经PRF能有效缓解CCI模型大鼠的神经病理性疼痛(NP),坐骨神经PRF可抑制脊髓背角小胶质细胞活化水平,其镇痛机制可能与抑制脊髓背角小胶质细胞活化有关。

外周血神经丝蛋白轻链多肽含量与神经压迫性疼痛程度相关性研究

目的探讨外周血神经丝蛋白轻链多肽(Nefl)水平与神经根性颈椎病(CSR)疼痛程度的相关性,并评估其是否可作为CSR进展的生物标志物。方法健康SD大鼠18只,随机数字表法分为2组,Sham组(9只)和大鼠坐骨神经慢性压迫损伤模型(CCI)组(9只)。Sham组暴露坐骨神经后缝合皮肤,CCI组暴露坐骨神经后先环扎再缝合皮肤;于术前,术后1、3、7、14 d采用电子测痛仪检测2组大鼠机械缩足反应阈值(MWT);并采集外周血进行定量蛋白质组分析,采用ELISA方法检测Nefl蛋白表达水平。将80例CSR患者作为研究组,同期体检的24例健康人群作为对照组,收集疼痛视觉模拟评分(VAS)结果,采用ELISA方法检测外周血Nefl蛋白表达;Spearman秩相关系数法评价外周血Nefl表达水平随疼痛程度的变化规律。结果CCI组大鼠术前,术后1、3、7、14 dMWT持续下降;3、7、14 d时MWT显著低于Sham组(P<0.01);TMT标记定量蛋白质组分析显示Nefl蛋白表达显著上调,Log(foldchange)=1.14,P<0.05;CCI组大鼠术前,术后1、3、7、14 d外周血Nefl蛋白表达量持续上升,Sham组3、7、14 d逐渐下降,MWT与大鼠外周血Nefl蛋白表达量呈负相关(r=-0.662,P<0.01)。CSR患者外周血Nefl表达显著高于健康人群(P<0.01),VAS为8分患者显著高于VAS为6分的患者(P<0.01),VAS与外周血Nefl呈正相关(r=0.41,P<0.01)。结论CCI模型大鼠和CSR患者外周血Nefl表达显著增加,且与疼痛程度相关,Nefl可作为临床上CSR病情进展评估的生物标志物。

基于诱发电位时频分析的山羊颈脊髓损伤模型评价

目的研究体感诱发电位(SEP)的时频特征及其对山羊颈脊髓损伤模型的诊断价值。方法选择12只3~6个月龄山羊,体质量15~20 kg。采用球囊注射压迫法制备慢性颈脊髓压迫损伤模型;使用诱发电位记录系统(YRKJA2004),记录颈脊髓损伤前后的SEP信号。应用匹配追踪算法提取SEP信号的时频成分,分析SEP信号时域及时频域特征参数,并比较颈脊髓损伤前后SEP时频成分特征及分布模式。结果所有动物造模后均出现功能障碍,颈脊髓受到轻度损伤,造模成功。颈脊髓损伤后,SEP信号的时域波形潜伏期延长(正常组11.39 ms±0.87 ms;损伤组13.56 ms±2.04 ms),波幅降低(正常组1.38μV±0.59μV;损伤组0.57μV±0.35μV)。同时,SEP信号的时频成分存在稳定的分布模式。颈脊髓损伤前,SEP信号在时频域存在1个稳定的主成分(16~22 ms、65~90 Hz)和2个次成分(次成分1:20~28 ms,150~210 Hz;次成分2:35~44 ms,100~210 Hz);与损伤前相比,损伤后SEP时频成分的分布区域存在显著差异(主成分:19~29 ms,60~120 Hz;次成分1:27~36 ms,160~230 Hz;次成分2:37~48 ms,40~150 Hz),并且时频成分的数量增加,出现了新的次成分,分布模式发生显著变化,且变化差异有统计学意义(P <0.05)。结论高分辨率SEP时频分析能提供反映颈脊髓损伤的相关信息,将有望为颈脊柱脊髓疾病的病理严重程度准确评估和精准的病灶定位诊断提供一种新思路。

拨法对CCI模型大鼠外周血清中IL-1β以及脊髓中5-HT_(2A)表达的影响

目的从行为学和形态学角度探索拨法对CCI模型大鼠感觉功能恢复的影响。方法采用推拿手法模拟仪定性、定量模拟手法,对CCI模型大鼠进行干预。通过光热耐痛阈分析大鼠行为学改善情况,ELISA法测定血清中IL-1β含量的变化,Western blot法检测脊髓中5-HT_(2A)受体的相对蛋白表达情况。结果拨法治疗组造模后7天的光热耐痛阈数值与模型组无差异(P>0.05),经过拨法治疗20次后(即造模后28天),二者之间有显著差异(P<0.05),且拨法组逐渐接近正常组水平。ELISA法检测血清中IL-1β的含量:造模后7天,模型组和拨法组IL-1β含量均显著高于正常组,经过拨法治疗20次后,拨法组IL-1β与模型组相比显著性下降(P<0.05)。Western blot法测定脊髓中5-HT_(2A)的相对蛋白表达含量:拨法治疗20次后,拨法组脊髓中5-HT_(2A)相对蛋白表达含量明显上调,且已接近正常组水平(P>0.05),高于模型组水平(P<0.05)。结论经过拨法治疗,可明显上调CCI模型大鼠的光热耐痛阈值,减轻其痛觉过敏状态;下调CCI模型大鼠外周血清中促炎性细胞因子IL-1β的表达,达到"消炎镇痛"的作用;上调脊髓中5-HT_(2A)受体的表达,对中枢镇痛起到一定作用。

