烟草烟雾与机动车尾气暴露建立的大鼠慢性阻塞性肺疾病模型比较

目的对比烟草烟雾(CS)暴露和机动车尾气(MVE)暴露两种方法构建的大鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型的模拟程度。方法将24只雄性SD大鼠按随机数字表分为对照组、CS组与MVE组,每组8只。CS组与MVE组大鼠分别采用CS或MVE暴露建立COPD模型。建模结束后,检测各组大鼠的肺功能;收集大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF),检测其中炎性细胞数、炎性因子白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α及黏蛋白5AC(MUC5AC)含量;HE染色观察肺组织和气道病理变化;PAS染色检测气道杯状细胞增生情况。结果与对照组比较,CS组和MVE组大鼠的肺功能参数吸气阻力(RI)、肺总量(TLC)、肺静态顺应性(Cchord)均明显增高(P<0.05),而呼气流速参数FEV50/FVC明显降低(P<0.05);与MVE组相比,CS组大鼠的RI、TLC、Cchord均明显增高(P<0.05),FEV50/FVC降低(P<0.05)。肺组织HE染色结果显示,CS组和MVE组大鼠平均肺泡截距(MLI)均高于对照组(P<0.05),CS组MLI高于MVE组(P<0.05)。CS组和MVE组大鼠BALF中白细胞、中性粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞数,以及IL-6、TNF-α含量均高于对照组(P<0.05);且CS组中炎性细胞数、IL-6及TNF-α含量均高于MVE组(P<0.05)。肺组织PAS染色结果显示,CS组和MVE组大鼠大气道杯状细胞较对照组均明显增多(P<0.05),且CS组杯状细胞数高于MVE组(P<0.05);CS组和MVE组BALF中MUC5AC含量均高于对照组(P<0.05),且CS组大鼠BALF中MUC5AC含量高于MVE组(P<0.05)。结论应用CS或MVE暴露均可建立大鼠COPD模型,但CS暴露比MVE暴露能更好地模拟COPD急性加重期特征。

川陈皮素对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠气道黏液高分泌的抑制作用及其分子机制

目的:探讨川陈皮素(NOB)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道黏液高分泌的影响,阐明其对内质网应激(ERS)信号通路调控的分子机制。方法:按随机数字表法将45只SD大鼠随机分为对照组、模型组、NOB组、ERS抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA)组和NOB+4-PBA组,每组9只。除对照组外,其他各组大鼠均采用烟熏联合气道内注入脂多糖(LPS)建立COPD大鼠模型,建模成功后给予相应药物(50 mg·kg^(-1)·d^(-1)Nob或0.35 g·kg^(-1)·d^(-1)4-PBA)干预,每天1次,连续干预4周。完成药物干预后,采用小动物呼吸机和血气分析仪检测各组大鼠肺功能指标[肺动态顺应性(Cdyn)和气道阻力(RL)]和动脉血气指标[血二氧化碳分压(PaCO_(2))和动脉血氧分压(PaO_(2))];苏木精-伊红(HE)染色法观察各组大鼠肺组织杯状细胞增生情况;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组大鼠肺泡灌洗液(BALF)中气道杯状细胞内黏蛋白5AC(MUC5AC)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组大鼠肺组织中MUC5AC mRNA表达水平;Western blotting法检测各组大鼠肺组织MUC5AC和ERS相关蛋白肌醇依赖酶1α(IRE1α)、转录激活因子6(ATF6)、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)及葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠肺气道杯状细胞大量增生,Cdyn和PaO_(2)水平明显降低(P<0.05),而RL和PaCO_(2)水平明显升高(P<0.05),BALF中MUC5AC、IL-1β、TNF-α和IL-6水平及肺组织中MUC5AC、IRE1α、ATF6、CHOP以及GRP78蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,NOB组、4-PBA组和NOB+4-PBA组大鼠肺功能、动脉血气指标以及肺气道杯状细胞增殖情况均有明显缓解,且BALF中IL-1β、TNF-α和IL-6水平及肺组织中MUC5AC、IRE1α、ATF6、CHOP以及GRP78蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),而NOB+4-PBA组大鼠的缓解效果最佳。结论:NOB能有效缓解COPD大鼠肺气道黏液高分泌情况,其作用机制可能与抑制ERS介导的MUC5AC高表达有关。

