慢病毒介导的胶质瘤模型在教学中的应用

目的比较移植性肿瘤动物模型与慢病毒介导的胶质瘤模型在教学中的应用效果。方法选取50名临床8年制5年级学生,根据不同的实验操作,将学生随机分为移植性肿瘤动物模型组(n=25)以及慢病毒介导的胶质瘤模型组(n=25)。移植性肿瘤动物模型组以大鼠胶质瘤细胞系9L脑纹状体注射Wistar大鼠模型进行实验操作;而慢病毒介导的胶质瘤模型组则以慢病毒载体介导Ras的表达以及Akt的激活,注射胶质纤维酸性蛋白(GFAP)-Cre基因小鼠进行实验操作。教学结束后比较两组的教学反馈和教学成果。结果与移植性肿瘤动物模型组相比,慢病毒介导的胶质瘤模型组成员对该模型的教学反馈评价更高,该模型的重复性更好,使学生对肿瘤分子水平的认识更深入,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论慢病毒介导的胶质瘤模型在教学中应用具有可行性,不仅提供了一个较新的模型,也使得学生能够从分子水平认识肿瘤,对于肿瘤的理解更为深入。

慢病毒介导的CBS基因沉默对人胶质瘤细胞增殖的影响

目的:探究催化产生内源性H2S的酶CBS在人胶质瘤细胞增殖中的作用。方法:以人脑胶质瘤U87细胞为实验对象,使用CBS基因shRNA慢病毒载体转染胶质瘤细胞CBS基因,利用0.5μg/mL嘌呤霉素筛选建立CBS-RNAi慢病毒的U87稳定细胞株,通过qPCR法对各组CBS基因的表达量检测,确定目标基因的沉默效果以及CBS基因沉默对于U87细胞的增殖能力的影响。结果:与空白对照组相比,CBS-RNAi 2组的CBS mRNA表达量明显降低,CBS-RNAi 1组和CBS-RNAi 3组的CBS mRNA表达量降低;证明慢病毒介导的RNAi可有效沉默人胶质瘤U87细胞的CBS基因,且CBS-RNAi组沉默人胶质瘤细胞CBS基因的效果最佳。结论:沉默CBS基因能够抑制人胶质瘤U87细胞的体外增殖,CBS基因或可成为临床治疗人脑胶质瘤的新靶点。

慢病毒介导的调节因子XⅠ过表达及其对胶质瘤细胞增殖的抑制作用

目的:构建调节因子X1(regulatory factor X1,RFX1)过表达慢病毒载体,并观察其对F98细胞增殖的影响。方法:运用PCR技术扩增RFX1,并将其插入慢病毒空载体质粒p ITA,构建p ITA-RFX1慢病毒质粒,经琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定正确。将包装慢病毒共转染293T细胞,然后感染F98细胞。利用Western印迹和激光共聚焦验证RFX1过表达情况,用流式细胞仪和CCK-8试剂盒观察转染前后细胞增殖情况。结果:电泳和测序显示慢病毒载体p ITA-RFX1构建成功,将其感染F98细胞后过表达RFX1蛋白,同时可以明显抑制细胞的增殖。结论:过表达慢病毒载体构建成功,上调RFX1可以降低恶性胶质瘤细胞的增殖。

慢病毒载体介导RNAi稳定抑制VASH1表达对人脑胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨运用慢病毒载体介导的RNA干扰技术抑制血管生成抑制因子1(VASH1)的表达对人脑胶质瘤U-87MG细胞增殖和凋亡的影响。方法应用p GCL-GFP质粒构建针对VASH1的慢病毒sh RNA载体,转染入工具细胞293T,筛选出适合浓度的慢病毒转染人脑胶质瘤U-87MG细胞;通过RT-PCR和Western blot评价其对U-87MG细胞内VASH1表达的影响;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察U-87MG细胞增殖活性的改变;用流式细胞仪(FCM)检测U-87MG细胞凋亡的变化。结果与转染阴性对照组和空白组相比,转染p GCL-GFP-VASH1慢病毒载体的U-87MG细胞VASH1的m RNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01);细胞的增殖活性显著上调(P<0.01),细胞凋亡明显减少(P<0.01)。结论 VASH1 sh RNA慢病毒载体可抑制VASH1在人脑胶质瘤U-87MG细胞中的表达,并增加肿瘤细胞的增殖活性,抑制细胞凋亡。

