慢性间歇性低压低氧对发育大鼠心肌细胞中的L型钙通道的影响

目的探讨慢性间歇性低压低氧(chronic intermittent hypobaric hypoxia,CIHH)对发育大鼠L型钙电流(L-type calcium current,I_(CaL))的影响。方法新生雄性SD大鼠随机被分为:28 d CIHH干预组(CIHH28)、42 d CIHH干预组(CIHH42)、28 d对照实验组(CON28)和42 d对照实验组(CON42)。其中CIHH干预组分别在模拟3000 m海拔高度低压低氧的条件下(P_(B)=525 mmHg,PO_(2)=108.8 mmHg,5 h/d)(1 mmHg=0.133 kPa)干预28 d和42 d。采用全细胞膜片钳技术记录心室肌细胞中的I_(CaL)。结果CON和CIHH组心肌细胞I_(CaL)的峰值电流和电流-电压(I-V)关系曲线差异无统计学意义(P>0.05)。在模拟缺血-复灌(ischemia-reperfusion,I/R)过程中,I_(CaL)峰值降低,I-V曲线向上偏移(P<0.05),但CIHH组心肌细胞中I_(CaL)的变化明显小于CON心肌细胞(P<0.05)。CIHH组的I_(CaL)稳态激活曲线和稳态失活曲线在I/R前后均无显著性变化(P>0.05)。在I/R过程中,CON28和CON42组的I_(CaL)稳态失活曲线向左偏移(P<0.05),而CIHH28和CIHH42组心肌细胞没有变化(P>0.05)。结论CIHH可减轻缺血再灌注损伤对发育大鼠心室肌细胞I_(CaL)的影响。

消痰化瘀利窍方对慢性间歇性低氧小鼠胸主动脉内皮细胞损伤的保护作用

目的:探讨消痰化瘀利窍方(Xiaotan Huayu Liqiao Formula,XHLF)改善慢性间歇性低氧(Chronic Intermittent Hypoxia,CIH)小鼠胸主动脉内皮细胞的损伤作用机制。方法:将24只健康的8周龄雄性C57BL/6N小鼠随机分成常氧组(Con组)、慢性间歇性低氧暴露组(CIH组)、慢性间歇性低氧+消痰化瘀利窍方组(CIH+XHLF组)、常氧+消痰化瘀利窍方组(Con+XHLF组)。CIH组与CIH+XHLF组暴露于间歇性低氧的环境中,CIH+XHLF组和Con+XHLF组每日给予消痰化瘀利窍方灌胃(26.8 g/kg/d),而CIH组与Con组给予同等体积生理盐水,共计处理28 d。采用尾套法监测小鼠血压;HE和Masson染色观察胸主动脉病理改变;检测血清中一氧化氮(NO)、血管内皮生长因子(VEGF)含量;透射电镜观察线粒体形态;Tunel染色观察胸主动脉细胞凋亡情况;免疫组织化学染色检测Cleaved Caspase-3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白表达。结果:与Con组相比,CIH组小鼠血压出现升高(P<0.05);血管内膜不平整,细胞核排列紊乱,弹性纤维减少;血清中VEGF水平升高,NO水平下降(P<0.05);线粒体皱缩、嵴断裂;凋亡水平增加,Cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达减弱(P<0.05)。与CIH组相比,CIH+XHLF组小鼠血压下降(P<0.05),血管内皮功能和损伤改善(P<0.05),血管内皮线粒体损伤改善,凋亡水平下降(P<0.05)。结论:XHLF可能通过抑制凋亡改善CIH暴露引起的胸主动脉血管损伤和功能障碍。