滋金补水膏对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠的治疗作用及对lncRNAPVT1、miR-30b-5p表达的影响

【目的】探讨滋金补水膏对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠的治疗作用及机制。【方法】将96只大鼠随机分为正常组,模型组,滋金补水膏低、中、高剂量组,盐酸氨溴索组、滋金补水膏高剂量+pcDNA组,滋金补水膏高剂量+pcDNA-人浆细胞瘤转化迁移基因1(PVT1)组,每组12只。除正常组外,其他各组大鼠采用气道滴注脂多糖(LPS)联合烟雾暴露法构建COPD模型。建模成功后,进行给药干预。给药结束后,采用酶联免疫吸附分析(ELISA)检测大鼠血清中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;流式细胞术检测大鼠外周血中辅助性T细胞17/调节性T细胞(Th17/Treg)水平,苏木素-伊红(HE)染色法观察肺组织病理变化,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测血清和肺组织中长链非编码RNA(lncRNA)PVT1、miR-30b-5p表达,Western Blot法检测肺组织中维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)、叉头框蛋白P3(Foxp3)蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA PVT1与miR-30b-5p的关系。【结果】与正常组比较,模型组肺泡间隔变大,支气管周围有大量炎症细胞浸润,Treg细胞比例、miR-30b-5p表达水平、Foxp3蛋白表达水平降低,IL-6、TNF-α水平,Th17细胞比例、Th17/Treg比值,lncRNA PVT1表达水平,RORγt蛋白表达水平升高(均P<0.05);与模型组比较,滋金补水膏低、中、高剂量组及盐酸氨溴索组大鼠肺组织病理损伤减轻、Treg细胞比例、miR-30b-5p表达水平、Foxp3蛋白表达水平升高,IL-6、TNF-α水平,Th17细胞比例,Th17/Treg比值,lncRNA PVT1表达水平,RORγt蛋白表达水平降低(均P<0.05)。lncRNA PVT1靶向调控miR-30b-5p表达。【结论】滋金补水膏可能通过调节lncRNA PVT1/miR-30b-5p轴促进Th17/Treg细胞平衡来抑制COPD大鼠炎症反应。

肺保护通气策略对慢性阻塞性肺疾病模型呼吸功能和血液动力学的影响

目的:本研究旨在不同潮气量和呼气正末压(PEEP)的肺保护通气策略对慢性阻塞性肺疾病COPD模型大鼠呼吸功能和血液动力学的影响。方法:采用烟熏和气管内滴注脂多糖(LPS)法构建COPD大鼠模型。将大鼠随机分为9组,每组10只:对照组和COPD组仅给予气管插管,不给予机械通气;L+P0组、L+P3组、L+P5组、L+P10组在气管插管后分别给予6mL/kg小潮气量和0cm H_(2)O、3cm H_(2)O、5cm H_(2)O、10cm H_(2)O PEEP的机械通气120min;H+P0组、H+P3组、H+P5组、H+P10组在气管插管后分别给予20mL/kg大潮气量和0cm H_(2)O、3cm H_(2)O、5cm H_(2)O、10cm H_(2)O PEEP的机械通气120min。分别在小动物无创呼吸功能监测系统和血气分析仪中测量呼吸功能和血液动力学指标。采用酶联免疫吸附实验检测肺组织和肺泡灌洗液(BALF)中炎症介质的水平。结果:与对照组相比,COPD组大鼠呼吸功能指标和PaO_(2)均明显降低(P<0.05);与COPD组相比,L+P0组、L+P3组、L+P5组呼吸功能指标和PaO_(2)均明显升高(P<0.05),而L+P10组、H+P0组、H+P3组、H+P5组和H+P10组均明显降低(P<0.05);L+P5组呼吸功能指标和PaO_(2)均明显高于L+P0组和L+P3组(P<0.05);与L+P5组相比,L+P10组、H+P0组、H+P3组、H+P5组和H+P10组呼吸功能指标和PaO_(2)均明显降低(P<0.05)。与对照组相比,COPD组肺组织和BALF中IL-8和TNF-α水平显著升高,而IL-10水平显著降低(P<0.05);与COPD组相比,L+P0组、L+P3组、L+P5组IL-8和TNF-α水平显著降低、IL-10水平显著升高(P<0.05),而L+P10组、H+P0组、H+P3组、H+P5组和H+P10组IL-8和TNF-α水平显著升高、IL-10水平显著降低(P<0.05);L+P5组肺组织中IL-8和TNF-α水平显著低于L+P0组和L+P3组,而IL-10水平显著高于L+P0组和L+P3组(P<0.05);与L+P5组相比,L+P10组、H+P0组、H+P3组、H+P5组和H+P10组IL-8和TNF-α水平显著升高,而IL-10水平显著降低(P<0.05)。结论:小潮气量与较高PEEP(如5cm H_(2)O PEEP)的肺保护通气策略能够减轻COPD大鼠的肺部炎症和肺损伤,改善COPD患者呼吸功能和血液动力学。