慢病毒载体介导红色荧光蛋白基因转染人脑胶质瘤干细胞的实验研究

目的探讨HIV-1来源的慢病毒载体介导红色荧光蛋白（RFP）基因转染人脑胶质瘤干细胞可行性和试验方法。方法用无血清干细胞培养基培养人脑胶质瘤干细胞，然后用细胞免疫荧光染色检测其干细胞特性表面标志物CDl33、Nestin表达情况。以HIV-1来源的慢病毒为载体，以RFP基因为目的的基因转染人脑胶质瘤干细胞，荧光显微镜下观察RFP阳性细胞表达情况及其转染率。MTT法检测转染后细胞与未转染RFP细胞组细胞增殖情况。再次用细胞免疫荧光染色检测转染后脑胶质瘤干细胞表面标志物CDl33、Nestin表达情况。结果红色荧光慢病毒转染胶质瘤干细胞体外连续培养后，RFP在干细胞中稳定表达，在荧光显微镜下即发出红色荧光，并且转染效率高。RFP．1entivirus转染后干细胞与未转染RFP组比较，生长曲线无明显差异，且转染后干细胞表面标志物仍表达阳性。结论采用HIV-1来源的慢病毒载体介导以RFP基因为生物标记物标记人脑胶质瘤干细胞是可行的，以慢病毒转染对干细胞的生长影响小，转染效率高。

慢病毒介导的RWDD3沉默对人胶质瘤U251细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨沉默RWDD3表达对人胶质瘤U251细胞生物学特征的影响。方法:构建靶向RWDD3的shRNA重组慢病毒并转染U251细胞,通过real-time PCR和Western blot在mRNA及蛋白水平鉴定转染结果。MTT法检测转染后细胞的细胞活力;平板克隆实验检测克隆形成能力;Brd U实验检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力的变化;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡的改变。结果:real-time PCR和Western blot结果均表明成功建立稳定沉默RWDD3的U251细胞株。与空白对照组及阴性对照组比较,转染RWDD3-shRNA组的细胞活力和克隆形成能力降低;侵袭及迁移能力均下降,穿膜细胞数明显减少;细胞周期进展被抑制,阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率增高(P<0.05)。结论:RWDD3在胶质瘤细胞增殖和侵袭过程中发挥重要作用,提示RWDD3有望成为人脑胶质瘤基因治疗的候选靶点。

慢病毒介导生长分化因子15基因沉默增强胶质瘤U373细胞的化疗耐药性

目的:探讨慢病毒介导的生长分化因子15(growth differentiation factor 15,GDF15)基因低表达对胶质瘤U373细胞对化疗药物替尼泊苷(teniposide,VM-26)和顺铂(cisplatin,DDP)耐药性的影响及其可能的机制。方法:将靶向GDF15的GDF15-RNAi克隆入慢病毒载体GV248,构建shRNA慢病毒LV-GDF15-RNAi,用无关序列构建阴性对照慢病毒LV-RNAi,分别稳定转染U373细胞,Western blotting检测转染对细胞内GDF15表达的影响。用梯度质量浓度的VM-26(0.1、0.5、2.5和12.5μg/ml)和DDP(0.08、0.4、2和10μg/ml)处理LV-GDF15-RNAi组和LV-RNAi组细胞48 h,MTT法、Hoechst/PI双染检测LVGDF15-RNAi转染对U373细胞VM-26、DDP耐药性的影响,Western blotting检测LV-GDF15-RNAi转染对U373细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bcl-x L、P53和Caspase-3表达的影响。结果:成功构建稳定低表达GDF15的U373细胞系,LV-GDF15-RNAi组细胞内GDF15表达较LV-RNAi组和野生型U373细胞显著降低(0.013±0.001 vs 0.622±0.068、0.601±0.004,均P<0.01)。VM-26和DDP在最低浓度时,LV-GDF15-RNAi组细胞存活率即显著高于LV-RNAi组[VM-26 0.1μg/ml:(91.84±2.64)%vs(80.71±2.66)%,P<0.01;DDP 0.08μg/ml:(102.35±6.79)%vs(85.10±3.69)%,P<0.01],随药物浓度升高差异更加显著。相同浓度的VM-26或DDP处理下,LV-GDF15-RNAi组细胞凋亡数均少于LV-RNAi组;同时,LV-GDF15-RNAi组的Bcl-2和Bcl-x L的表达量比LV-RNAi组显著增多(P<0.05或P<0.01),Caspase-3和P53的表达量显著下降(P<0.05或P<0.01)。结论:下调胶质瘤U373细胞中GDF15水平能够增强细胞对VM-26和DDP的耐药性,其机制可能与GDF15调控Bcl-2、Bcl-x L、P53和Caspase-3的表达有关。