大鼠颈上神经节中Ⅰ组代谢型谷氨酸受体表达及慢性间歇性低氧对其的影响

目的观察Ⅰ组代谢型谷氨酸受体(mGluR1/5)在大鼠颈上神经节(SCG)组织的表达、定位,及慢性间歇性低氧(CIH)对mGluR1/5蛋白水平的影响。方法12只雄性SD大鼠随机分为对照组(Ctrl)和CIH组(CIH),每组6只,模型制作6周。Western blotting检测CIH对mGluR1/5蛋白水平的影响,免疫组织化学法和免疫荧光共定位染色检测大鼠SCG中mGluR1/5的表达及分布。结果mGluR1/5表达于大鼠SCG,mGluR1分布于神经元和小强荧光(SIF)细胞,而在卫星胶质细胞(SGCs)、神经纤维和血管不表达;mGluR5主要分布于神经纤维,少量分布于神经元,而在SIF细胞、SGCs及血管不表达;CIH上调mGluR1/5的蛋白水平(P<0.01)。结论mGluR1和mGluR5均表达于大鼠SCG,但其表达部位有所不同,两者蛋白水平的升高可能参与了CIH诱导的血压升高。

慢性间歇性低压低氧抑制线粒体途径介导的代谢综合征大鼠心肌组织细胞凋亡

目的 证实CIHH（chronic intermittent hypobaric hypoxi-a,CIHH）具有改善代谢综合征（metabolism syndrome,MS）大鼠心肌细胞凋亡的作用,并探讨其机制。方法 10%果糖水喂养SD大鼠（250~300）g42d制备MS模型,检测动脉血压以及空腹血糖、胆固醇、甘油三酯和胰岛素含量,HE染色观察心肌结构,TUNEL染色和caspase-3活性测定检测心肌细胞凋亡,Westernblot检测Bcl-2和Bax的蛋白表达水平。结果 与正常大鼠比较,果糖喂养大鼠表现出明显的高血压、高血糖、高甘油三脂血症、高胆固醇血症和高胰岛素血症,心肌结构损伤。TUENL染色显示凋亡的心肌细胞数量明显增加,心肌组织caspase-3活性明显升高。Bcl-2蛋白表达明显降低,Bax蛋白表达明显上调,Bcl-2/Bax比值明显下降。有意义的是CIHH能够明显改善MS大鼠上述改变。而且,单纯CIHH组大鼠的上述指标与对照组大鼠无差异。结论CIHH能够明显改善MS大鼠心肌细胞凋亡,其作用可能与抑制凋亡的线粒体途径有关。可能为研究MS患者心功能异常的治疗和预防提供新的靶点和思路。

慢性间歇性低压低氧对大鼠免疫功能的影响

目的:本研究应用流式细胞术、免疫组化和电镜等方法探讨慢性间歇性低压低氧(CIHH)对细胞免疫和体液免疫的影响。方法:雄性成年大鼠48只,随机分为4组:对照组(CON),CIHH14 d组(CIHH14)、CIHH28 d组(CIHH28)和CIHH42 d组(CIHH42)。CIHH动物于低压氧舱分别接受14、28和42 d减压低氧(模拟3 000m高原、每天5 h)处理。各组动物分为两部分,分别在常氧和急性低氧(10%O2+90%N2,1 h)条件下,检测动物血液CD3、CD4、CD8淋巴细胞亚群、NK细胞数量,IgG、糖皮质激素(COR)、肾上腺素(EPI)和C-反应蛋白(CRP)含量,测量胸腺、脾脏重量并观察其超微结构变化。结果:①与CON大鼠比较,CIHH14大鼠胸腺指数和脾脏指数明显增加;CIHH28和CIHH42大鼠胸腺指数明显增加;急性低氧导致大鼠胸腺和脾脏淋巴细胞受损,CIHH处理大鼠的损伤较CON大鼠明显减轻。②与CON、CIHH28和CIHH42比较,CIHH14大鼠CD8淋巴细胞明显降低,CD4/CD8比值明显升高,NK细胞明显下降;急性低氧导致CON大鼠CD4淋巴细胞升高,CD8淋巴细胞降低,CD4/CD8比值明显升高,NK细胞增加,而对CIHH28和CIHH42大鼠CD4、CD8淋巴细胞和NK细胞无明显影响。③CIHH与急性低氧对大鼠血液IgG无明显影响。④CIHH14大鼠COR较CON、CIHH28和CIHH42大鼠明显增高;急性低氧使CON大鼠EPI、COR、CRP明显增高,而CIHH各组大鼠急性低氧前后EPI、COR、CRP无明显变化。结论:CIHH对机体免疫功能稳态具有调节作用,其作用与神经-内分泌和糖皮质激素有关。