桑麻杏贝汤对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠炎症因子及肺功能作用机制研究

目的:探讨桑麻杏贝汤对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠炎症因子的影响及肺功能的改善作用。方法:将36只SPF级SD大鼠随机分为对照组、模型组和治疗组,每组各12只(雌雄各半),除对照组外,其余两组应用烟熏法构建COPD大鼠模型。治疗组予桑麻杏贝汤12 g/(kg·d)灌胃,模型组和对照组采用10 ml/(kg·d)0.9%氯化钠溶液灌胃。14 d干预结束后,测定大鼠用力肺活量(FVC)、0.1 s用力呼气容积(FEV0.1)、呼气峰值流速(PEF),采用酶联免疫吸附法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)的浓度水平,并应用HE染色法观察大鼠肺组织病理学变化。结果:与对照组相比,COPD模型组大鼠的FVC、PEF值均下降(P<0.05),血清TNF-α、IL-6、IL-8浓度水平均升高(P<0.01),肺组织病理变化加重。与模型组相比,桑麻杏贝汤组大鼠肺功能明显得到改善(P<0.05),血清炎症因子水平明显降低(P<0.05)。结论:桑麻杏贝汤能够改善COPD模型大鼠的肺功能等症状,其机制可能与下调TNF-α、IL-6、IL-8等炎症因子浓度水平,减少肺组织病理损伤密切相关。

基于EGFR/MAPK/MUC5AC通路探讨益肺健脾方对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠气道黏液高分泌的影响

目的基于表皮生长因子受体/丝裂原活化蛋白激酶/黏蛋白5AC(EGFR/MAPK/MUC5AC)通路探析益肺健脾方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道黏液高分泌的治疗作用及机制。方法将SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、氨溴索组及益肺健脾方低、中、高剂量组。烟熏联合脂多糖滴注、番泻叶灌胃泻下的方式复制肺脾两虚型COPD大鼠模型。阿利新蓝-过碘酸-雪夫染色(AB-PAS)观察大鼠支气管黏液分泌及杯状细胞增生程度;苏木精-伊红染色(HE)观察大鼠肺组织病理形态;蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠肺组织MUC5AC、EGFR蛋白和c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p38丝裂活化蛋白激酶(p38 MAPK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)蛋白及磷酸化蛋白的表达;采用实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)检测大鼠肺组织EGFR、JNK、p38 MAPK、MUC5AC及ERK mRNA的表达。结果AB-PAS染色显示氨溴索组及益肺健脾方各剂量组杯状细胞增生明显改善。HE染色下见氨溴索组及益肺健脾方高剂量组明显改善肺组织病理损伤。相较于空白组,模型组肺组织中ERK、MUC5AC、p38 MAPK、JNK及EGFR mRNA的表达皆明显升高(P<0.01),MUC5AC、EGFR蛋白和p38 MAPK、JNK、ERK蛋白及磷酸化蛋白表达量皆明显升高(P<0.01)。相比于模型组,氨溴索组及益肺健脾方中、高剂量组各蛋白表达量明显下降(P<0.01,P<0.05),低剂量组EGFR、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达量皆降低(P<0.01,P<0.05);高剂量组与氨溴索组EGFR、ERK、JNK、p38 MAPK及MUC5AC mRNA的表达皆降低(P<0.01,P<0.05),中、低剂量组MUC5AC mRNA的表达下降(P<0.05)。结论益肺健脾方可减少MUC5AC的表达,从而改善气道黏液高分泌,其作用机制与EGFR/MAPK信号通路有关。