慢病毒介导PTEN-Long过表达抑制人脑胶质瘤U251细胞裸鼠移植瘤的生长

背景:第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(phosohataseandtensinhomolguedeletedon chromosome10,PTEN)的翻译变体(PTEN-Long)是新发现的一种肿瘤抑制基因,与多种肿瘤的发展密切相关。目的:探讨PTEN-Long对人脑胶质瘤U251细胞裸鼠异体移植瘤生长的抑制作用及相关分子机制。方法:(1)人脑胶质瘤细胞U251购自国家实验细胞资源共享服务平台北京总部,实验将未感染慢病毒的U251为对照组,感染LV-EGFP的U251为空载组,感染LV-PTEN-Long-EGFP的U251为过表达组,用荧光显微镜、Western blot检测转染效率;(2)实验将购自北京华阜康生物科技股份有限公司的BALB/c-nu雄性裸鼠随机分为3组,将3组细胞分别接种于裸鼠背部皮下,观察裸鼠一般状况及肿瘤生长趋势,分析各组裸鼠皮下肿瘤的体积及质量变化,免疫组织化学染色法检测肿瘤中PTEN-Long,p-Akt及NF-κB p65蛋白表达变化情况。结果与结论:(1)一般状况:PTEN-Long过表达后可抑制裸鼠皮下胶质瘤细胞的增殖,与对照组及空载组相比,过表达组裸鼠肿瘤体积及质量减少(P <0.01);(2)免疫组织化学染色显示:与对照组及空载组相比,过表达组PTEN-Long表达量增加(P<0.05),p-Akt及NF-κBp65表达量降低(P<0.05);(3)结果显示:PTEN-Long可抑制人脑胶质瘤U251细胞裸鼠异体移植瘤的生长,机制可能与下调PI3K-AKT-NF-κB信号通路有关。

慢病毒介导的miR-27a下调对U87胶质瘤细胞的影响

目的:探讨下调miR-27a对U87胶质瘤细胞的影响。方法 :分别用慢病毒干扰质粒miRZip-27a anti-miR-27a mi-croRNA construct或慢病毒空质粒pGreenPuro Scramble Hairpin Control-Construct与慢病毒包装质粒混合物共转染293T细胞,获得慢病毒颗粒命名为Lt-I和Lt-NC。然后分别用慢病毒Lt-I和Lt-NC感染U87胶质瘤细胞,通过流式细胞仪筛选出稳定感染的U87胶质瘤细胞。通过定量PCR法分别检测稳定感染的U87细胞和未感染的空白U87细胞miR-27a,CCK-8法检测胶质瘤细胞增殖情况,Transwell侵袭试验检测胶质瘤细胞的侵袭能力。结果:相对于未感染慢病毒的空白U87胶质瘤细胞,稳定感染Lt-I的U87胶质瘤细胞miR-27a表达明显下调、细胞增殖减缓、侵袭能力降低,而感染Lt-NC组(阴性对照组)则未见此改变。结论:miR-27a的下调能有效抑制U87胶质瘤细胞的增殖,降低U87胶质瘤细胞的侵袭能力。

慢病毒介导的Cullin3沉默对人胶质瘤细胞的影响

目的:探讨慢病毒介导特异性短发夹RNA(sh RNA)干扰Cullin3表达对人胶质瘤细胞的影响。方法:RT-q PCR及Western blot检测Cullin3在人胶质瘤细胞系SW1783,U251及U87MG中的表达;构建靶向Cullin3的sh RNA重组慢病毒,转染U251和U87MG细胞并测定转染效率。实验分为3组:Blank组(阴性对照组)、NC-sh RNA组(空载慢病毒组)及Cullin3-sh RNA组(慢病毒介导Cullin组)。MTT法和Brd U实验检测细胞活力和增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞周期的变化。结果:与正常人星形胶质细胞相比,Cullin3在人胶质瘤细胞系SW1783,U251及U87MG中高表达。Cullin3-sh RNA转染U251和U87MG细胞后,与Blank组及NC-sh RNA组相比,Cullin3-sh RNA组Cullin3表达水平下降(P<0.05),细胞活力和细胞增殖能力显著降低,侵袭能力下降,细胞周期被阻滞于G0/G1期。结论:Cullin3在胶质瘤细胞增殖和侵袭过程中发挥重要作用,提示Cullin3有望成为人脑胶质瘤基因治疗的候选靶点。