心肌热休克蛋白在发育大鼠慢性间歇性低压低氧中的心脏保护作用

目的探讨慢性间歇性低压低氧(CIHH)对发育大鼠心脏的保护作用及其热休克蛋白所起的作用。方法新生♂SD大鼠20只,随机分为两组:CIHH处理组(CIHH)和对照组(CON)。CIHH动物(连同母鼠)接受56 d相当于海拔3 000 m的低压低氧处理(5 h/d)。应用导管法描记左心室功能及血液动力学,包括左室峰压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室压力最大变化速率(±LVdp/dtmax)、动脉收缩压(SAP)和心率(HR),并观察急性低氧/复氧对其影响。应用半定量RT-PCR技术检测各组动物心肌热休克蛋白27(HSP27)、热休克蛋白70(HSP70)和热休克蛋白90(HSP90)mRNA的表达。结果①基础状态下,CON组动物与CIHH组动物之间左心室功能和血液动力学无差异(P>0.05);急性低氧/复氧导致发育大鼠LVSP、±LVdp/dtmax、SAP降低,HR减慢(P<0.05),但CIHH大鼠各参数变化明显小于CON动物(P<0.05)。②基础状态下,CIHH动物心肌HSP70 mRNA表达明显高于CON动物(P<0.05);急性低氧/复氧状态下,CIHH动物心肌HSP27和HSP70 mRNA表达高于CON动物(P<0.05)。结论 CIHH可通过促进心肌热休克蛋白27和热休克蛋白70表达,增强发育大鼠心肌抗急性低氧/复氧损伤能力。

慢性间歇性低压低氧对家兔窦房结肾上腺素能受体反应性的影响

目的:通过细胞内记录方法研究慢性间歇性低压低氧(CIHH)对家兔窦房结肾上腺素能受体反应性的影响。方法:新西兰大白兔随机分为对照组(Con)、CIHH14d组(CIHH14)、CIHH28d组(CIHH28)3组。CIHH组动物置于低压氧舱,分别接受14、28d模拟5000米高原的低压低氧处理(6h/d)。制备离体窦房结标本、描记窦房结自律细胞的生物电活动。通过累加给药法,观察不同浓度的β-肾上腺素能受体激动剂异丙肾上腺素(ISO)(0.01、0.1、1μmol/L)和α1肾上腺素能受体激动剂苯肾上腺素(PE)(0.01、0.1、1μmol/L)对家兔窦房结自律细胞动作电位的影响。结果:(1)CIHH对基础状态下窦房结细胞动作电位各参数无明显影响;(2)ISO浓度依赖性增加窦房结细胞动作电位0期最大除极速率(Vmax)、动作电位幅值(APA)、放电频率(RPF)、舒张期自动去极化速率(VDD),对其它参数无明显影响;(3)CIHH处理动物窦房结细胞对ISO的反应性降低;最大浓度ISO(1μmol/L)下,CIHH14和CIHH28组的VDD、RPF、APA和Vmax的增加明显小于对照组(P<0.05);(4)α1肾上腺素能受体激动剂PE(0.01、0.1、1μmol/L)对窦房结细胞动作电位各项参数均无影响。结论:CIHH降低家兔窦房结β肾上腺素能受体反应性,对α1肾上腺素能受体反应性无影响。