固本平喘方对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠气道MUC5AC水平的影响

目的使用固本平喘方对香烟烟雾暴露联合气管滴注脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、猪胰弹性蛋白酶(porcine pancreatic elastase,PPE)造模大鼠进行干预,以主要分泌性黏蛋白5AC(mucin5AC,MUC5AC)作为评价指标,测定肺组织MUC5AC含量、蛋白表达、mRNA表达,评价各组气道黏液分泌强度。方法将64只SPF级SD大鼠适应性饲养1周后,随机取52只进行造模,造模成功后取50只随机分为模型组(蒸馏水)、地塞米松组(0.15 mg·kg-1)及固本平喘方高(28 g·kg-1)、中(14 g·kg-1)、低(7 g·kg-1)剂量组,每组10只,另取10只大鼠为对照组(蒸馏水)。15 d后处死大鼠并收集标本。HE染色观察大鼠肺组织病理学变化;ELISA法检测肺组织MUC5AC水平;RT-PCR检测肺组织MUC5AC mRNA表达水平;Western blot检测肺组织MUC5AC蛋白表达;免疫荧光检测肺组织MUC5AC表达分布态势。结果模型组大鼠肺组织结构显著破坏,肺泡腔内及肺间质见大量炎性浸润;地塞米松组及固本平喘方各剂量组可见肺泡腔受损程度及组织炎性浸润程度减轻。与对照组比较,其余各组MUC5AC含量均升高(P<0.05);与模型组比较,地塞米松组及固本平喘方各剂量组MUC5AC含量及MUC5AC mRNA表达均下降(P<0.05),地塞米松组及固本平喘方高、中剂量组MUC5AC蛋白表达降低(P<0.05)。肺组织免疫荧光可见,MUC5AC在模型组中呈现强表达,在地塞米松组中呈现较弱表达,在固本平喘方低、中、高剂量组中,表达强度依次减弱。结论固本平喘方可改善慢性阻塞性肺疾病模型大鼠的肺组织病理损伤,有效减少MUC5AC含量、下调MUC5AC mRNA表达、降低MUC5AC蛋白表达,改善大鼠气道黏液高分泌状态。

MCC950下调NLRP3炎症小体对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠气管重塑及嗜酸性粒细胞水平的影响

目的探究MCC950下调NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气管重塑及嗜酸性粒细胞水平的影响。方法将60只小鼠随机分为对照组、COPD组和MCC950组。采用脂多糖联合香烟烟雾的方法复制COPD大鼠模型。HE染色分析各组大鼠肺组织病理变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各组大鼠基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;Westernblotting检测各组大鼠NLRP3相关蛋白表达;检测大鼠嗜酸性粒细胞及趋化因子水平。结果与对照组比较,COPD组大鼠肺组织中NLRP3、Cleaved caspase-1和ASC蛋白相对表达量升高(P<0.05);肺组织表现出严重病理损伤和炎症细胞大量聚集(P<0.05);血清MMP-2、MMP-9、TNF-α和IL-6水平升高(P<0.05),TIMP-1和TIMP-2水平降低(P<0.05);细支气管壁厚度、管壁面积和管壁面积/腔周长均增加(P<0.05);静脉血嗜酸性粒细胞水平增加(P<0.05)。预先注射MCC950后,以上指标均得到逆转(P<0.05)。结论MCC950下调NLRP3炎症小体后,能够影响COPD大鼠气管重塑,改善COPD大鼠的肺组织损伤,以及降低静脉血嗜酸性粒细胞的水平。

基于IGF-1R/PI3K/AKT的益气固表丸对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠的影响及作用机制研究

