雌马酚对慢性束缚致抑郁小鼠模型的改善作用及机制研究

为探究雌马酚(S-equol,Eq)对慢性束缚抑郁模型(Chronic Restraint Stress,CRS)小鼠的改善作用,试验设空白组(Con)、模型组(CRS)、雌马酚低剂量组(Eq-L,10 mg·kg^(-1))、雌马酚中剂量组(Eq-M,20 mg·kg^(-1))和雌马酚高剂量组(Eq-H,40 mg·kg^(-1))共5组处理。预防给药14 d后,对模型组和雌马酚组进行28 d、10 h·d^(-1)的慢性束缚。通过体重监测、空场、糖水偏爱和悬尾试验,研究慢性束缚应激和雌马酚对小鼠的影响;检测血清中皮质酮(CORT),皮层中白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和过氧化氢酶(CAT)水平,探究雌马酚的抗抑郁作用机制。行为学结果显示:与空白组相比,CRS模型组的自主活动能力未受到显著影响(P>0.05),但体重和糖水偏爱指数显著下降(P<0.001),悬尾中的不动时间显著延长(P<0.01)。与模型组相比,雌马酚亦未对小鼠的自主活动造成显著影响(P>0.05),但显著升高小鼠的糖水偏爱指数并缩短悬尾不动时间(P<0.05)。此外,CRS模型组小鼠血清中CORT显著上调(P<0.001),皮层中IL-6、IL-1β、TNF-α和MDA显著升高(P<0.05),NE、DA、SOD和CAT水平显著降低(P<0.05),而雌马酚预给药显著改善上述异常的指标。研究表明雌马酚可通过抑制下丘脑-垂体-肾上腺轴的过度亢进、抑制神经炎症、上调神经递质和平衡氧化应激发挥改善抑郁的作用。

慢性束缚抑郁症小鼠模型的癫痫诱发实验

目的观察抑郁症模型小鼠对癫痫诱发条件的敏感性。方法采用随机数字表法将雄性C57BL/6J小鼠随机分为慢性束缚(CRS)组(建立CRS抑郁小鼠模型)和正常对照(NC)组,采用糖水偏爱实验和强迫游泳实验评估抑郁症模型的建立情况。分别给两组小鼠经腹腔注射海人酸,通过视频记录小鼠的癫痫发作行为,包括:起始时间、癫痫发作评分、癫痫发作次数和癫痫发作的持续时间,并在两组间进行比较。结果 CRS组小鼠在水中的不动时间为(120. 9±13. 5) s,明显长于NC组的(59. 1±9. 8) s (t=3. 700,P=0. 0019,);在0～24 h和0～48 h的糖水消耗比例分别为(64. 7±4. 7)%和(73. 3±3. 0)%,明显低于NC组的(77. 2±2. 5)%(t=2. 672,P=0. 0167)和(83. 0±2. 8)%(t=2. 386,P=0. 0297)。CRS组小鼠的起始时间为(138±26) s,明显短于NC组小鼠的(234±28) s (t=2. 485,P=0. 0274);两组小鼠的癫痫总发作次数差异无统计学意义[(11. 5±1. 1)次比(13. 7±2. 1)次; t=0. 9767,P=0. 3465];CRS组小鼠的癫痫发作评分为(66±10)分,明显高于NC组的(37±5)分(t=2. 777,P=0. 0157); CRS组小鼠的癫痫发作持续时间为(61±16) min,明显长于NC组的(37±5) min (t=3. 342,P=0. 0053)。结论在相同剂量海人酸注射下,CRS抑郁症小鼠具有更加严重的癫痫发作表型。

乳铁蛋白在大鼠坐骨神经慢性束缚损伤模型产生镇痛作用

目的:研究乳铁蛋白在大鼠坐骨神经慢性束缚损伤模型的镇痛作用。方法:30只成年SD大鼠被制作为坐骨神经慢性束缚损伤模型,用辐射热刺激法诱发鼠后腿回缩试验测定痛阈,实验动物分为5组,分别腹腔注射生理盐水及乳铁蛋白30mg/kg、100mg/kg、300mg/kg、1000mg/kg。药物效应以最大可能效应百分数(MPE%)表示。以t检验法分析乳铁蛋白各剂量组与对照组之间的差异。结果:腹腔注射乳铁蛋白剂量依赖性地延长大鼠后腿回缩潜伏期;乳铁蛋白的峰值作用时间在用药后60分钟;乳铁蛋白各剂量组的最大可能效应百分数与生理盐水组相比差异有显著性。结论:腹腔注射乳铁蛋白在大鼠坐骨神经慢性束缚损伤模型产生剂量依赖性镇痛作用。