慢性间歇性低压低氧对成年和幼年大鼠缺血/再灌注心脏保护作用的比较

目的观察慢性间歇性低压低氧(CIHH)对成年和幼年大鼠心脏缺血/再灌注损伤的保护作用的异同点。方法♂成年和新生Sprague-Dawlay(SD)大鼠随机分为4组:对照28d组(CON28)、对照42d组(CON42)、CIHH处理28d组(CIHH28)和CIHH处理42d组(CIHH42)。间歇性低氧处理组动物于低压氧舱分别接受28d、42d模拟3000米海拔高度(PB=525mmHg,PO2=108.8mmHg)的低压低氧处理,每天5h。对照组动物除了不接受低氧处理外,其它处理均与间歇性低氧组动物相同。应用Langendorff离体心脏灌流技术,给予心脏缺血(停灌30min)/再灌注(复灌60min)处理,记录离体大鼠心脏在不同时期的心功能变化。心功能参数包括左室发展压(left ventricular developing pressure,LVDP)、左室压力最大变化速率(maximum changerate of LVDP,±LVdp/dtmax)、左室舒张末压(left ventricularend di-astolic pressure,LVEDP)、冠脉流量(coronary flow,CF)和心率(heartrate,HR)。结果①对成年大鼠,基础状态和缺血/再灌注状态下CIHH28d组各心功能参数与CON28d组相比差异均无统计学意义。CIHH42d组各心功能参数均好于CON42d组,表现为LVDP、LVEDP、±LVdp/dtmax和CF恢复均增加(P<0.05)。②对幼年大鼠,基础状态下,CIHH大鼠CF较对照大鼠明显增多,其余心功能参数与对照大鼠无差异。CIHH大鼠缺血/再灌注后心脏功能的恢复明显好于对照动物,表现为LVDP、LVEDP、±LVdp/dtmax和CF恢复均增加(P<0.05),且CIHH42d组比CIHH28d组心功能改善更明显。结论CIHH可增强成年和幼年大鼠抗心肌缺血/再灌注损伤的能力,具有明显的心脏保护作用,CIHH42d组保护作用更为明显;CIHH的心脏保护作用有明显的年龄差异,在幼年大鼠更易产生保护作用。

慢性间歇性低压低氧增强丹皮酚舒张大鼠动脉的作用

目的研究慢性间歇性低压低氧(CIHH)对丹皮酚舒张大鼠离体胸主动脉环作用的影响,并探讨其可能的机制。方法♂SD大鼠,随机分为CIHH组和常氧对照组。CIHH大鼠给予28 d相当于海拔5 000米高度,每天6 h的CIHH处理;制备胸主动脉环,将动脉环置于浴槽内,恒温灌流、并记录其舒缩活动。结果 CIHH对去甲肾上腺素(NE)和KCl引起的大鼠离体血管收缩活动无影响;CIHH增强了丹皮酚舒张大鼠离体胸主动脉环的作用;在CIHH组,丹皮酚舒张大鼠离体血管的作用可被心得安、格列苯脲和L-NAME部分阻断,丹皮酚抑制NE诱发的细胞内钙和外钙性收缩,而在正常氧组,未出现格列苯脲的阻断效应和对细胞内钙性收缩的抑制效应。吲哚美辛对丹皮酚舒张正常氧和CIHH大鼠血管的效应均无阻断作用。结论 CIHH增强了丹皮酚舒张大鼠离体胸主动脉环的作用,推测其机制是增强了与正常氧相同的作用机制,还通过激活ATP敏感性K+通道和抑制内钙释放而发挥作用。