目的:益气固表丸对慢性阻塞性肺疾病(COPD)有明显的治疗作用,但具体作用机制尚不清楚。本研究旨在探讨益气固表丸对脂多糖(LPS)联合烟雾暴露构建慢性阻塞性肺病模型大鼠的治疗作用机制。方法:通过大鼠气管内灌注LPS和吸入香烟烟雾构建慢性阻塞性肺病模型,同时给予模型大鼠低、中、高剂量益气固表丸治疗14 d。观察呼吸参数及肺组织病理变化。采用酶联免疫吸附试验测定支气管肺泡灌洗液(BALF)及血清胰岛素样生长因子1型受体(IGF-1R)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-10水平。采用蛋白质印迹法检测大鼠肺组织样品中胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)/PI3K/AKT信号通路组分的磷酸化状态。结果:与对照组和低剂量益气组比较,大剂量益气固表丸治疗可显著改善COPD大鼠呼吸参数,减轻肺损伤和炎症,降低BALF和血清炎症介质水平。此外,高剂量益气固表丸干预的COPD大鼠肺组织标本中磷酸化IGF-1R、p-PI3K、p-AKT、p-GSK3、p-mTOR蛋白水平显著降低。结论:益气固表丸对COPD有明显的治疗作用,可能与靶向IGF-1R/PI3K/AKT信号通路有关。

重组人CC16蛋白改善慢性阻塞性肺疾病模型小鼠肺功能及其机制

目的:探究重组人CC16蛋白(rhCC16)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型小鼠肺功能的改善作用及其机制。方法:40只BALB/c雄性小鼠随机均分为对照组、COPD模型组、COPD+PBS组和COPD+rhCC16组,每组10只。采用被动吸烟6月法制备COPD模型小鼠,从熏烟16周开始,在熏烟前2 h用2.5μg/g rhCC16或等体积PBS对熏烟小鼠进行滴鼻干预,制备COPD+rhCC16组或COPD+PBS组。造模及干预结束后检测各组小鼠肺功能;HE染色观察各组小鼠肺组织形态结构;RT-qPCR法检测各组小鼠肺组织P16和P21的mRNA表达;免疫组织化学法检测各组小鼠肺组织P16、P21、衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)、p-P38及磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白表达情况。结果:与对照组相比,COPD模型组小鼠0.3秒内用力呼气容积(FEV0.3)/用力肺活量(FVC)比值降低(P<0.05),气道阻力增加(P<0.05),肺顺应性降低(P<0.05);小鼠肺泡壁破裂塌陷,肺泡大小不均匀,多呈不规则扩大,管腔狭窄,管壁增厚;小鼠肺组织P16和P21的mRNA表达水平显著升高(P<0.05),小鼠肺组织P16、P21、SA-β-Gal、p-P38和p-ERK1/2蛋白表达量升高(P<0.05);与COPD模型组相比,rhCC16干预组小鼠各项肺功能指标均有缓解(P<0.05),肺组织病理损伤减轻,小鼠肺组织P16和P21 mRNA表达水平降低(P<0.05),小鼠肺组织P16、P21、SA-β-Gal、p-P38和p-ERK1/2蛋白表达量降低(P<0.05);PBS组各项指标与COPD组相似。结论:rhCC16可能通过P38 MAPK/ERK1/2信号通路减轻COPD小鼠肺组织衰老,进而改善COPD模型小鼠肺功能。

短期慢性阻塞性肺疾病模型的免疫特点

目的 分析短期烟草烟雾暴露后肽段激发的慢性阻塞性肺疾病模型小鼠的免疫特点。方法 建立上述短期慢性阻塞性肺疾病模型,行肺组织石蜡切片和支气管肺泡灌洗液分类计数观察气道炎症;有创肺功能检测肺呼吸力学参数;借助Luminex技术分析细胞因子表达情况;流式细胞术检测小鼠肺组织中辅助T(T helper,Th)细胞和固有淋巴样细胞(innate lymphoid cells,ILCs)亚群的数量及比例变化。结果 短期烟草烟雾暴露后肽段激发可损伤小鼠肺泡;诱导以中性粒细胞浸润为主的气道炎症;3型细胞因子表达增高;Th17、ILC3细胞增多,ILC1、ILC2细胞减少。结论 烟草烟雾暴露后肽段激发诱导的短期慢性阻塞性肺疾病模型以3型免疫为主,且ILC3可能比Th17的作用更为重要。

