慢性髓系白血病急变期分子遗传学研究进展

9号和22号染色体相互易位产生Ph染色体及BCR-ABL融合基因,几乎在所有慢性髓系白血病(CML)出现,BCR-ABL编码的蛋白具有持续增高的酪氨酸激酶活性,使白血病细胞异常增殖。急变期是CML的晚期,在此期间常常出现其它附加染色体和分子的改变。大量研究表明,BCR-ABL基因与其他失调的基因共同作用并异常激活下游的信号传导通路,促进了疾病的进展。酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼对大多数慢性期CML患者治疗效果显著。IRIS5年的临床试验显示:用伊马替尼治疗的98%患者达血液学完全缓解,92%患者达主要细胞遗传学缓解,87%患者达完全细胞遗传学缓解。然而,仍有少数慢性期和大多数进展期患者用伊马替尼治疗疗效欠佳。在耐药机制的研究中发现ABL激酶区点突变与临床耐药关系密切。第二代酪氨酸激酶抑制剂可改善伊马替尼耐药,本文就急性变的分子机制、伊马替尼耐药等做一综述。

慢性髓系白血病急变期差异表达基因的筛选

目的筛选慢性髓系白血病急性变相关关键基因,探寻疾病进展机制及潜在的生物标志物。方法应用基因芯片技术筛选与慢性髓系白血病急变期相关基因,采用生物信息学方法对这些差异表达基因进行基因本体分类,亚细胞定位以及组织选择性分析,结合转录因子预测和网络谱图构建,找出差异表达基因中的关键分子并进行初步验证。结果得到一组定位于白细胞膜的基因集,在整个调控网络中,CD40、CCR3、LGALS3、RGS3、CEACAM3及转录因子RAC1、CTNNB1、TP53、NF-kB处于网络节点位置,可能是疾病进展的关键调控基因,采用RT-PCR方法初步证实CEACAM3、RGS3、CTNNB1和RAC1在急变期患者表达显著增高。结论 CEACAM3、RGS3、CTNNB1和RAC1可能是慢性髓系白血病由慢性期向急变期转变的关键基因和生物标志物。

慢性髓系白血病急变期与急性白血病免疫表型的比较研究

目的比较慢性髓系白血病急变期(CML-BC)与急性白血病(AL)的免疫表型特征。方法采用一组单克隆抗体和四色流式细胞术对58例成人CML-BC及同期420例AL患者骨髓标本进行免疫表型分析。结果58例CML-BC中,CML-AML占77.6%,CML-ALL占13.8%,CML-MAL(混合性白血病)占5.2%;AL中,AML占66.2%,ALL占32.9%,MAL占1.0%。CML-AML中,CD7及CD34表达高于AML;CML-BC和CML-AML中CD7与CD34共阳性表达分别高于AL和AML(P<0.05)。276例AML中,纯型占62.3%,变异型占37.7%;130例ALL中,纯型占44.6%,变异型占55.4%;42例CML-AML中,纯型占59.5%,变异型占40.5%;8例CML-ALL中,纯型与变异型各占50.0%。结论CML-BC中干祖细胞阶段的抗原较AL高表达,变异型CML-BC与AL比例相当。

硼替佐米对慢性髓系白血病急变期原代细胞耐药的逆转作用及XIAP表达的影响

本研究旨在探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米对伊马替尼耐药的慢性髓系白血病(CML)急变期原代细胞药物敏感性及X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)表达的影响。采用MTT法观察伊马替尼单用与联合硼替佐米对伊马替尼耐药的CML急变期原代细胞生长增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡与P170糖蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测XIAP基因表达。结果表明,伊马替尼及硼替佐米单药对单个核细胞均表现出抑制作用,且呈时间-剂量依赖;联合5、10 nmol/L硼替佐米能明显增强单个核细胞对伊马替尼的敏感性;流式细胞术检测显示硼替佐米作用后细胞凋亡明显增高,同时P170糖蛋白表达明显降低;实时荧光定量PCR检测显示,耐伊马替尼CML急变期原代细胞高表达XIAP基因,硼替佐米作用后其表达下调。结论:硼替佐米可抑制白血病原代细胞并提高其对伊马替尼的敏感性,硼替佐米可能通过抑制XIAP的表达从而增加凋亡,这为扩展硼替佐米在临床上治疗CML提供实验依据。