抑制髓样细胞触发受体-1(TREM-1)减轻慢性间歇性低氧诱发的模型小鼠动脉粥样硬化

目的探究髓样细胞触发受体-1(TREM-1)在慢性间歇性低氧(CIH)诱发的动脉粥样硬化(AS)中作用。方法将ApoE-/-小鼠随机分为空白组、模型组和实验组。模型组和实验组小鼠饲养于低氧环境,给予高脂饲料喂养;实验组小鼠高脂饲养4周后,腹腔注射TREM-1抑制剂LR12(5 mg/kg),连续干预8周。饲养12周后,检测血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、三酰甘油(TG)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1β)、白细胞介素10(IL-10)水平;组织学分析主动脉TREM-1表达、斑块面积及巨噬细胞水平。结果与空白组相比,模型组小鼠主动脉TREM-1表达量显著升高(P<0.05)。相比于模型组,实验组小鼠主动脉斑块显著减少,血清血脂(TC、LDL、TG)及炎性因子(TNF-α、IL-1β、IL-10)水平显著降低,主动脉斑块及斑块浸润巨噬细胞、TREM-1表达显著减少(P<0.05),且斑块中TREM-1表达与巨噬细胞为共定位。结论TREM-1参与CIH诱发的AS发生发展,抑制TREM-1能够减轻CIH诱发的AS,其机制与抑制巨噬细胞活化有关。

慢性间歇性低压低氧抑制内质网应激改善大鼠血管钙化

目的证实慢性间歇性低压低氧(CIHH)通过抑制内质网应激(ERS)改善大鼠血管钙化。方法使用维生素D3肌注和尼古丁灌胃(VDN)制备的大鼠在体血管钙化模型,检测主动脉组织Ca2+含量和碱性磷酸酶(ALP)活性以及血浆ALP活性,Western blot检测相关蛋白的表达水平。结果与对照组大鼠相比,VDN大鼠主动脉组织Ca2+含量和ALP活性以及血浆ALP活性均显著升高(P<0.05),同时主动脉组织平滑肌细胞收缩表型标志蛋白calponin和SM22α的表达水平显著下调(P<0.05),成骨样细胞表型标志蛋白骨形态发生蛋白2(BMP2)和RUNX2的表达水平显著上调(P<0.05)。而CIHH能够显著改善VDN大鼠的上述改变。此外,VDN大鼠主动脉组织ERS标志蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CHOP(C/EBP homologous protein)和active-caspase12的表达水平较对照组大鼠显著升高(P<0.05),而CIHH能够显著抑制上述蛋白表达水平的升高(P<0.05)。结论 CIHH可能通过抑制ERS,发挥改善血管钙化和平滑肌细胞表型转化的作用。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA对慢性间歇性低氧小鼠肝损伤的影响及其机制

目的 探索组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA对凋亡蛋白Caspase-9/Caspase-3的表达和慢性间歇性低氧小鼠肝损伤的影响及其机制。方法 将雄性C57小鼠随机分为正常组(control组)、慢性间歇性低氧组(CIH组)和SAHA干预组(CIH+SAHA组),将CIH+SAHA组与CIH组小鼠放入低氧仓内进行间歇性低氧处理,每天8 h,持续4周,从第3周起,每日造模前给予实验小鼠腹腔注射SAHA 50 mg/(kg·d),给药持续2周。实验第4周后,测量小鼠体质量,然后处死小鼠,HE染色观察肝组织形态学变化,测定血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平,Western blot检测小鼠肝组织中裂解型胱天蛋白酶3(c-Caspase-3)和Caspase-9的蛋白水平,TUNEL试剂盒检测小鼠肝组织细胞凋亡情况。结果 与control组相比,间歇性低氧4周后,CIH组小鼠肝指数显著升高且肝组织损伤明显,肝组织细胞凋亡相关蛋白Caspase-9和c-Caspase-3的表达水平显著增高,肝组织细胞凋亡比例增加(P<0.05);与CIH组相比,CIH+SAHA组肝指数、ALT、AST水平以及Caspase-9和c-Caspase-3蛋白表达水平、肝组织细胞凋亡指标降低(P<0.05)。结论 SAHA可能通过抑制凋亡相关蛋白Caspase-9/Caspase-3,进而改善慢性间歇性低氧引起的小鼠肝损伤。