Minor CCI与经典CCI大鼠模型成模特点的比较研究

目的比较研究轻度和经典方法诱导的大鼠慢性压迫性神经损伤(chronic constriction injury,CCI)模型的成模特点,为基础研究实验设计提供参考。方法将18只8周龄SD雄性大鼠随机分为假手术组、Minor CCI组和经典CCI组,每组6只。于坐骨神经结扎铬制可吸收外科缝线,Minor CCI组结扎1根,经典CCI组结扎4根。3组动物于造模前和造模后7、14、21、28 d检测机械缩足反射阈值、热缩足反射潜伏期和累积疼痛评分变化情况。透射电镜观察坐骨神经超微结构变化情况。结果Minor CCI组和经典CCI组机械缩足反射阈值和热缩足反射潜伏期痛敏趋势一致,Minor CCI组累积疼痛评分较经典CCI组低。Minor CCI组造模后出现痛敏,造模后14 d进入平台期,约10 d,各症状逐渐恢复;经典CCI组造模后出现痛敏,造模后14 d进入平台期,造模后28 d痛敏依然稳定甚至出现进一步敏化。Minor CCI组和经典CCI组坐骨神经超微结构变化一致,均表现为髓鞘结构破坏、崩脱,形成髓鞘球、自噬体等。结论Minor CCI模型更稳定,痛敏症状可维持至造模后28 d,基本无自残现象,适用于短期实验设计,可最大程度减小实验动物的痛苦。经典CCI模型痛敏症状持久,造模后28 d依然处于平台期,但自残现象明显,适用于中、长期实验设计。

杏仁核在C57BL/6小鼠慢性疼痛发生过程中的作用研究

目的研究小鼠在双侧毁损杏仁核后疼痛行为的变化,探讨杏仁核在慢性疼痛过程中的作用。方法 11只成年雄性小鼠行坐骨神经慢性压迫性损伤手术建立慢性疼痛模型,术后第10 d双侧杏仁核定位注射喹啉酸毁损杏仁核(实验组),另选取11只行杏仁核假毁损(对照组),分别测定两组杏仁核毁损术前后的机械痛阈、热痛阈。结果两组行双侧杏仁核毁损后第4 d和第7 d机械痛阈差异均有统计学意义(均P <0.05);两组热痛阈均无统计学差异(均P> 0.05)。结论杏仁核在小鼠慢性疼痛的过程中起作用,双侧毁损杏仁核可有效提高慢性疼痛模型小鼠机械痛阈。

马钱子碱通过钾离子通道调节外周镇痛

目的:马钱子是传统的镇痛中药之一,马钱子碱(Brucine,又名布鲁生)是马钱子镇痛的有效成分,但外周镇痛机制研究较少,本文通过痛行为检测和单纤维自发放电手段,观察马钱子碱在外周损伤区中的镇痛作用机制。方法:建立慢性压迫损伤模型(chronic constriction injury, CCI),利用机械缩足反射阈值(paw withdrawal threshold, PWT)和热缩足潜伏期(paw withdrawal latency, PWL)检测大鼠的疼痛行为学变化;记录起步点单纤维自发放电检测马钱子碱对放电频率的影响。结果:与溶剂组相比,外周损伤区局部注射马钱子碱后PWT和PWL显著增加(P <0.01),预先注射非特异性钾通道阻断剂四乙基铵(Tetraethylammonium, TEA)阻断了马钱子碱的镇痛作用;马钱子碱使起步点自发放电频率显著降低(P <0.001),而灌流TEA后抑制了它的作用。结论:马钱子碱在外周具有显著地镇痛作用,并且TEA能够阻断其作用,表明钾离子通道参与马钱子碱在外周的镇痛作用。

马钱子碱通过钾离子通道调节外周镇痛

目的马钱子是传统的镇痛中药之一,马钱子碱(又名布鲁生)是马钱子镇痛的有效成分,但外周镇痛机制研究较少,本文通过痛行为检测和单纤维自发放电手段,观察马钱子碱在外周损伤区中的镇痛作用机制。方法 建立慢性压迫损伤模型 (CCI),利用机械缩足反射阈值(PWT)和热缩足潜伏期(PWL)检测大鼠的疼痛行为学变化;记录起步点单纤维自发放电检测 马钱子碱对放电频率的影响。结果 与溶剂组相比,外周损伤区局部注射马钱子碱后 PWT 和 PWL 显著增加(P<0.01),预先 注射非特异性钾通道阻断剂四乙基铵(TEA)/大电导钙激活钾离子通道(BKca)阻断了马钱子碱的镇痛作用;马钱子碱使起步 点自发放电频率显著降低(P<0.01),而灌流 TEA 后抑制了它的作用,进一步灌流钙依赖钾离子的特异性阻断剂阻断 BKca、中 电导钙激活钾离子通道和小电导钙激活钾离子通道,发现仅阻断 BKca 通道可抑制马钱子碱对起步点自发放电频率的抑制作 用。结论 马钱子碱在外周具有镇痛作用,并且 BKca 能够阻断其作用,表明 BKca 参与马钱子碱在外周的镇痛作用。