大鼠慢性束缚应激后肠道病理及其菌群变化

基于慢性束缚应激法建立大鼠慢性应激模型,结合苏木精-伊红染色和肠道细菌基因间重复序列(enterobacterial repetitive intergenic consensus,ERIC)-PCR技术观察大鼠肠道组织病理及菌群变化规律。选取10只健康雄性sprague-dawley(SD)大鼠,随机分为对照组和模型组,每组5只。对照组正常饲养,模型组采用束缚筒每天束缚应激4 h,连续造模30 d,造模前后记录大鼠的体重并于造模后进行行为学评估,采用脱臼法处死并收集大鼠肠道组织及其内容物,包被切片后进行HE染色,肠道内容物初步分离后提取基因组DNA并采用ERIC-PCR检测菌群变化规律。结果显示,与对照组相比,应激模型组大鼠体重、穿越次数、直立次数、理毛次数均显著降低,强迫游泳不动时间显著延长、糖水偏爱显著降低;造模后大鼠肠道微绒毛结构破损严重,细胞核轻微固缩且深染,肠道菌群变化明显,出现了多个特征性变化条带。采用慢性束缚应激法并结合行为学评估成功建立了大鼠慢性应激模型,结合病理学检测和肠道菌群表达谱变化为基于慢性应激相关疾病的研究提供了重要参考,具有一定的应用价值。

滋水清肝饮对慢性束缚应激抑郁小鼠皮层ERK/CREB/BDNF通路及肠道菌群的影响

目的 通过细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cyclic adenosine monophosphate response binding protein,CREB)/脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)信号通路及肠道菌群探究滋水清肝饮对慢性束缚应激制备的小鼠抑郁模型的干预作用。方法 除对照组外,建立慢性束缚应激模型,造模21 d后根据糖水偏好实验结果随机分成模型组、盐酸氟西汀(0.01 g/kg)组和滋水清肝饮低、中、高剂量(8.835、17.670、35.340 g/kg)组。每周给药结束后进行糖水偏好实验及行为学实验。苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠全脑及结肠病理变化;免疫荧光染色检测海马小胶质细胞标志物离子钙结合衔接分子-1(ionized calcium binding adapter molecule-1,Iba-1)荧光强度;检测小鼠血清中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)、促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin releasing hormone,CRH)、皮质酮(corticosterone,CORT)水平;检测小鼠前额叶皮层中SOD活性及BDNF、5-HT、MDA水平;通过16S rRNA基因测序检测小鼠结肠肠道内容物的组成和结构;检测小鼠前额叶皮层组织中ERK1/2、p-ERK1/2、CREB、p-CREB、BDNF蛋白表达。结果 与模型组比较,滋水清肝饮组小鼠糖水偏好率显著升高(P<0.01),悬尾实验和强迫游泳实验不动时间显著缩短(P<0.05、0.01),血清中MDA及ACTH、CRH及CORT含量降低(P<0.05、0.01),SOD活性及5-HT含量升高(P<0.05、0.01);前额叶皮层中BDNF、5-HT含量及SOD活性增加(P<0.05、0.01),MDA含量降低(P<0.01);海马CA1区、皮层及结肠组织中病理情况改善,海马中CA1区Iba-1荧光强度减弱;各给药组肠道菌群中益生菌拟杆菌门、放线菌门、杜氏杆菌属、乳杆菌属、毛螺菌属等丰度增加,有害菌厚壁菌门、变形杆菌门、幽门螺杆菌属等丰度降低;前额叶皮层组织中p-ERK1/2、p-CREB、BDNF蛋白表达均显著升高(P<0.05、0.01)。结论 滋水清肝饮明显改善慢性束缚应激小鼠的抑郁样行为,其机制可能与调控ERK/CREB/BDNF通路及小鼠肠道菌群组成有关。