慢性间歇性低压低氧对大鼠心室肌细胞瞬时外向和稳态外向钾通道电流的影响

目的探讨慢性间歇性低压低氧(chronic intermittent hypobaric hypoxia,CIHH)对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾通道电流(transient outward potassium channel current,I_(to))和稳态外向钾通道电流(steady-state outward potassium channel current,I_(ss))的影响。方法通过低压氧舱制备CIHH大鼠模型,全细胞膜片钳方法记录大鼠心室肌细胞I_(to)和I_(ss)。结果基础条件下,28d CIHH处理大鼠心室肌细胞I_(to)电流密度较对照组大鼠心室肌细胞明显增强(P<0.05),而I_(ss)电流密度与对照组大鼠心室肌细胞相比较差异无统计学意义(P>0.05)。模拟缺血可明显降低大鼠心室肌细胞I_(to)和I_(ss)(P<0.05),但CIHH处理大鼠心室肌细胞I_(to)。的降低明显小于对照组大鼠心室肌细胞(P<0.05),而I_(ss)的降低与对照组心室肌细胞差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CIHH可增强大鼠心肌细胞I_(to)通道电流,并有效对抗模拟缺血对I_(to)通道的抑制,此作用可能是CIHH抗心律失常作用的离子机制之一。

慢性间歇性低压低氧对老年大鼠自发运动行为及黑质多巴胺能神经元的影响

目的:用慢性间歇性低压低氧(CIHH)模型,探讨CIHH对老年大鼠自发运动行为以及黑质多巴胺能神经元的影响。方法:用CIHH模型处理老年大鼠30 d,通过旷场实验检测大鼠自发运动行为的改变,通过实时定量PCR和免疫印迹检测黑质多巴胺能神经元酪氨酸羟化酶(TH)和多巴胺转运体(DAT)表达的变化。结果:老年组大鼠旷场实验中闻嗅行为、探索行为、运动行为和理毛行为与成年组相比均显著下降,CIHH处理后理毛行为没有改变,闻嗅行为、探索行为和运动行为显著改善,但没有达到成年组水平;老年组大鼠黑质多巴胺能神经元TH和DAT的表达与成年组相比均显著下降,老年CIHH组TH和DAT的表达升高,但没有达到成年组水平。结论:CIHH可改善老年大鼠闻嗅行为、探索行为和运动行为,并提高黑质多巴胺能神经元TH和DAT的表达。

慢性间歇性低压低氧对老年大鼠纹状体多巴胺含量及行为的影响

目的:探讨慢性间歇性低压低氧(CIHH)对老年大鼠纹状体多巴胺(DA)及其代谢产物含量以及相关行为的影响。方法:用CIHH氧仓处理大鼠30 d,通过黏附物去除实验、倾斜面实验和水平绳实验检测大鼠行为的改变,通过液相色谱-串联质谱(L,C-MS/MS)分析DA及其代谢产物二羟苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)的含量。结果:老年组大鼠黏附物去除实验、倾斜面实验和水平绳实验中各行为参数均较成年组大鼠显著下降,CIHH处理后上述行为参数均有改善,但没有达到成年组水平;老年组大鼠DA及其代谢产物DOPAC和HVA含量均较成年组大鼠显著下降,老年CIHH组DA及其代谢产物DOPAC和HVA均升高,但没有达到正常成年组水平。结论:CIHH改善老年大鼠纹状体DA含量及行为衰退。