慢性髓系白血病急变期病机变化与治疗

从络病理论分析,慢性髓系白血病早期络气郁滞,营卫生化异常,可见痰瘀互结,“承制”无力;应用抗肿瘤药物TKI干预后,慢性髓系白血病得以“调平”,维持在慢性期。随着痰瘀互结日久,则见络脉瘀塞,骨髓微环境中微血管大量生成,为白血病细胞提供营养支持,Wnt通路的激活使β-catenin蛋白蓄积,激活下游基因,促进白血病细胞增殖,“承制”无力,可见慢性髓系白血病的急变,预后多不良。此时,通过中医药介入,进行二次调平,可以改善临床症状,提高患者生活质量。

急变期慢性髓系白血病骨髓间充质干细胞下调白血病细胞凋亡

本研究旨在观察慢性髓系白血病(CML)骨髓间充质干细胞(BMMSC)对K562细胞和原代急变期CML白血病细胞增殖和凋亡的影响及其可能的机制及意义。K562细胞和原代急变期CML白血病细胞分别与不同组别的BMMSC共培养,应用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞线粒体膜电位,Western blot检测凋亡相关蛋白caspase-8、caspase-9、激活的caspase-3的表达。结果表明:CML急变期BMMSC不能抑制原代CML急变期白血病细胞的增殖,对K562仅有轻度的抑制作用;CML急变期BMMSC提高阿霉素处理后的K562细胞的存活率,并保护K562及原代CML-Bp骨髓单个核细胞,抑制阿霉素诱导的细胞凋亡(P<0.05);与CML慢性期及正常组BMMSC相比较,CML急变期BMMSC对白血病细胞的保护作用最强,其细胞共培养组的细胞线粒体膜电位下降最少(P<0.05);检测CML急变期BMMSC共培养组的K562显示,活性Caspase-3表达均较单独K562+ADM组明显下调,caspase-9表达显著增加(P<0.05)。结论:CML急变期BMMSC下调阿霉素诱导的白血病细胞的凋亡,其机制可能与抑制细胞线粒体膜电位的下降,稳定caspase-9蛋白非活性的表达和下调caspase-3蛋白的激活有关。

慢性髓系白血病慢性期TKI治疗未达最佳反应或不耐受患者转换氟马替尼的有效性和安全性临床观察

目的 观察TKI未达最佳反应或不耐受的慢性髓系白血病-慢性期(chronic myelogenous leukemia-chronicphase, CML-CP)患者转换氟马替尼治疗的效果及安全性。方法 从重庆市医院及川北医学院附属医院共5家医院收集2020年2月至2022年8月对一线伊马替尼、达沙替尼、尼洛替尼未达最佳反应或不耐受,转换氟马替尼(600 mg/d)治疗的患者,观察氟马替尼的疗效及安全。统计患者治疗3、6、12个月时最佳反应率及主要分子学反应(major molecular response, MMR)率、累积完全细胞遗传学反应(complete cytogenetic response, CCyR)率、累积MMR率、累积深度分子学反应(deep molecular response, DMR)率、无进展生存(progression-free survival, PFS)、无事件生存(event-free survival, EFS)情况及不良反应情况。结果 共纳入100例CML-CP患者,中位随访时间为18(3~36)个月,3、6、12个月最佳反应率分别为92.6%(88/95)、94.4%(85/90)和92.9%(79/85),随访截止至2023年8月20日,累积CCyR、MMR率分别为98.0%(98/100)、81.9%(77/94),达CCyR和MMR的中位时间均为3个月,累积DMR率为51.0%(51/100)。随访时间内,PFS率为100.0%(100/100),1年EFS率为85.6%(75/90)。氟马替尼最常见非血液学不良反应为腹泻腹痛(7.0%),其次为肾功能损害(6.0%)、肌肉骨骼疼痛(2.0%);血液学不良反应主要有血小板减少(12.0%)、贫血(6.0%)和白细胞减少(2.0%)。结论 氟马替尼治疗TKI未达最佳反应或不耐受的CML-CP患者有较好的MMR和DMR,耐受性及安全性良好。