腺病毒介导PTEN基因对胶质瘤血管生成和肿瘤生长的影响

目的 :探讨 PTEN 对人脑胶质瘤血管生成和肿瘤生长的抑制作用。 方法 :用含 PTEN基因的重组腺病毒载体Ad PTEN,体外转染人胶质瘤细胞 U87,Western印迹分析检测其表达 ,采用鸡胚绒毛尿囊膜实验检测其对血管生成的作用 ,体内实验检测腺病毒对肿瘤体积的影响 ,同时以免疫组化法检测 因子相关抗原和基质金属蛋白酶 (MMP- 2 )的表达 ,并与U87组 (不予任何处理 )和 Ad X- gal转染组相比较。结果 :U87转染 Ad PTEN腺病毒后 PTEN表达上调 ,U87组的血管指数、体内肿瘤体积、 因子相关抗原和 MMP- 2的表达病理指数均显著多于 Ad X- gal和 Ad PTEN组 (P<0 .0 5 ,P<0 .0 1 )。结论 :PTEN可抑制肿瘤血管生成 ,并抑制体内肿瘤的生长。提示

慢病毒介导的CIB1过表达对U87胶质瘤细胞WNT信号通路的影响

目的:探讨慢病毒介导的钙整合素结合蛋白1(calcium integrin-binding protein 1,CIB1)在U87胶质瘤细胞中的表达情况及对WNT信号通路的影响。方法:体外培养U87胶质瘤细胞,将携带CIB1基因的LV-CIB1慢病毒转染至U87细胞,获得CIB1稳定过表达的U87脑胶质瘤细胞。根据感染病毒的不同,将细胞分为LV-CIB1过表达组、阴性对照病毒组和正常U87细胞对照组。采用蛋白免疫印迹法检测U87胶质瘤细胞中相关蛋白表达情况,Edu法检测CIB1过表达对U87细胞增殖的影响。结果:LV-CIB1感染U87胶质瘤细胞的最佳感染复数值为4。LV-CIB1过表达组CIB1蛋白表达水平显著高于正常U87细胞对照组和阴性对照病毒组。与正常U87细胞对照组及阴性对照病毒组相比,LV-CIB1过表达组WNT信号通路中关键蛋白GSK-3β表达量降低,β-catenin、cyclin D1及Phospho-GSK-3β(Ser9)的表达水平升高,Phospho-GSK-3β(Tyr216)无明显变化。结论:CIB1过表达促进U87胶质母细胞瘤的生长增殖。WNT信号通路可能是CIB1发挥作用的途径之一,提示可以通过干预WNT信号通路来调节CIB1介导的U87胶质瘤细胞增殖。

shRNA-PAX6慢病毒载体构建及其对胶质瘤U251细胞增殖的影响

目的构建shRNA-PAX6慢病毒载体并观察其对胶质瘤U251细胞增殖的影响。方法根据文献报道的PAX6靶点序列,设计两条PAX6基因的si RNA靶点干扰序列,引物退火形成带粘性末端的双链,与经BamH I、EcoR I双酶切后线性化的慢病毒载体进行连接、转化,构建shRNA-PAX6慢病毒重组载体,再经菌落PCR及测序鉴定重组载体;在293T细胞中包装病毒,将包装后的shRNA-PAX6慢病毒重组载体感染U251细胞。Real-time PCR检测PAX6 mRNA的表达水平,Western blot检测PAX6蛋白的表达,MTT法检测U251细胞增殖。结果慢病毒载体p LKD-CMV-G&NR-U6-shRNA经双酶切后可见线性化的8208 bp大片段,菌落PCR及测序鉴定证实shRNA-PAX6慢病毒重组载体构建成功,构建的shRNA-PAX6慢病毒载体在293T细胞完成包装,测得慢病毒滴度为6.73×10~8TU/m L;Real-time PCR结果显示,沉默PAX6的表达可见U251细胞PAX6 mRNA表达水平明显低于正常对照组及慢病毒空载体组(P<0.05);Western blot结果显示,PAX6蛋白表达亦明显低于正常对照组及慢病毒空载体组(P<0.05);MTT结果显示,与正常对照组及慢病毒空载体组细胞比较,感染shRNA-PAX6慢病毒重组载体组的细胞,细胞增殖能力明显增强(P<0.05)。结论成功构建人PAX6基因的shRNA-PAX6慢病毒重组载体,沉默PAX6基因的表达,U251细胞的增殖能力增强。

