沙利度胺影响肿瘤坏死因子受体表达对大鼠慢性坐骨神经缩窄的镇痛效应

目的比较不同剂量下沙利度胺影响肿瘤坏死因子受体(TNFR)表达水平对大鼠慢性坐骨神经缩窄(CCI)镇痛效果及其潜在临床价值。方法 50只大鼠随机分为S组、C组、L组、M组及H组,S组为假手术组,其余4组建立CCI模型,术后分别用20、50、100 mg/kg沙利度胺处理为L组、M组、H组,余为C组,于术后第1、2、3及4周测量机械性痛阈与热痛阈并运用重复测量方差分析各组差异;蛋白质印迹法(Western印迹)及实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)(Q-PCR)分析4组TNFR基因表达产物相对含量,比较各组TNFR mRNA和蛋白表达差异;运用Pearson相关性分析显示沙利度胺浓度与TNFR mRNA相对表达间的关系。结果与S组相比,4组术后机械性痛阈、热痛阈均显著下降(P<0.05);与C组比较,L组、M组与H组术后机械性痛阈、热痛阈呈上升趋势(P<0.05),H组显著高于M组(F机械性痛阈=6.432,P机械性痛阈=0.000;F热痛阈=5.445,P热痛阈=0.000),而M组显著高于L组(F机械性痛阈=8.045,P机械性痛阈=0.000;F热痛阈=5.673,P热痛阈=0.000);相对于C组,L组、M组、H组术后第4周TNFR1 mRNA及蛋白相对含量显著下降(P<0.05),其中H组下降最为明显,M组次之;Pearson相关性分析显示:沙利度胺浓度增加与TNFR1表达升高呈明显负相关(r=-0.497,P=0.036)。结论沙利度胺可能通过影响TNFR表达对CCI大鼠产生镇痛效应,其镇痛效应随剂量增加而加强,有望作为神经病理性疼痛的辅助镇痛药物之一。

卡马西平联合吗啡对慢性坐骨神经缩窄损伤模型大鼠的镇痛作用研究

目的:研究卡马西平联合吗啡对慢性坐骨神经缩窄损伤(CCI)模型大鼠的镇痛作用。方法:取大鼠行手术建立CCI模型,建模成功后随机分为模型组、卡马西平组(5mg·kg-1)、吗啡组(3mg·kg-1)和联用组(卡马西平5mg·kg-1+吗啡3mg·kg-1),每组16只,术后第8天分别注射相应药物,连续5d,同时设立假手术组进行比较,观察各组大鼠术后和给药过程中有无感染、自残等现象,检测给药前和给药第1、3、5天以及停药2d后机械缩足反射阈值(PWMT)和热辐射缩足反射潜伏期(PWL)变化。结果:所有大鼠术后和给药期间均无感染和自残等现象;与假手术组比较,模型组大鼠给药前和给药后各时间点的PWMT、PWL均明显减弱或缩短(P<0.01);与吗啡组比较,联用组大鼠给药后各时间点的PWMT、PWL均明显增强或延长(P<0.05或P<0.01);与给药前比较,联用组大鼠给药后各时间点的PWMT、PWL均明显增强或延长(P<0.01),卡马西平组和吗啡组大鼠停药2d后的PWMT、PWL均无明显变化。结论:卡马西平联合吗啡能明显减弱CCI模型大鼠的机械痛和热痛反应,延长吗啡作用时间,改善吗啡耐受。