异荭草苷对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠的影响及机制

目的:探究异荭草苷对慢性阻塞性肺疾病(COPD)的作用及机制。方法:36只大鼠随机分为对照组、模型组、异荭草苷低、中、高剂量组和地塞米松组,除对照组外,其余组采用香烟烟雾暴露+脂多糖(LPS)法建立COPD大鼠模型,药物干预14 d后,称重计算肺指数,HE染色检测肺组织病理损伤,Smith评分法进行肺损伤评分,肺功能检测仪检测肺活量(FVC)、一秒用力呼气容积(FEV_(1))、一秒率(FEV_(1)/FVC),血气分析仪检测动脉氧分压(PaO_(2))、血氧饱和度(SaO_(2))、动脉二氧化碳分压(PaCO_(2)),ELISA检测肺组织炎症因子IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-8水平,试剂盒检测肺组织氧化应激指标MDA和SOD含量,Western blot检测Toll-样受体4(TLR4)、髓样分化因子(MyD88)、核因子-κB p65(NF-κB p65)及p-NF-κB p65蛋白水平,并计算p-NF-κB p65/NF-κB p65。结果:与对照组比较,模型组肺组织出现炎症浸润,肺泡严重塌陷,肺泡壁增厚,肺间质水肿;与模型组比较,异荭草苷中、高剂量组和地塞米松组大鼠肺组织病理损伤明显改善,肺指数和肺损伤评分显著降低(P<0.05),肺功能指标FVC、FEV_(1)、FEV_(1)/FVC显著升高(P<0.05),血气分析指标PaO_(2)水平和SaO_(2)百分比显著升高(P<0.05),PaCO_(2)水平显著降低(P<0.05),肺组织IL-6、IL-1β、IL-8、TNF-α、MDA水平降低(P<0.05),SOD水平升高(P<0.05),TLR4、MyD88蛋白表达下调(P<0.05),p-NF-κB p65/NF-κB p65降低(P<0.05)。结论:异荭草苷可能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB p65减少炎症因子分泌,降低氧化应激水平,改善COPD大鼠肺功能,缓解肺损伤。

汉黄芩素对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠气道炎症的影响及机制

目的研究汉黄芩素(Wog)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠气道炎症的影响及可能机制。方法将84只大鼠按随机数字表法分为对照组,模型组,Wog低、高剂量组(灌胃给药,50、100 mg/kg),氨茶碱组(阳性对照,灌胃给药,2.3 mg/kg),重组大鼠受体相互作用蛋白激酶1[rRIPK1,受体相互作用蛋白激酶1(RIPK1)激活剂]组(尾静脉注射给药,8μg/kg),Wog高剂量+rRIPK1组(灌胃100 mg/kg Wog并尾静脉注射8μg/kg rRIPK1),每组12只。除对照组外,其余各组大鼠均利用烟熏联合气管注射脂多糖的方法构建COPD模型。建模24 h后,进行给药处理;每天给药1次,持续4周。末次给药后,测定各组大鼠的吸气峰流量(PIF)、呼气峰流量(PEF)、每分钟通气量(MV)和第1秒用力呼气容积(FEV_(1))/用力肺活量(FVC)比值,测定大鼠血清中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,观察大鼠肺组织病理形态学变化,测定大鼠肺上皮细胞凋亡率,并测定大鼠肺组织中RIPK1、RIPK3、混合系激酶区域样蛋白(MLKL)mRNA和RIPK1、RIPK3、磷酸化MLKL(p-MLKL)蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组大鼠PIF、PEF、MV、FEV_(1)/FVC比值显著降低(P<0.05),IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著升高(P<0.05),肺组织有大量炎症细胞浸润、支气管壁增厚,肺上皮细胞凋亡率及RIPK1、RIPK3、MLKL mRNA和RIPK1、RIPK3、p-MLKL蛋白表达水平也显著升高(P<0.05)。与模型组比较,Wog低、高剂量组大鼠上述指标均显著改善(P<0.05),病理损伤明显减轻;而rRIPK1组大鼠对应指标却显著恶化(P<0.05),病理损伤也进一步加重;并且,rRIPK1可明显减弱高剂量Wog对COPD大鼠气道炎症和RIPK1/RIPK3/MLKL通路的抑制作用(P<0.05)。结论Wog可能通过抑制RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路改善COPD大鼠的气道炎症。