辅酶Q10通过下调焦亡信号通路缓解抑郁小鼠的抑郁样行为

目的探讨辅酶Q10对慢性应激束缚模型(CRS)抑郁小鼠的神经保护作用及其机制。方法采用慢性应激束缚模型制备抑郁小鼠。将小鼠分为空白组(CON)、CRS组、单用辅酶Q10高剂量组(Q10-H,200 mg/kg)、模型组+辅酶Q10低剂量组(CRS+Q10-L,50 mg/kg)、模型组+辅酶Q10中剂量组(CRS+Q10-M,100 mg/kg)、模型组+辅酶Q10高剂量组(CRS+Q10-H,200 mg/kg)、模型组+caspase-1特异性抑制剂VX765组(CRS+VX765,50 mg/kg)、模型组+氟西汀组(CRS+FLX,10 mg/kg)(n=8)。应用糖水偏好实验、强迫游泳实验、悬尾实验分析小鼠抑郁样行为;采用免疫组化检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性率;高尔基染色检测神经元突触棘数量;免疫印迹实验检测海马脑区GFAP及焦亡相关蛋白的变化;免疫荧光检测神经元与caspase-1 p10的共定位情况。结果与对照组比较,CRS模型组糖水偏好率显著降低、强迫游泳、悬尾不动时间显著增加(P<0.05),辅酶Q10、VX765及FLX可改善上述情况;与对照组比较,CRS模型组海马脑区GFAP阳性率与蛋白表达量显著减少(P<0.05),神经元突触棘显著减少(P<0.001),GSDMD-N、caspase-1、IL-1β表达显著增加(P<0.05),神经元与caspase-1 p10共标显著增加(P<0.001),辅酶Q10可改善上述情况。结论辅酶Q10通过下调焦亡信号通路缓解抑郁小鼠抑郁样行为。

逍遥散对慢性束缚应激抑郁模型大鼠JAK/STAT信号通路的影响

目的:研究逍遥散对慢性束缚应激抑郁模型大鼠杏仁核肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及JAK/STAT信号通路的影响,以期探讨逍遥散抗抑郁的机制。方法:雄性SD大鼠随机分正常组、模型组、氟西汀组和逍遥散组,每组7只。除正常组外,其余各组每天随机时间点束缚3h,连续21d,建立慢性束缚应激抑郁模型。在造模同时,氟西汀组灌胃氟西汀水溶液0.2mg·100g-1·d-1,0.1m L/kg;逍遥散组灌服逍遥散混悬液5.98g·kg^(-1)·d^(-1),0.1m L/kg;模型组灌服等体积去离子水。造模结束后,记录旷场实验中的修饰次数、穿格数和直立次数;ELISA法检测杏仁核TNF-α、gp130、total-Jak2及total-STAT3含量。结果:1修饰次数和穿格数:模型组均少于正常组(P<0.05),而氟西汀组和逍遥散组均多于模型组(P<0.05)。2杏仁核TNF-α、gp130及total-STAT3含量:模型组均高于正常组(P<0.05),而氟西汀组和逍遥散组均低于模型组(P<0.05)。3各组大鼠杏仁核total-Jak2含量比较,差异无统计学意义。结论:逍遥散能够改善慢性束缚应激模型的抑郁样行为,其机制可能与调节杏仁核TNF-α表达及JAK/STAT信号通路有关。

束缚应激模型在凉茶“降火”研究中的应用

目的评价束缚应激模型在凉茶"降火"研究中应用的科学性及适用性。方法急性和慢性应激束缚模型实验,均为雄性Balb/c小鼠40只,随机分为对照组、束缚组、低、中、高3个剂量凉茶组[0.8、2.4、7.2 g/(kg BW)凉茶干膏粉],每组8只。急性应激束缚模型为给药5 d,第5天给药1 h后除对照组外束缚2 h;慢性应激束缚模型为每天给药1 h后除对照组外束缚2 h,共10 d。给予不同时间的处理后,观察小鼠一般行为,记录终体重及肝脏重量,计算肝体比,检测血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶及尿素氮的含量,测量肝脏中丙二醛、一氧化氮、超氧化物歧化酶水平及总抗氧化能力。结果急性和慢性应激束缚模型,血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶及尿素氮含量较对照组均升高(P<0.05或P<0.01);慢性束缚应激模型肝脏丙二醛、一氧化氮水平较对照组升高,超氧化物歧化酶水平及总抗氧化能力较对照组降低(P<0.01)。高剂量凉茶组与慢性束缚组相比,血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶及尿素氮含量均降低(P<0.01);肝脏丙二醛、一氧化氮水平降低,超氧化物歧化酶水平及总抗氧化能力升高(P<0.05或P<0.01)。结论模拟"上火",急性和慢性应激束缚模型均成立,且用于评价凉茶"降火"功效具有科学性和可行性。