单中心成人慢性髓系白血病慢性期临床特点和生存分析

目的:探讨单中心成人慢性髓系白血病慢性期(CML-CP)的临床特点及预后。方法:回顾性分析上海市奉贤区中心医院血液科自2015年1月至2021年5月收集的41例成人CML-CP患者临床资料,比较<60岁和≥60岁组患者的临床特点和预后。结果:41例患者中男性27例(65.9%),女性14例(34.1%),中位年龄56(19-48)岁其中<60岁22例(53.7%),≥60岁19例(46.3%)。单因素分析结果显示,≥60岁组初诊时有合并症、Sokal积分中/高危、骨髓纤维化、乳酸脱氢酶水平≥1000 U/L的患者比例较<60岁组显著增加(均P<0.05)。性别、ELST积分、白细胞数、血小板数、外周血嗜碱性粒细胞比例、外周血嗜酸性粒细胞比例和骨髓原始细胞比例等在两组间的分布差异无统计学差异(P>0.05)。≥60岁组中服用减低剂量伊马替尼的患者比例明显上升(P<0.001);<60岁患者采用酪氨酸激酶抑制剂(TKI)治疗后的分子生物学缓解比例高于≥60岁患者(P<0.001)。TKI治疗的非血液学不良反应发生率在≥60岁患者中的比例明显增加(P<0.001)。多因素分析未发现影响TKI疗效及预后的不良因素。结论:与<60岁成人CML-CP患者相比,≥60岁患者TKI治疗获益较少且不良反应增加。

初诊慢性髓系白血病患者早期分子学反应的预测模型构建及评估

目的分析初诊慢性髓系白血病(CML)患者早期分子学反应(EMR)的影响因素并构建列线图预测模型,为CML患者预后评估及药物选择提供参考。方法回顾性分析2013年1月至2023年10月六安市人民医院血液内科收治的78例成人CML患者的临床资料。依据服用酪氨酸激酶抑制剂(TKI)后3个月BCR/ABLIS基因水平,将其分为EMR组(≤10%,n=59)和非EMR组(>10%,n=19),筛选出与EMR相关的影响因素,采用logistic回归分析明确EMR的独立影响因素,并基于相关因素应用R软件构建列线图预测模型,通过内部验证以及与传统CML评分系统对比分析,评估模型的预测效能。结果78例CML患者中,服药后3个月BCR/ABLIS水平为1.67(0.47,10.00),其中有59例(75.64%)获得EMR。多因素logistic分析显示,红细胞分布宽度(RDW)、TKI类型、BCR/ABLIS水平及ELTS评分是CML患者获得EMR的独立影响因素(P<0.05)。根据所筛选的4个独立影响因素构建CML患者EMR的列线图预测模型,模型内部验证的校准曲线提示模型预测值与实际值基本一致,受试者工作特征曲线的曲线下面积(AUC)为0.975(95%CI:0.948~1.000),决策曲线分析显示阈值概率在10%~100%,模型净获益率最高,提示预测模型具有较好的一致性、区分度及临床实用性。将列线图预测模型与传统CML评分系统对比分析,结果显示列线图预测模型的灵敏度(98.3%)、特异度(84.2%)及AUC值(0.975)均优于传统CML评分系统。结论基于CML患者EMR的独立影响因素构建的列线图预测模型,可用于预测CML患者EMR的获得,为初诊CML患者治疗及预后评估提供参考。