辛麻颗粒对痰瘀内阻型慢性阻塞性肺疾病模型大鼠气道重塑的研究

目的:研究辛麻颗粒对慢性阻塞性肺疾病气道重塑的影响以及转化生长因子(Transforming Growth Factor,TGF)-β1在慢性阻塞性肺疾病大鼠模型肺内表达及分布变化。方法:将雄性SD大鼠60只随机分为5组:中药颗粒高剂量组、中药颗粒中剂量组、中药颗粒低剂量组、模型对照组、正常对照组,各12只。建立大鼠痰瘀内阻型慢性阻塞性肺疾病模型,中药颗粒高剂量组、中药颗粒中剂量组、中药颗粒低剂量组灌服辛麻颗粒。光学显微镜下观察各组大鼠肺组织病理形态学变化并测量肺组织小气道管壁厚度;采用免疫组织化学法并结合图像分析技术测定大鼠肺组织、支气管黏膜上皮TGF-β1的表达。结果:中药颗粒高剂量组治疗后肺组织小气道管壁厚度明显小于中药颗粒中剂量组、中药颗粒低剂量组、模型对照组。中药颗粒高剂量组大鼠肺组织TGF-β1的表达最少,模型对照组、中药颗粒低剂量组、中药颗粒中剂量组无明显区别。结论:研究明确了辛麻颗粒的有效性和安全性,可减少慢性阻塞性肺疾病急性发作次数,降低支气管黏膜上皮TGF-β1表达,可能降低气道炎症反应,进而减缓气道重塑,为治疗和恢复慢性阻塞性肺疾病逐渐下降的肺功能开发新的复方提供科学依据。

气管内反复滴入脂多糖法建立大鼠慢性阻塞性肺疾病模型

目的评价脂多糖(LPS)诱发大鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型的可行性。方法气管内滴入脂多糖或生理盐水,每周1次,共8周。测定大鼠的气道阻力(RL)和肺动态顺应性(Cdyn),计数大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数及分类,肺组织病理切片行HE和AB-PAS染色,并测定肺组织粘蛋白(MUC5AC)的含量。结果模型组大鼠RL明显升高(87.5%),Cdyn显著下降(16.4%);BALF中白细胞总数及分类中的中性粒细胞、淋巴细胞和单核巨噬细胞数均明显高于对照组;光镜下可见病变呈慢性支气管炎及肺气肿样改变。结论反复气管内滴入LPS可用于制备大鼠COPD模型,其肺功能、BALF细胞学及病理学改变符合人类COPD表现,可以用于实验研究。

一种实验性大鼠慢性阻塞性肺疾病模型的建立

目的 :建立实验性大鼠慢性阻塞性肺疾病 (COPD)模型。方法 :采用香烟染毒和细菌内毒素 (LPS)气管注入的复合方法 ,模仿人类COPD发病的慢性过程 ,制造大鼠慢性阻塞性肺疾病模型。结果 :COPD模型肺组织平均肺泡面积较健康对照组明显增大 ,OD值明显减少 (P <0 0 1)。COPD模型组吸气阻力较健康对照组显著升高 ,肺顺应性 (CLd)及第 0 3s用力呼气量 (FEV0 3)与用力肺活量的比值(FEV0 3 FVC % )较健康对照组显著降低 ,表明有通气阻塞现象 (P <0 0 1)。结论

TNF-α对慢性阻塞性肺疾病模型鼠营养状态和呼吸肌蛋白质分解代谢的影响

目的研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型鼠的营养状态和呼吸肌蛋白质分解代谢率的影响。方法将90只健康Wistar大鼠随机分为模型组(A)70只,对照组(B)20只。采用气管内注入猪胰弹性蛋白酶、熏香烟和限制营养的方法建立COPD鼠模型和COPD营养不良鼠模型。模型制作成功后,将A组分为COPD营养正常组(A1),COPD营养不良组(A2)和COPD营养不良干预组(A3)。A3组采用尾静脉注射TNF-αMcAb 0.1 mg/kg,进行干预。酶联免疫吸附法测定大鼠血清、呼吸肌匀浆中TNF-α含量,自动生化仪测定血浆葡萄糖、白蛋白、甘油三酯含量,反相高效液相色谱荧光法测定呼吸肌中三甲基组氨酸(3-MH)、酪氨酸(Tyr)含量。结果 1:A2组血清和呼吸肌匀浆TNF-α含量和血浆葡萄糖、甘油三酯明显高于B、A1和A3组(P<0.01);A2组膈肌重量,白蛋白含量明显低于B、A1和A3组(P<0.01);2:A2组呼吸肌匀浆中3-MH、Tyr含量均明显高于B、A1和A3组(P<0.01);3:A2组呼吸肌TNF-α含量与3-MH、Tyr含量呈明显正相关(R=0.866,P<0.01;R=0.883,P<0.01),TNF-αMcAb干预后,蛋白质分解代谢率降低。结论 TNF-α是引起COPD鼠发生营养不良和呼吸肌蛋白质分解代谢率增高的因素之一。

