丙泊酚通过调节脊柱GluN2B-p38 MAPK/EPAC1通路减轻慢性收缩损伤引起的神经性疼痛的大鼠模型研究

目的探讨丙泊酚减轻慢性收缩损伤(CCI)引起的神经性疼痛的分子作用机制。方法12只大鼠通过结扎坐骨神经构建CCI的模型,然后根据丙泊酚注射剂量分为:模型组(CCI大鼠,皮下注射0.9%氯化钠溶液)、丙泊酚A组(CCI大鼠,皮下注射10 mg/kg丙泊酚)、丙泊酚B组(CCI大鼠,皮下注射20 mg/kg丙泊酚)和丙泊酚C组(CCI大鼠,皮下注射40 mg/kg丙泊酚),每组3只。另取3只大鼠进行假手术,即仅暴露坐骨神经,不进行结扎(假手术组,皮下注射等量0.9%氯化钠溶液)。连续注射14 d后,采用疼痛行为测量法测定各组大鼠疼痛行为变化;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测了上述分组大鼠的背根神经节(L_(4)~L_(6))的白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)炎性因子水平;采用蛋白质印迹(Western blotting)法检测了假手术组、模型组和丙泊酚C组的大鼠背根神经节(L_(4)~L_(6))的EPAC1的相对表达水平,以及p-GluN2B,痛觉相关因子p-ERK、p-JNK和p-p38的磷酸化水平。结果与假手术组相比,模型组疼痛行为和痛觉敏感明显加重,大鼠背根神经节(L_(4)~L_(6))的IL-6、IL-1β和TNF-α炎性因子水平显著升高,在给大鼠皮下注射不同剂量的丙泊酚(10、20、40 mg/kg)后,大鼠的疼痛行为和痛觉敏感随着给药丙泊酚剂量的增加显著缓解,差异有统计学意义(P<0.05)。与假手术组相比,模型组和丙泊酚C组EPAC1和4种因子的磷酸化水平均显著上升,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,丙泊酚C组EPAC1和4种因子的磷酸化水平均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论丙泊酚镇痛的分子作用机制为降低脊柱EPAC1的表达水平,并降低脊柱GluN2B-p38 MAPK信号通路的磷酸化水平。

GDNF在慢性收缩性损伤大鼠脊髓背根神经节中的蛋白表达

目的探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)在慢性收缩性损伤(CCI)所致神经病理性疼痛大鼠的L4背根神经节中的蛋白表达。方法实验1:24只SD大鼠,随机分为正常组(Naive组)、假手术组(Sham组)和CCI组(每组n=8)。Naive组不做任何手术;Sham组仅暴露坐骨神经;CCI组按Bennett法结扎右侧坐骨神经主干制备CCI模型。分别测定Sham组和CCI组术前2天(基础值)及术后第1、3、5、7、14、21天(Naive组则在相对应的时间点)大鼠同侧(本实验为右侧)后足机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(PWL)。实验2:18只SD大鼠随机分为正常组(Naive组)、假手术组(Sham组)和CCI组(每组n=6)。CCI组制备CCI模型,术后第7天处死大鼠,取同侧L4背根神经节;Naive组不做任何手术,直接取右侧L4背根神经节;Sham组仅暴露坐骨神经,术后第7天处死大鼠,直接取右侧L4背根神经节。采用Western blot法检测脊髓L4背根神经节GDNF的蛋白表达。结果实验1:与Sham组相比,CCI组大鼠从术后第3天开始至术后21天内各时间点MWT和PWL均显著降低(P<0.05或P<0.01)。实验2:与Sham组相比,CCI组在L4背根神经节的GDNF表达明显减少(P<0.01)。结论CCI大鼠的L4背根神经节的GDNF表达减少,可能参与CCI所致神经病理性疼痛的发病机制。