分化抑制因子家族在慢性髓系白血病中的表达及临床意义

目的:探索分化抑制因子(inhibitor of differentiation,ID)家族在慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)中的表达和启动子甲基化水平,并分析其临床意义。方法:应用定量PCR及定量甲基化特异性PCR的方法检测2010年1月至2017年12月期间江苏大学附属人民医院就诊的非恶性血液病患者(对照组)和CML患者骨髓单个核细胞中ID2/ID3/ID4表达及ID4启动子甲基化水平,通过分组分析ID家族异常的临床意义。结果:ID2及ID3表达在CML患者中均呈现显著上调(P<0.001,P<0.05),而ID4表达在CML患者中呈现显著下调(P<0.01)。其中,接受者操作特征曲线分析揭示ID2表达可作为CML鉴别的潜在分子标志物(AUC=0.895,P<0.001)。CML患者中ID4启动子高甲基化概率显著高于对照组患者(P=0.001),且ID4启动子甲基化与ID4表达呈现负相关(r=-0.424,P=0.002)。通过分组分析发现ID2高表达较易发生于男性患者中(P=0.040);ID4低表达/高甲基化较易发生于加速/急变期患者(P=0.003,P<0.001)。此外,CML加速/急变期患者ID4表达水平低于慢性期患者(P<0.001),而ID4甲基化水平高于慢性期患者(P<0.001)。通过单因素及多因素Logistic回归分析发现ID4高甲基化是CML患者疾病进展的独立危险因素(P=0.007)。结论:ID家族在CML患者中表达态势不同,其中ID2/ID3表达上调;而ID4表达下调,与ID4启动子高甲基化相关。ID4表达/甲基化与CML疾病进展相关,其中ID4甲基化可能是CML疾病进展的独立危险因素。

慢性粒细胞白血病急变期的诊疗策略

相对于慢性粒细胞白血病(CML)慢性期,进入急变期的患者治疗效果差,生存期短,预后欠佳。虽然国内外CML急变期的治疗方案众多,包括单药酪氨酸激酶抑制剂(TKI)治疗、单药化疗、TKI联合化疗、异基因造血干细胞移植等方案,但其缺乏统一标准,且疗效各异。本文通过综述国内外CML急变期的诊疗策略,归纳总结不同方案对CML急变期的疗效,探讨可能的最佳治疗方案。

慢性髓系白血病急变期中免疫分型研究

目的探讨慢性髓系白血病急变期(CML-BC)的免疫表型特征及应用价值。方法采用一组单克隆抗体和三色流式细胞术对36例成年人CML-BC骨髓标本进行免疫表型分析。结果36例CML-BC患者中急性非淋巴细胞白血病变30例(83.33%),其中40%(12/30)伴淋系表达;急性淋巴细胞白血病变急淋变3例(8.33%),其中66.67%(2/3)伴髓系表达;急性混合型白血病变2例;急性未分化型白血病变1例。CML-BC以CD33阳性率最高(91.67%),其次是CD1+3(86.11%),CD3+4(61.11%),CD+7(33.33%),CD1+0(19.44%),CD1+9(16.67%),CD+2(2.78%),CD2+0(5.56%)及CD1+4(5.56%)。CD7与CD34共阳性27.78%。结论CML-BC免疫表型复杂,多系表达常见。免疫分型可协助判断CML的急变类型。

老年慢性髓系白血病的急变期特征及其对伊马替尼耐药机制的研究进展

慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)是临床常见的恶性骨髓增殖性疾病。研究^([1])报道,慢性髓系白血病的发病机制主要与Ph染色体以及BCR-ABL融合基因的出现有关。根据患者的临床表现,目前可以将CML的病程分为慢性期、加速期以及急变期。通常患者的急性变是造成死亡的重要原因之一^([2])。