间歇性低压低氧对睡眠障碍的干预作用

目的研究间歇性低压低氧(IHH)干预对睡眠障碍患者睡眠的影响,并初步探讨其作用机制。方法取符合纳入标准的睡眠障碍患者60例,给予IHH(低压氧舱模拟海拔1500 m条件,相当于大气压氧分压为141.22 mmHg,含氧量18.55%,为0海拔含氧量的88.76%)干预50 min/d,连续15 d,于治疗前、治疗后15 d睡眠检测仪记录睡眠时相,采用匹兹堡睡眠质量指数量表(PSQI)、抑郁自评量表(SDS)、焦虑自评量表(SAS)评估患者睡眠质量、抑郁及焦虑水平;于治疗前及治疗后7 d、15 d采集患者空腹静脉血,检测血清褪黑素、皮质醇、低氧诱导因子1α(HIF-1α)的含量变化。结果与治疗前比较,睡眠障碍患者在IHH干预治疗15 d后,入睡时间明显缩短,睡眠持续时间明显延长,夜间深睡眠、中睡眠及浅睡眠时间均明显增加,清醒时间缩短(P<0.01);平均PSQI总分、SDS总分、SAS总分均明显下降(P<0.01);患者血清中皮质醇降低(P<0.05),褪黑素、HIF-1α水平均升高(P<0.05或P<0.01)。结论IHH能改善睡眠障碍患者的睡眠质量,并降低抑郁、焦虑水平,机制可能与低氧增加褪黑素的释放而下调皮质醇水平及诱导HIF-1α的产生有关。

慢性间歇性低氧激活NLRP1炎性小体引起小鼠肝损伤

目的 探讨慢性间歇性低氧(CIH)是否能激活含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白1(NLRP1)炎性小体引起肝损伤。方法 将C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、 CIH组。CIH组小鼠放入CIH仓进行造模(每天8 h,连续4周)。造模后,采用HE染色观察肝组织细胞形态、试剂盒检测小鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平,二氢乙啶(DHE)标记检测肝组织活性氧(ROS)的水平,免疫组织化学染色法检测小鼠肝组织NLRP1、含胱天蛋白酶激活和募集结构域凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和胱天蛋白酶1(caspase-1)的表达和定位,Western blot法检测小鼠肝组织中NLRP1、 ASC、 caspase-1、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的蛋白表达,ELISA检测小鼠血清IL-1β、 TNF-α水平。结果与对照组相比,CIH组肝细胞病变明显,细胞出现破裂、坏死、炎症细胞聚集,ALT、 AST、 ROS、 IL-1β和TNF-α水平显著升高;NLRP1、 ASC、caspase-1、IL-1β和TNF-α的蛋白表达升高。结论 CIH通过激活NLRP1炎性小体引起肝损伤。

SENP-1/HIF-1α通路对慢性间歇性低氧诱导大鼠血管内皮损伤的影响

目的:探讨小泛素样修饰特异性蛋白酶1(SENP-1)/低氧诱导因子1α(HIF-1α)通路对慢性间歇性低氧(CIH)诱导大鼠血管内皮损伤的影响,阐明其相关作用机制。方法:SD大鼠随机分为对照组和CIH组,再将每组分为2、4和6周3个时间点亚组,每亚组8只。CIH组大鼠暴露于CIH舱中进行CIH诱导,制备阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)模型,对照组大鼠暴露于常氧环境中。于各时间点收集各组大鼠血清和胸主动脉组织。HE染色观察各组大鼠胸主动脉血管损伤情况,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组大鼠血清中一氧化氮(NO)、内皮素1(ET-1)、血管性血友病因子(vWF)和血栓调节蛋白(TM)水平,Western blotting法检测各组大鼠胸主动脉组织中SENP-1、HIF-1α和血管内皮生长因子A(VEGFA)蛋白表达水平。体外培养大鼠主动脉内皮细胞(rAECs),经SENP-1 shRNA腺病毒(sh-SENP-1)感染构建SENP-1基因低表达的rAECs细胞株,采用CIH诱导建立血管内皮细胞损伤模型,分为CIH组、CIH+sh-NC组和CIH+sh-SENP-1组,另设对照组。CCK-8检测各组细胞增殖活性,ELISA法检测各组细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)活性及细胞中NO、ET-1、丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中SENP-1、HIF-1α和VEGFA蛋白表达水平。结果:随着CIH诱导时间的延长,与对照组比较,CIH组大鼠胸主动脉内膜逐渐粗糙并明显增厚,血清中NO水平逐渐减低(P<0.05),血清中ET-1、vWF和TM水平及胸主动脉组织中SENP-1、HIF-1α和VEGFA蛋白表达水平逐渐升高(P<0.05)。与对照组比较,CIH组细胞增殖活性降低(P<0.05),细胞培养上清中LDH活性及细胞中ET-1、MDA水平和细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞中NO水平和SOD活性降低(P<0.05),SENP-1、HIF-1α和VEGFA蛋白表达水平升高(P<0.05);与CIH组比较,CIH+sh-SENP-1组细胞增殖活性升高(P<0.05),细胞培养上清中LDH活性及细胞中ET-1、MDA水平和细胞凋亡率降低(P<0.05),细胞中NO水平和SOD活性升高(P<0.05),SENP-1、HIF-1α和VEGFA蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:SENP-1/HIF-α通路在CIH诱导的大鼠胸主动脉损伤组织中高度活化,沉默SENP-1表达可减轻CIH诱导的血管内皮细胞损伤,其作用机制可能与下调SENP-1/HIF-α通路活化水平有关。