不同浓度沙利度胺对大鼠慢性坐骨神经缩窄模型的镇痛效果及机制

目的:比较不同剂量沙利度胺对大鼠慢性坐骨神经缩窄(chronic sciatic nerve constriction,CCI)的镇痛效果及可能机制。方法:将50只大鼠随机分为S组、C组、L组、M组及H组,S组作为假手术组,其余四组建立CCI模型,术后分别用20 mg/kg、50mg/kg、100 mg/kg沙利度胺处理L组、M组、H组。于术后第1、2、3、4周测量和比较各组大鼠机械性痛阈与热痛阈,采用蛋白质印迹法(Western blot)及实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测各组大鼠肿瘤坏死因子受体(TNFR)的mRNA和蛋白表达,并分析沙利度胺浓度与TNFR mRNA相对表达的相关性。结果:S组术前术后的机械性痛阈与热痛阈均无明显改变(P>0.05),其余四组术后痛阈均较术前明显下降(P<0.05);C组术后第4周时机械性痛阈明显升高(P<0.05),而术后其他时间点的机械性痛阈与热痛阈无明显差异(P>0.05);L组、M组、H组术后机械性痛阈、热痛阈随时间的延长呈上升趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。术后,C组机械性痛阈与热痛阈对比S组明显降低(P=0.000),亦显著低于L组(P=0.000);而不同剂量组机械性痛阈、热痛阈相比,H组高于M组(P=0.000),M组高于L组(P=0.000)。相对于C组,L组、M组、H组术后第4周TNFR1 mRNA及蛋白相对含量显著下降(P<0.05),其中H组下降最为明显,M组次之。Pearson相关性分析结果显示:沙利度胺浓度的增加与TNFR1表达水平的升高呈明显负相关关系(r=-0.497,P=0.036)。结论:沙利度胺可能通过影响TNFR表达水平对大鼠慢性坐骨神经缩窄发挥镇痛效应,其镇痛效应随剂量增加而加强,有望作为神经病理性疼痛的辅助镇痛药物之一。

脉冲射频对坐骨神经慢性缩窄大鼠坐骨神经超微结构的影响

目的:应用透射电镜观察脉冲射频(pulsed radiofrequency,PRF)对坐骨神经慢性缩窄模型(chronic constriction injury,CCI)大鼠超微结构的影响。方法:15只雄性大鼠,随机分为三组(每组5只):正常对照组(control组),模型组(CCI组)和治疗组(CCI+PRF组)。透射电镜观察坐骨神经超微结构改变。结果:模型组可见髓鞘被严重损伤,轴索溶解或偶见残存的线粒体,雪旺氏细胞形成异染色质,同时可见大量新生的有髓神经纤维。治疗组,可见部分髓鞘外形不规则,板层结构节段性模糊、松散,并有髓鞘球形成。与模型组相比,治疗组神经纤维有明显的修复。结论:脉冲射频改善坐骨神经慢性缩窄大鼠坐骨神经的超微结构。

三种大鼠神经病理性疼痛模型的制备和效果比较

目的比较慢性坐骨神经缩窄损伤(CCI)、脊神经结扎(SNL)、保留性神经损伤(SNI)三种神经病理性疼痛模型产生疼痛的效果.方法选择150～200 g的SD大鼠19只,随机分为四组(对照组、CCI组、SNL组、SNI组),对照组(n=4)切开左后肢皮肤和肌肉,暴露坐骨神经后立即缝合,CCI组(n=4)、SNL组(n=4)和SNI组(n=7)分别于左后肢制作CCI、SNL、SNI疼痛模型.术前3 d至术后11 d隔日使用机械和热辐射刺激测定术侧后趾,比较它们对疼痛刺激的反应差异.结果CCI、SNL、SNI疼痛模型50%缩爪阈值于手术7 d后趋于平稳,各组内相比差异无显著性(P＞0.05).术后7 d对照组、CCI组、SNL组、SNI组50%缩爪阈值分别为(14.13土1.49)、(2.55±0.47)、(1.52±0.58)和(0.79±0.36)g,大小依次为对照组＞CCI组＞SNL组＞SNI组,差异有显著性(P＜0.05).CCI组对热辐射刺激的缩腿潜伏期的差异性评分低于对照组,差异有显著性(P＜0.05);但SNL组和SNI组对热辐射刺激的缩腿潜伏期的差异性评分与对照组相比差异无显著性.CCI组、SNL组、SNI组对热辐射刺激所产生的抬腿时间均高于对照组,差异有显著性(P＜0.05).结论SNI疼痛模型不仅制作简单,而且效果优于SNL、CCI模型,并仅对机械刺激敏感.