人脐带间充质干细胞运载呼肠孤病毒对人慢性髓系白血病K562细胞溶瘤作用的研究

目的:探讨人脐带间充质干细胞(hUMSCs)运载3型呼肠孤病毒(Reo3)对人慢性髓系白血病K562细胞的溶瘤效应。方法:流式细胞术检测hUMSCs和K562细胞表面Reo3易感受体——连接黏附分子A(JAM-A)表达情况,电镜观察Reo3感染hUMSCs 72 h后胞内病毒包涵体分布。将不同(0、1、2和3)感染复数(MOI)的Reo3感染hUMSCs 24、48、72、96和120 h后利用CCK-8法筛选最适MOI。选择最适滴度的Reo3感染hUMSCs 24、48、72、96和120 h后收集上清液,利用小鼠成纤维细胞系L929结合半数组织培养感染剂量(TCID50)法测定各组上清液中Reo3病毒滴度以确定最适感染时间。将K562细胞分为对照组、hUMSCs组、Reo3组和hUMSCs-Reo3组,hUMSCs组和hUMSCs-Reo3组设置hUMSCs与K562细胞作用的低、中、高比例(5∶1、10∶1和20∶1)。CCK-8法分析hUMSCs-Reo3与K562细胞共培养24、48、72 h后K562细胞活力的变化。流式细胞术评估细胞凋亡。利用L929细胞确定抗Reo3单克隆抗体的半数效应浓度(EC50);验证在体外抗体存在条件下hUMSCs-Reo3对K562细胞溶瘤作用的变化。Western blot检测运载体作用于K562细胞后胞内Bcl-2、Bax、survivin和cleaved caspase-3蛋白水平。构建K562细胞的BALB/c裸鼠皮下荷瘤模型(每组6只),分析hUMSCs-Reo3在体内对K562细胞的抑瘤效果。结果:hUMSCs和K562细胞表面JAM-A分子表达量分别为11.0%和99.0%。电镜显示Reo3感染hUMSCs 72 h后胞内出现大量病毒包涵体。在120 h范围内,与未感染组相比,MOI=1的Reo3对hUMSCs活力无显著影响,故最佳MOI为1;TCID50结果显示,MOI=1的Reo3感染hUMSCs 48 h后细胞裂解液中病毒滴度最高,故最适感染时间为48 h。hUMSCs-Reo3作用24、48和72 h后K562细胞活力呈现剂量与时间依赖性抑制。抗Reo3单克隆抗体的EC50为1∶34;在体外不同浓度(1∶34、1∶300和1∶600)抗体存在条件下,hUMSCs仍能运载Reo3抑制K562细胞活力并诱导凋亡发生。与对照组相比,hUMSCs-Reo3作用48 h后K562细胞中Bcl-2和survivin表达水平显著下调(P<0.05),Bax和cleaved caspase-3表达水平显著上调(P<0.05或P<0.01)。在BALB/c裸鼠荷瘤模型中,荷瘤体积测定、肿瘤组织和主要脏器病理学分析及小动物活体成像仪检测组织蛋白酶B/L活性结果表明,运载体在体内对K562细胞具有溶瘤效应而对正常组织无不良影响。结论:hUMSCs可有效运载Reo3,该运载体系在体内、外实验中能够释放足量Reo3抑制K562细胞恶性增殖并促进细胞凋亡,从而发挥溶瘤效应。

Ponatinib对人慢性髓系白血病细胞株K562自噬的影响

酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitors,TKIs)是治疗白血病的靶向药物,其中第3代的Ponatinib疗效最强、见效最快,但与其他TKIs在作用机制上存在的差异尚不明确.为此,采用第1代的Imatinib和第3代的Ponatinib处理慢性髓系白血病细胞株K562细胞,观察活细胞数量、线粒体活性、活性氧(reactive oxygen species,ROS)和自噬相关分子的变化.经研究发现,Ponatinib比Imatinib更显著地抑制K562细胞的增殖和生存率,并降低了线粒体活性,但ROS没有明显差异;免疫印迹实验发现Ponatinib比Imatinib更明显促进自噬标志性分子LC3B蛋白的表达,并显著降低自噬受体蛋白p62的表达,但未检测到AMPKα、ULK1和Beclin1蛋白的磷酸化.此外,Bafilomycin A1能阻止Ponatinib对p62蛋白的抑制作用,而Brefeldin A和N-乙酰-L-半胱氨酸未能起到阻止作用.这些结果表明,Ponatinib比Imatinib更显著地引起K562细胞的线粒体损伤,进而诱导更明显的自噬,这一发现可能为解释Ponatinib疗效更强的作用机制提供重要线索.