慢病毒在大鼠胶质瘤细胞基因转导中的应用

目的应用慢病毒介导单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因转导大鼠9L胶质瘤细胞。方法构建慢病毒表达质粒pLenti6/V5-TK并以PCR、酶切及测序等方法鉴定。利用ViraPowerTM慢病毒表达系统,将重组质粒与包装混合物(Packaging Mix)共同转染293T细胞生产假病毒颗粒,转染48 h后收集培养上清,用其感染大鼠9L胶质瘤细胞,以抗稻瘟菌素(BSD)筛选出9L-TK细胞。RT-PCR、Western blot方法检测TK基因在9L-TK细胞中的表达。用MTT方法测试更昔洛韦(GCV)对体外培养的9L-TK细胞杀伤效果。结果构建的重组质粒pLenti6/V5-TK经PCR、酶切及测序鉴定正确;该质粒与包装质粒共转染293T细胞获取的慢病毒滴度达2.7×105转导单位(TU)/ml。经BDS筛选获得的9L-TK细胞RT-PCR及Western blot结果显示TK基因表达阳性,且GCV对该细胞作用敏感。结论成功利用慢病毒实现了TK基因转导大鼠9L胶质瘤细胞。

重组腺病毒介导mIL-4基因转染的G422胶质母细胞瘤体外生物学特性及体内致瘤性的改变

以重组的复制缺陷性腺病毒为载体将鼠IL-4基因转染G422小鼠脑胶质母细胞瘤细胞,观察其体外生物学特性和体内致瘤性的变化。结果显示:基因转染的肿瘤细胞有目的基因mRNA的表达,分泌高水平的mIL-4,和野生型G422细胞相比,其体外的细胞增殖能力无显著差异,而接种皮下后肿瘤生长延缓、小鼠的存活期延长。

逆转录病毒介导的TNFa基因在胶质瘤细胞系（C6）中的表达及对肿瘤细胞恶性生长的影响

利用逆转录病毒载体ＬＸＳＮ构建了含有完整编码ＴＮＦｃＤＮＡ的重组逆转录病毒质粒ｐＬＸＳＮ－ｔｎｆ，用Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ将重组质粒导入病毒包装细胞ｐＡ３１７，经Ｇ４１８筛选培养获得抗性克隆，用ＮＩＨ３Ｔ３细胞测定病毒滴度，获得滴度为５×１０５ＣＦＵ／ｍｌ的细胞克隆。利用病毒上清液感染大鼠胶质瘤细胞系Ｃ６，得到Ｇ４１８抗性克隆细胞Ｃ６ｐＬＸＳＮ－ｔｎｆ，经ＰＣＲ检测，ＴＮＦｃＤＮＡ完整地整合在细胞基因组中。测定Ｃ６ｐＬＸＳＮ－ｔｎｆ细胞上清中ＴＮＦ的生物活性，结果显示ＴＮＦ有相对稳定的表达（４８～１８０Ｕ／ｍｌ１０６ｃｅｌｌｓ／２４ｈ）。实验还显示经ＴＮＦ基因转导的Ｃ６ｐＬＸＳＮ－ｔｎｆ细胞生长速度较之亲本肿瘤细胞Ｃ６明显下降，基因修饰后的肿瘤细胞在Ｗｉｓｔａｒ大鼠体内形成肿瘤的能力明显受到抑制。进一步用超离心法浓缩病毒对胶质瘤移植模型进行了体内治疗研究。