神经病理性疼痛大鼠脊髓IL-33蛋白表达的变化

目的：观察外周神经慢性压榨性损伤（chronic constrictive injury,CCI）大鼠脊髓白介素-33（interleukin-33,IL-33）表达的变化规律。方法：雄性Wistar大鼠60只,分为手术组和假手术组,每组30只,于CCI前1天、CCI后第1、4、7、14、21天各时间点测定机械痛阈及热痛阈后立即处死大鼠,每个时间点5只,取L4~6脊髓,采用Western blot方法测定IL-33的蛋白表达变化。结果：手术组大鼠术侧机械痛阈及热痛阈明显降低,脊髓IL-33水平表达增加,明显高于对侧和假手术组术侧;IL-33蛋白水平于CCI后第1天开始增加,第7天达到高峰（P〈0.01）,于CCI后第21天仍维持于较高水平（P〈0.05）。结论：CCI致大鼠脊髓IL-33活化,参与神经病理性疼痛的调控过程。

普瑞巴林可通过抑制TRPV1以缓解神经病理性疼痛

目的探讨普瑞巴林(pregabalin,PGB)缓解神经病理性疼痛的潜在机制。方法构建常用的神经病理性疼痛模型——大鼠慢性坐骨神经缩窄损伤模型(chronic constriction injury,CCI),给予PGB或瞬时阳离子通道亚家族V成员1蛋白受体(the transient receptor potential cation channel subfamily V member 1,TRPV1)的抑制剂辣椒平(capsazepine,CPZ)或TRPV1的激动剂辣椒素(capsaicine,CP)以观察PGB的镇痛效果。运用免疫组化和免疫印迹法检测与疼痛正相关的TRPV1蛋白在CCI大鼠脊髓中的表达。结果PGB和TRPV1的抑制剂CPZ都能有效地提高CCI大鼠模型的痛阈(P<0.05),CPZ+PGB和CPZ的镇痛作用差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化和免疫印迹结果均显示PGB可减低CCI模型大鼠脊髓中TRPV1蛋白的表达。同时给予PGB和TRPV1激动剂CP干预CCI大鼠后,CCI+PGB+CP组痛阈低于CCI+PGB组(P<0.05),且与CCI组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论PGB可通过抑制TRPV1蛋白的表达而缓解神经病理性疼痛。

电针对小鼠分级坐骨神经压迫模型脊髓相关炎性细胞因子表达的影响

目的:观察电针治疗对分级坐骨神经压迫模型小鼠的镇痛效应和脊髓炎性细胞因子表达的影响。方法:将雄性C57/BL6小鼠随机分为假手术组(N0)、结扎一道组(N1)与一道电针组(N1+E)、结扎两道组(N2)与两道电针组(N2+E)、结扎四道组(N4)与四道电针组(N4+E)。N0组只游离神经,不作任何结扎;其余各组用分级坐骨神经结扎法建立动物模型,其中N1+E、N2+E和N4+E组分别取双侧环跳、足三里穴进行电针治疗,均隔日1次,共7次。在术前和术后第2、4、6、8、10、12、14天测定小鼠右后爪机械痛阈值;术后第14天取腰段脊髓,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定脊髓白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度。结果:与N0组比较,各手术组小鼠的机械痛阈值在造模后随时间变化而呈下降趋势,其中N1、N1+E组在术后第6天起明显降低(P<0.05),N2、N2+E、N4、N4+E组在术后第4天起显著降低(P<0.05)。与N1组比较,电针可明显提高N1+E组的术后机械痛阈值(P<0.05);但与N2和N4组比较,电针对N2+E和N4+E组的机械痛改变不明显(P>0.05)。与N0组比,N1、N2、N4组脊髓IL-1β、IL-6、TNF-α表达均显著上调(P<0.05);与N1组比较,N1+E组的IL-1β、IL-6、TNF-α表达均显著降低(P<0.05);与N2组比较,N2+E组仅IL-1β的表达下调(P<0.05);与N4组比较,N4+E组各炎性因子均无明显改变(P>0.05)。结论:电针可部分减轻小鼠分级坐骨神经缩窄模型引起的痛觉过敏,并不同程度降低脊髓IL-1β、IL-6和TNF-α的表达。