不同药物对慢性髓系白血病细胞增殖的影响

目的探讨氟马替尼、地西他滨、三氧化二砷以及维奈托克对人慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)K562细胞系增殖的影响,为CML新的治疗方案提供实验室依据。方法利用不同浓度的氟马替尼、地西他滨、三氧化二砷、维奈托克分别单独及两药联合作用于K562细胞,采用CCK-8法测定细胞增殖活力,采用Compusyn软件计算两药联合作用的联合指数。结果不同浓度的氟马替尼、三氧化二砷、地西他滨及维奈托克单药均可抑制K562细胞增殖,差异均有统计学意义(P<0.01);氟马替尼、地西他滨、三氧化二砷分别两药联合可增强对K562细胞的抑制作用(P<0.01),但分别与维奈托克联合后对K562细胞的抑制无明显增强(P>0.05)。结论氟马替尼、三氧化二砷、地西他滨、维奈托克单药均能抑制K562细胞的增殖,氟马替尼、地西他滨、三氧化二砷分别两药联合均有协同作用;而这3种药物分别与维奈托克联合无明显协同作用。

慢性髓系白血病患者各期id4基因甲基化状态研究

本研究探讨id4基因在慢性髓系白血病(CML)不同时期甲基化状态及其与疾病进展的关系。采用甲基化特异的PCR(MS-PCR)方法对48例CML患者和10例正常人的骨髓标本进行id4基因启动子区甲基化状态检测。结果表明:id4基因在正常人及CML慢性期患者骨髓中呈现完全非甲基化状态,而在CML急变期(包括加速期)骨髓中id4甲基化率为66%,较正常人和CML慢性期明显增加,二者差异具有统计学意义(p<0.05)。系列研究结果也显示,同一CML患者的id4基因甲基化状态在慢性期时是非甲基化的,而在加速期或急变期却为甲基化状态。结论:id4基因在CML慢性期呈非甲基化,在加速期或急变期则呈甲基化状态,因而检测id4基因甲基化程度有助于监测CML患者的病情演变,可作为CML疾病进展的标志。

119例慢性髓细胞白血病急变期核型分析

为了探讨慢性髓细胞白血病急变期(CML-BC)核型变化规律及意义,应用R显带技术对119例CML-BC患者的核型资料进行分析,并在其中随机选出28例以荧光原位杂交法(FISH)检测衍生9号染色体[der(9)]是否缺失。结果表明124例核型检查中Ph阴性11例(8.9%),Ph阳性113例(91.1%),其中典型易位104例(83.9%),单纯变异易位4例(3.2%),复杂变异易位5例(4.0%);Ph阴性CML-BC中72.6%伴有附加染色体异常,主要类型是i(17q)、+14,Ph阳性者72.3%伴有附加染色体异常,主要类型是+Ph、+8、i(17q);Ph阴性CML-BC急变时间为2-66月,平均29.0月,Ph阳性者急变时间为1-127月,平均34.2月,两组比较无统计学差异(P>0.05);FISH检测发现5例(5/28,17.9%)der(9)缺失。结论慢性髓细胞白血病急变期附加染色体异常多见,FISH技术可有效检测der(9)缺失。

伊马替尼治疗加速期和急变期慢性髓细胞性白血病的临床研究

慢性髓细胞性白血病（CMI．）具有特殊的细胞遗传学异常。以bcr／abl融合基因的激酶作为靶点的药物伊马替尼（imatinib），其商品名为格列卫（Glivec），对CML显示出了良好的治疗效果，其对慢性期患者的分子生物学缓解率达75％以上，但对进入加速期及急变期CML的治疗效果国内报道不多。本研究总结了本院2002年以来18例加速期及急变期CML应用伊马替尼治疗的效果，供同行参考。