腺病毒介导的TIMP-2基因对恶性胶质瘤血管生成能力的影响

目的 探讨基质金属蛋白酶组织抑制因子 (TIMP 2 )参于恶性脑胶质瘤发生发展 ,及对脑胶质细胞瘤血管生成的抑制作用。方法 选用含TIMP 2基因的重组腺病毒载体 ,体外转染人胶质瘤细胞系U87,用逆转录酶 多聚酶链反应法 (RT PCR)检测其mRNA的表达 ,并用酶联免疫分析法(ELISA)检测其蛋白表达。用四唑蓝比色法 (MTT)法检测含TIMP 2上清对人脐静脉内皮细胞生长(ECV 30 4 )的影响 ,并检测它对鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM)血管生成的作用。结果 RT PCR、Western结果表明转染AdTIMP 2病毒后的U87细胞TIMP 2表达上调。MTT示蛋白含量为 10 0ng/ml的TIMP 2对人脐静脉内皮细胞生长表现出明显的抑制作用。CAM结果显示AdTIMP 2组可见血管稀疏区 ,并出现血管结构紊乱。血管指数 :U87组为 (91.1± 8.2 ) %、AdX gal组为 (6 2 .4± 3.3) % ,AdTIMP 2组为 (45 .7± 6 .1) %。VIII因子相关抗原的表达病理指数U87组为 17.2 7± 7.4 8,AdX gal组为 16 .98± 7.5 4 ,AdTIMP 2组为 6 .78± 3.37。结论 TIMP

敲低IFI30通过激活STAT1抑制U251人胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移并促进其凋亡

目的 构建γ干扰素诱导蛋白30(IFI30)表达抑制的U251细胞,探讨IFI30表达受到抑制后对细胞生物学功能的影响及机制。方法 在线设计敲低靶点并合成3条小干扰RNA(siRNA),转染后通过实时定量PCR技术检测抑制效率,选取抑制效率最高的siRNA序列构建短发夹RNA (shRNA)质粒。重组质粒与包装质粒共转染HEK293T细胞制备慢病毒。用慢病毒感染胶质瘤U251细胞,经嘌呤霉素筛选得到阳性细胞。采用CCK-8实验、5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)实验和集落形成实验分析细胞增殖活性,流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡,Transwell^(TM)实验检测细胞侵袭、划痕实验检测细胞迁移。Western blot法检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)和神经钙黏蛋白(N-cadherin)、信号转导子与转录激活子1(STAT1)。结果 筛选到有效的靶点序列并成功建立IFI30表达抑制的U251细胞。敲低IFI30的表达抑制U251细胞增殖,G0/G1期细胞比例增加,S期减少,细胞凋亡明显增加,细胞的侵袭和迁移能力降低。同时,U251细胞cyclin D1、Bcl2和N-cadherin的表达降低,E-cadherin, STAT1磷酸化表达增加。结论 敲低IFI30通过促进STAT1活化抑制U251细胞增殖、侵袭和迁移并促进其凋亡。

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/Ganciclovir系统对脑胶质瘤动物模型的治疗

目的 探讨单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶基因 (HSV1 tk)结合Ganciclovir(GCV)治疗方案 ,在脑胶质瘤动物模型中基因治疗的疗效以及杀伤肿瘤细胞的机制。 方法 采用Southern杂交法 ,证实逆转录病毒载体生产细胞系pN2 A tk VPC(VPC)带有tk基因并稳定整合到基因组DNA上 ;再将VPC与人脑多形性胶质母细胞瘤细胞系DBTRG 0 5MG(0 5MG)分别以 1∶1、1∶4比例混合接种于BALB c裸鼠皮下 (以只接种 0 5MG细胞作为对照 ) ,建立裸鼠皮下胶质瘤动物模型 ,然后腹腔注射GCV治疗 [30mg (kg·d) ],连续 14d ,治疗后 1周 ,取出瘤块作病理组织学分析。 结果 1∶1组瘤块较 1∶4组和对照组明显减小 (P <0 0 1) ,且有 30 %的瘤块完全消失 ,提示HSV1 tk GCV对肿瘤细胞有显著杀伤效应。光镜观察可见 ,1∶1组细胞核固缩、溶解甚至破裂等坏死特征 ,说明HSV1 tk GCV在invivo水平杀伤肿瘤细胞是细胞毒杀伤效应。 结论 HSV1 tk GCV系统能有效杀伤肿瘤细胞 。

VCC-1慢病毒表达载体的构建及其对胶质瘤细胞增殖的影响

目的:构建小趋化因子VCC-1的慢病毒表达载体并研究其对人胶质瘤细胞株U251增殖的影响。方法:以人结肠癌细胞为模板扩增VCC-1基因,并连入pMX载体,挑取测序正确的克隆在293T细胞中表达,并用realtime-PCR和Western blot进行验证。结果:成功构建了人VCC-1的慢病毒表达载体,并感染了星形胶质瘤细胞系U251。结论:证明了VCC-1基因在胶质瘤细胞的增殖过程中起促进作用,并为后续研究VCC-1和胶质瘤形成发展和浸润的机制提供了良好的基础。