新化合物L11与Sigma-1受体结合的特性及其镇痛药效学实验研究

目的:研究新化合物L11对Sigma-1受体的亲和力、受体功能的影响及其镇痛效果,为其药效评价提供参考。方法:采用体外受体结合和功能实验以及体内的小鼠福尔马林模型和大鼠慢性坐骨神经压迫损伤(chronic constriction injury,简称CCI)模型实验,分别测定和分析L11对Sigma-1受体的抑制率、功能和福尔马林模型小鼠的舔足时间、CCI模型大鼠机械痛阈值的影响。结果:L11对Sigma-1受体的抑制率和Ki值分别为103.07%和4.81 nmol/L,加入苯妥英(Sigma-1受体变构调节剂)后的Ki值为8.10 nmol/L;与模型组比较,L11可显著减少小鼠的Ⅱ相舔抬足时间(P<0.01),增加了大鼠的机械痛阈值(P<0.01),对大鼠自主活动无明显影响。结论:新化合物L11对Sigma-1受体具有较高的亲和力,属于Sigma-1受体的拮抗剂,对小鼠福尔马林模型和大鼠CCI模型有明显的镇痛作用,其机制可能是通过Sigma-1受体而发挥镇痛作用。

和厚朴酚对神经病理性疼痛小鼠背根神经节TTX-R钠电流的影响

目的在小鼠坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)模型上,观察和厚朴酚(Honokiol,Hon)对急性分离的背根神经节(DRG)细胞河豚毒素不敏感型(TTX-R)钠电流的作用,探讨其镇痛机制。方法应用CCI方法诱导神经病理性疼痛,全细胞膜片钳技术记录钠电流。结果与正常组比转,CCI模型使TTX-R钠电流明显增加,激活曲线向左偏移4.8 m V,不改变稳态失活曲线。Hon 30 M明显抑制CCI模型TTX-R钠电流的幅度,使激活曲线恢复趋向正常范围,失活曲线较CCI组向左偏移8.9 m V。结论 Hon对CCI模型增加的TTX-R钠电流有抑制作用,并影响其动力学特征。

不同体表刺激对CCI大鼠环跳、阳陵泉穴区5-HT、CGRP、NPY的影响

目的:通过观察不同体表刺激方式对坐骨神经痛大鼠环跳、阳陵泉穴区局部皮肤组织相关化学物质5-羟色胺(5-HT)、神经肽Y(NPY)、降钙素基因相关肽(CGRP)的影响,初探电针、艾灸、刮痧治疗坐骨神经痛的生物学机制。方法:将35只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针+模型组、艾灸+模型组、刮痧+模型组,每组7只,造模第3天选取大鼠左后肢环跳、阳陵泉穴,分别按组进行电针、艾灸、刮痧干预,以4%甲醛灌流固定,取穴区局部皮肤组织进行组织形态学检测。结果:环跳穴区局部皮肤组织的表皮层、真皮层均有5-HT阳性标记,阳陵泉穴区局部皮肤组织表皮层、真皮层、皮下组织均有5-HT阳性标记,其在表皮下与真皮浅层形成与表皮平行的不连续细胞带,在真皮深层主要分布在毛囊、腺体、血管周围,在皮下组织主要聚集在血管旁。与空白组比较,模型组环跳、阳陵泉穴区5-HT阳性标记均显著升高(P<0.05);与模型组比较,各治疗组环跳、阳陵泉穴区5-HT阳性标记均显著减少(P<0.05)。NPY主要以串珠形式分布在环跳穴区局部皮肤组织的真皮深层绕毛囊或血管分布。与空白组比较,模型组NPY阳性表达纤维显著减少(P<0.05);与模型组比较,各治疗组NPY阳性表达纤维显著增多(P<0.05)。阳陵泉穴区局部皮肤组织中CGRP主要呈串珠样,在真皮浅层接近表皮部位呈现游离状态,真皮层深部及皮下组织绕血管分布,与空白组比较,模型组CGRP阳性表达纤维显著增多(P<0.05);与模型组比较,各治疗组CGRP阳性表达纤维显著减少(P<0.05)。结论:电针、艾灸、刮痧均可使坐骨神经痛大鼠穴区局部皮肤组织中5-HT、NPY、CGRP表达向着正常水平方向逆转,表明5-HT、NPY、CGRP参与了坐骨神经治疗,其可能是针刺、艾灸、刮痧治疗坐骨神经痛的共同物质基础。