如意珍宝丸对慢性神经源性疼痛大鼠炎症因子水平的影响

目的观察如意珍宝丸对坐骨神经慢性缩窄损伤(chronic constriction injury,CCI)模型大鼠慢性神经病理性疼痛的保护作用及炎症因子水平的影响。方法经热缩腿反射潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)检测合格的雄性SD大鼠,麻醉后手术分离坐骨神经主干,4-0含铬肠线环绕结扎坐骨神经三支分叉近端4次,每结间隔约1 mm,复制慢性神经病理性疼痛模型,选择建模成功的大鼠45只,随机分为5组,每组9只,分别为模型组,如意珍宝丸低(0.5g·kg^-1)、中(1.5 g·kg^-1)、高剂量组(4.5 g·kg^-1),罗通定组(18 mg·kg^-1),并设置假手术对照组,按15 mL·kg-1给药体积,每日1次,连续灌胃给药10 d。在第5,7,10天给药30 min后测定TWL。末次给药次日,腹主动脉采血,检测细胞因子水平。结果与模型组比较,给药10 d后如意珍宝丸低、中、高剂量组,罗通定组大鼠TWL明显延长,血清IL-10含量明显降低;如意珍宝丸高剂量组、罗通定组大鼠血清中TNF-α含量明显降低。结论如意珍宝丸可能通过调节炎症因子水平,减轻疼痛炎症级联反应,抑制中枢神经敏化,而对坐骨神经CCI大鼠慢性神经源疼痛起到一定的保护作用。

σ_(1)和μ受体双靶点新型镇痛小分子的研究

目的设计并合成σ_(1)和μ受体双靶点小分子化合物,初步考察其对大鼠慢性坐骨神经缩窄(CCI)的镇痛效果。方法以间位被取代的溴苯为原料,经过C-N偶联、还原胺化反应制得目标化合物Ⅰa~Ⅰc。将110只SD大鼠随机均分为11组(空白对照组、阳性对照组、9个实验组),分别于左后肢制作CCI模型。术后7 d用二甲基亚砜处理空白对照组,用双氯芬酸钠处理阳性对照组,分别用低、中、高剂量的目标化合物Ⅰa~Ⅰc处理实验组。于给药前、后各时间点测量并比较各组大鼠的机械性痛阈,分析不同结构和剂量目标化合物对镇痛效果的影响。结果与结论合成了目标化合物Ⅰa~Ⅰc,并通过NMR、ESI-MS确证了结构。与给药前比较,二甲基亚砜对大鼠的机械性痛阈无显著影响,而实验组的机械性痛阈均有所升高,随着给药剂量的增大,镇痛效果也增强,但超过一定限度时镇痛效果增强不明显。化合物Ⅰa、Ⅰb分别于中、低剂量条件下显示出较Ⅰc更好的镇痛活性,为进一步改造双靶点神经镇痛药物提供了依据。

新型哌啶芳酰胺类镇痛小分子的合成及初步活性评价

目的设计并合成一系列新型镇痛小分子,初步考察目标化合物对大鼠慢性坐骨神经缩窄(CCI)的镇痛效果。方法基于σ_(1)和μ受体双靶点镇痛活性化合物Ⅶ的结构改造,以不同基团取代的苯胺为原料,通过Wittig-Horner、氢化还原、羰基还原、亲核取代等反应得到目标产物Ⅰ。建立CCI疼痛模型,分别于给药前、后各时间点测量并比较各组大鼠的机械性痛阈,初步分析不同结构对镇痛效果的影响。结果与结论合成了3个目标化合物Ⅰ,并用NMR、ESI-MS确证了结构。与给药前比较,空白组大鼠的机械性痛阈无显著影响,而实验组及对照组大鼠的机械性痛阈均有提升;与对照组比较,各实验组大鼠的镇痛效果无明显差异;与空白组比较,差异有统计学意义。