连续小剂量吗啡腹腔注射对CCI大鼠抗伤害效应的实验研究

目的观察坐骨神经慢性收缩损伤(CCI)后小剂量吗啡连续腹腔注射对大鼠痛敏的影响,以及脊髓背角c-fos基因及TrkA受体表达,探讨吗啡耐受的可能机制.方法选择雌性SD大鼠40只,随机分为4组,A组:假手术组,B组:CCI组,C组:CCI+生理盐水组,D组:CCI+吗啡组[5 mg/(kg·d)],分别于术前2 d,术后7、14 d进行热痛阈测试,免疫组织化学方法检测术后7、14 d c-fos基因及TrkA受体的表达.结果 A组术后术侧热痛阈轻度下降,与术前相比差异无显著性意义.B、C、D组术后术侧呈现不同程度热痛阈下降,以术后14 d为著,B、C组与A组相比,差异均有极显著性意义(均P<0.01),D组与A组相比,差异有显著性意义(P<0.05).CCI术后14 d脊髓c-fos基因、TrkA受体的表达较术后7 d明显增加,c-fos基因的表达主要集中于脊髓背角表层Ⅰ～Ⅱ、Ⅲ～Ⅳ层的中间内侧部,TrkA受体分布于Ⅱ～Ⅴ层.c-fos基因、TrkA受体的表达在B、C、D 3组与A组相比,差异具有显著性意义(P<0.05);D组与B组相比,差异无显著性意义(P>0.05).结论小剂量吗啡连续腹腔注射不能有效抑制坐骨神经损伤后热痛觉过敏及脊髓背角c-fos基因、TrkA受体的表达,可能与长时间使用吗啡导致脊髓背角神经元兴奋性进一步升高,发生中枢可塑性改变,以及脊髓背角神经元μ-阿片受体脱敏感有关.

吗啡对非伤害性刺激后CCI大鼠脊髓c-fos表达的影响

目的 观察慢性坐骨神经收缩损伤 (CCI)大鼠触摸刺激后机械痛阈和热痛阈的变化 ,以研究吗啡 (2mg/kg)腹腔注射后对非伤害性刺激后脊髓后角c fos表达的影响 ,探讨脊髓痛觉调控机制。方法 选择雌性SD大鼠 30只 ,随机分为假手术组、CCI组和吗啡组 ,分别于术前 2d、术后 4、7、14d给予机械痛阈和热痛阈测试。大鼠处死前 3h给于非伤害性触摸刺激 ,处死后取脊髓切片 ,免疫组织化学方法检测c fos表达。结果 CCI组和吗啡组大鼠坐骨神经结扎 4d后均呈现不同程度的痛觉过敏 ,以术后 14d为甚 ,触摸刺激导致的脊髓c fos的表达明显增加 ,主要集中分布于脊髓背角表层Ⅰ～Ⅱ层的中间内侧部 ,Ⅴ～Ⅹ层也有一定程度增多。 2mg/kg腹腔注射不能有效的阻断慢性缩神经损伤大鼠痛觉过敏。吗啡组与CCI组相比c fos的表达无明显减少 ,两组相比差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。结论 2mg/kg吗啡腹腔注射不能有效抑制非伤害性刺激诱发痛觉过敏以及脊髓背角c fos的表达 ,可能与吗啡用药途径和用量过小有关 。

连续小剂量吗啡腹腔注射对CCI大鼠抗伤害效应的实验研究

目的：观察坐骨神经慢性收缩损伤(CCI)后小剂量吗啡(5mg·kg^-1)连续腹腔注射对大鼠痛敏的影响，以脊髓后角C—fos及TrkA受体表达的改变为观测指标，探讨吗啡耐受可能的脊髓机制。方法：选择雌性SD大鼠40只，随机分为4组，A组：假手术组，B组：CCI组，Cd组：CCI+生理盐水组，D组：CCI+吗啡组(5mg·kg^-1·d^-1×14d)，分别于术前2d，术后7d、14d给予热痛阈测试，免疫组织化学方法检测C—fos及TrkA受体的表达。结果：①A组术后术侧热痛阈轻度下降，与术前相比差异无显著性，P>0．05。B、C、D组术后术侧呈现不同程度热痛阈下降，术后14d降至最低点，B组、C组与A组相比，差异具有极显著性，P<0．01，D组与A组相比，差异具有显著性，P<0．05。②CCI术后14d脊髓C—fos、TrkA受体的表达较术后7d明显增加，C—fos的表达主要集中于脊髓背角表层I～Ⅱ、Ⅲ～Ⅳ层的中间内侧部，TrkA受体分布于Ⅱ-Ⅳ层。C—fos、TrkA受体的表达在B、C、D三组与A组相比，差异具有显著性，P<0．05。连续小剂量吗啡腹腔注射不能有效的减少坐骨神经慢性收缩损伤大鼠热痛觉过敏程度及脊髓C—fos、TrkA受体的表达，与CCI组(B组)相比，差异无显著性，P>0．05。结论：小剂量吗啡(5mg·kg^-1)连续腹腔注射不能有效抑制坐骨神经损伤后热痛觉过敏及脊髓背角C—fos、TrkA受体的表达，可能是由于长时间使用吗啡导致脊髓背角神经元兴奋性进一步升高，发生中枢可塑性改变，以及脊髓背角神经元μ-阿片受体脱敏感有关。