“从肠论治”对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠肺组织病理学影响

目的:建立慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型,观察"从肠论治"对COPD模型大鼠肺组织病理结构变化,寻找中医"从肠论治"肺病理论的形态学证据。方法:采用气管注脂多糖加熏香烟联合造模方法建立COPD大鼠模型,随机分为正常组、模型组、治肺组、治肠组及肺肠同治组。正常组、模型组灌胃生理盐水,各给药组灌胃相应中药,连续14天。采用常规光镜、电镜方法比较各组肺组织病理学变化。结果:与正常组相比,模型组具备COPD的病理特征。与模型组比较,治肠组肺组织病变有所减轻。与治肺组比较,肺肠同治组的病变减轻最明显。结论:通利大肠,或在治肺的基础上增加通利大肠,均能减轻COPD肺组织损伤,"从肠论治"COPD存在形态学证据。

N-乙酰半胱氨酸联合阿奇霉素对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠氧化应激的影响

目的:探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)联合阿奇霉素(AZI)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠氧化应激的影响。方法:将60只雄性Wistar大鼠随机分为5组,即正常对照(control)组、模型(model)组、AZI治疗组、NAC治疗组和联合治疗组(AZI+NAC组)。采用烟熏联合气管内滴入脂多糖的方法诱导大鼠COPD模型。NAC组和AZI组大鼠每日烟熏前30 min分别给予NAC和AZI灌胃,AZI+NAC组则给予NAC和AZI联合灌胃。第31天行肺功能检测后处死大鼠,提取支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数,并采用ELISA法测定BALF中白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-17(IL-17)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。制作肺组织切片及肺匀浆,测定肺匀浆超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)水平。结果:与control组对比,其余4组均出现肺功能的下降,组织病理提示炎症细胞浸润、肺泡破坏等表现。与control组比较,其余4组BALF中白细胞总数、单核巨噬细胞、中性粒细胞和淋巴细胞均显著增高(P<0.05);与model组、AZI组、NAC组比较,AZI+NAC组BALF中白细胞总数、中性粒细胞和淋巴细胞均显著下降(P<0.05)。与model组对比,AZI组、NAC组和AZI+NAC组IL-8、IL-17、TNF-α和MDA含量均显著降低(P<0.05),SOD和GSH-Px活性均显著增高(P<0.05);与AZI组和NAC组比较,AZI+NAC组IL-8、IL-17、TNF-α和MDA含量均下降,SOD和GSH-Px活性均增高,差异有统计学显著性(P<0.01)。结论:NAC和AZI均能减轻COPD模型大鼠肺部炎症和氧化损伤,两者联合能增强抗氧化作用,可能更适合COPD的临床治疗。

清金化痰汤对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠肺组织中性粒细胞弹性蛋白酶及黏蛋白基因表达的影响

目的探讨清金化痰汤调节慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠气道黏液高分泌的作用机制。方法 Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、清金化痰汤组与克拉霉素组,每组10只。除正常组外,其余3组均采用气管内注入脂多糖和烟熏复合法建立COPD模型,分别给予生理盐水、清金化痰汤、克拉霉素灌胃,连续30 d。实验第31日,处死大鼠提取肺组织,每组随机选取6只,采用实时荧光定量PCR检测肺组织中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)、表皮生长因子(EGFR)、黏蛋白5AC(MUC5AC)基因表达。结果模型组大鼠肺组织NE、MUC5AC m RNA表达较正常组升高;与模型组比较,清金化痰汤组、克拉霉素组NE、MUC5AC m RNA表达均显著降低,清金化痰汤组NE、MUC5AC m RNA表达较克拉霉素组显著降低;清金化痰汤组EGFR m RNA表达较模型组显著降低。结论清金化痰汤通过调节NE/EGFR/MUC5AC信号转导通路,抑制气道黏液高分泌。