miRNAs慢病毒文库筛选靶向EZH23'非翻译区的新型miRNAs及其在乳腺癌中的表达

目的重组过表达EZH2基因3'非翻译区的MCF-7细胞株中筛选靶向miRNAs,并进行细胞和组织定量分析。方法重组细胞株感染慢病毒文库,利用细胞毒性药物筛选后抽提细胞基因组,以此为模板PCR扩增出miRNA前体,测序确定miRNAs名称,并对其进行PCR定量分析。结果在重组细胞株中共筛选出7种miRNAs,依次为miR-15b、miR-16-2、miR-181b2、miR-217、miR-224、miR-329-1、miR-487b,这些新型miRNAs用生物信息学软件PicTar和TargetScan无法预测。Real-time PCR发现,与乳腺癌细胞MCF-7相比,正常乳腺细胞株HBL-100中miR-217、miR-329-1、miR-487b高表达;乳腺癌组织中仅miR-15b及miR-16-2表达增加,与癌旁组织相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论在重组过表达EZH2 3'-UTR的乳腺癌MCF-7细胞株中结合慢病毒文库可筛选出用生物信息学软件未预测的新型靶向miRNAs,这些新型miRNA在正常乳腺细胞与肿瘤细胞及组织中存在差异表达。