慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)聚羟丁酸合成酶基因(phbC)突变体的构建及其特性

通过转座子Tn5诱变和同源重组 ,构建了BradyrhizobiumjaponicumUSDA110聚羟丁酸合成酶基因 (phbC)突变体 .序列测定确定了转座子插入的精确位置 ,所获得的 4个转座子诱变的质粒其Tn5插在 phbC基因内两个相距仅 9bp的位点 .被Southern和PCR证实的突变体菌株仍能产生相当于野生型菌株 12 .97%～ 2 5 .10 %的PHB ,并且在突变体和野生型菌株总DNA杂交图上都呈现出一条约 5kb的阳性带 ,推测在B .japonicum基因组中存在不止一个聚羟丁酸合成酶基因 .图 3表 4参

慢生型大豆根瘤菌的遗传多样性研究

采用选择性扩增片断长度多态性 (简称AFLP)DNA指纹技术对来自泰国北部的 2 45株慢生型大豆根瘤菌进行遗传多样性的研究 .通过AFLP图谱揭示出该地区的慢生型大豆根瘤菌有较显著的遗传多样性 .从 2 45株中选择出 92个代表株用计算机进行的树状图分析结果表明 ,所分析的菌株在 82 %的相似性水平上聚类成 8个群 .对这 92个代表株的部分菌株和慢生型大豆根瘤菌的参比菌株进行多聚酶链反应 (PCR)扩增的 16SrDNA的 4种限制性内切酶长度多态 (简称 16SrDNAPCR RFLP)分析 ,得出 2个不同的 16SrDNAPCR RFLP类型的菌株 ,分别与慢生型大豆根瘤菌的参比菌株Bradyrhizobiumjaponicum和Bradyrhizobiumelkanii相同 .图 1表 2参

慢生型大豆根瘤菌染色体的16kb EcoRⅠDNA片段的亚克隆测序分析

亚克隆测序分析发现 ,在 Bradyrhizobium japonicum的 GX2 0 1菌株染色体的 1 6kb Eco R DNA区段上含有一个与 put A基因同源的基因的 ORF30 54( Open Reading Frame) .该基因 ORF长 30 54bp,在核苷酸水平上与已报道的 put A基因有 94 %一致性 .其推断性的编码产物在氨基酸水平上与 put A编码产物脯氨酸脱氢酶 ( Pro DH)有 95%一致性 .利用 Tn5gus A5诱变的方法获得了该同源基因的标记置换突变体 ,该突变体在液体培养基 ( YMA)

慢生型大豆根瘤菌nfeC基因的定位

在前期工作中 ,从慢生型大豆根瘤菌菌株 GX2 0 1的基因文库中筛选到一个含 nfe C基因同源片段的重组质粒 p GXN2 0 1。在本工作中 ,将 nfe C基因同源片段定位在 4 kb Cla I+Xba I片段上。对该片段的部分序列分析表明与已报道的 nfe C基因具有

慢生型大豆根瘤菌nfeC基因的克隆及序列分析

通过亚克隆 ,将重组质粒 pGXN2 0 1中与nfeC基因同源的片段定位在 4kbClaI+XbaI片段上。序列分析表明该片段全长 40 38个碱基。该片段上含有一个完整的阅读框架。该阅读框架编码一个含 2 75个氨基酸的多肽 ,与已报道的nfeC基因编码的蛋白质具有 93%的同源性。

慢生型大豆根瘤菌菌株GX201的脯氨酸脱氢酶基因(putA)的分子克隆

根据已报道的脯氨酸脱氢酶基因（ｐｕｔＡ）序列，通过ＰＣＲ方法，从慢生型大豆根瘤菌菌株ＧＸ２０１的总ＤＮＡ中扩增到—ＰＣＲ产物。序列分析表明，该ＰＣＲ产物的长度为４１８ｂｐ，与已报道的ｐｕｔＡ基因具有９３．５％的同源性。以广谱寄主范围质粒ｐＬＡＦＲ３为载体，在大肠杆菌ＤＨ５α中构建了ＧＸ２０１的基因文库，并以该ＰＣＲ产物为探针，从基因文库中筛选到一重组质粒ｐＧＸＮ３００。

野大豆快生型根瘤菌共生固氮及其生理生化特性研究

实验围绕野大豆———快生型根瘤菌共生固氮和抗药、耐盐、代谢产物等生理生化特性方面进行检测和研讨,旨在为筛选抗逆性强、高固氮活性菌株和农业应用提供理论依据.

快生型大豆根瘤菌的研究

根瘤菌是一类可以在豆科植物上结瘤的杆状细菌,它们是重要的土壤微生物类群。曲于根瘤菌与豆科植物共生时,能够把空气中的氮气转化成氨及其化合物,供给植物利用,因而与人类的生活、生产有十分密切的关系。人类对根瘤菌的研究已将近一百年,而把根瘤菌应用到农牧业生产上也有几十年的历史了。可以说,根瘤菌在农牧业生产上发挥了重要的作用。现在,世界上许多国家的生物固氮研究项目中,根瘤菌一直是个重要的方面。

大豆根瘤菌研究的新进展

大豆根瘤菌可以和大豆植株共生结瘤,固定空气中的氮素供大豆植株吸收利用,从而促使大豆增产。对大豆根瘤菌的研究也在逐步深入。过去的研究把根瘤菌属分为快、慢二个类型。快生型根瘤菌,如苜蓿根瘤菌(Rhizobium meliloti)、豌豆根瘸菌(R.leguminosarum)、三叶草根瘤菌(R.trifolii)等,繁殖一代需时间为2—4小时。慢生型根瘤菌,如大豆根瘤菌(R.japonicum),羽扇豆根瘤菌(R.lupini)等繁殖一代所需时间为6小时或6小时以上。

根瘤菌与豆科植物之间的“分子对话”

根瘤菌是一类格兰氏阴性好气的异养型土壤细菌,它们能侵染豆科植物形成一种特殊的结构—根瘤,将大气中的氮气转化为植物可以直接利用的氨,即共生固氮作用。其在农业上的潜在应用价值推动了全世界范周内的科学家进行了一个多世纪的持续研究。目前,根瘤菌与豆种植物共生固氮体系是所有微生物与植物相互作用中了解得最为清楚的一个系统。 宿主专一性(host specificity)是这一共生固氦体系的一个非常重要的特征,即每一种根瘤菌(或菌株)都有一定的宿主范围,只能在一定数量的豆科植物上结瘤。研究表明,在共生体系形成的过程中,