银杏叶提取物激活Nrf2/ARE通路改善慢性间歇性低氧诱导大鼠血管内皮功能障碍

目的探讨银杏叶提取物(Ginkgo biloba extract,GBE)对慢性间歇性低氧(chronic intermittent hypoxia,CIH)诱导大鼠血管内皮功能障碍的影响及相关机制。方法构建CIH大鼠模型,并用50、100 mg·kg^(-1)的GBE灌胃,检测各组大鼠尾动脉收缩压(systolic blood pressure,SBP);HE染色检测主动脉组织形态;DAF-FM DA染色和硝酸还原酶法检测NO水平;ELISA法检测血清ET-1、TNF-α、IL-6水平;DHE染色检测主动脉组织活性氧水平;试剂盒检测血清MDA、SOD、GSH-Px水平;Western blot检测主动脉组织VCAM-1、ICAM-1、细胞核Nrf2、HO-1、NQO1水平。结果GBE明显降低CIH大鼠的尾动脉SBP、ET-1、活性氧、MDA、VCAM-1、ICAM-1、TNF-α、IL-6水平,明显增加NO、SOD、GSH-Px、细胞核Nrf2、HO-1、NQO1水平。GBE明显改善CIH大鼠主动脉组织形态学。结论GBE可改善CIH模型大鼠血管内皮功能障碍,降低血压,其机制可能与激活Nrf2/ARE通路、抑制氧化应激与炎症反应有关。

慢性间歇性低压低氧对发育大鼠主动脉舒张的影响

目的探讨慢性间歇性低压低氧(chronic intermittent hypobaric hypoxia,CIHH)对发育大鼠胸主动脉舒张功能的影响及作用机制。方法新生♂Sprague-Dawlay大鼠,随机分为8组:CIHH处理(CIHH)、CIHH后1周(CIHH-p1)、CIHH后2周(CIHH-p2)、CIHH后3周(CIHH-p3)、对照(Con)、1周对照(Con-1)、2周对照(Con-2)与3周对照(Con-3)。CIHH大鼠给予42 d、每天5 h、模拟海拔3 km的低压低氧处理。制备胸主动脉环,描记舒张活动。结果CIHH明显增强动脉环内皮依赖性舒张(P<0.05),此效应至少可维持3周时间(P<0.05);CIHH明显减弱急性低氧对动脉环舒张的抑制(P<0.05);CIHH对胸主动脉环舒张的增强效应及抗低氧作用可被前列环素抑制剂吲哚美辛、K ATP通道阻断剂格列本脲和氧自由基清除剂Tempo所阻断。结论CIHH处理增强发育大鼠主动脉内皮依赖性舒张,并对抗急性低氧对舒张的抑制,此作用与K ATP通道开放、前列环素和氧自由基作用有关。