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一种可满足产业化需求的靶向EpCAM嵌合抗原受体慢病毒生产工艺
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作者 周文婷 邓公平 +7 位作者 付舒翔 田方艳 吴珊珊 柏清玉 邓长云 唐颖鑫 朱淑英 张培湘 《中国医学工程》 2024年第3期18-24,共7页
目的建立一种可满足产业化需求的靶向上皮细胞粘附分子(EpCAM)嵌合抗原受体(CAR)慢病毒生产工艺。方法以EpCAM蛋白为抗原,免疫小鼠获得EpCAM单抗,采用EpCAM单抗的scFv为胞外单链可变区,构建人源化靶向EpCAM的第三代CAR载体质粒,并通过Ep... 目的建立一种可满足产业化需求的靶向上皮细胞粘附分子(EpCAM)嵌合抗原受体(CAR)慢病毒生产工艺。方法以EpCAM蛋白为抗原,免疫小鼠获得EpCAM单抗,采用EpCAM单抗的scFv为胞外单链可变区,构建人源化靶向EpCAM的第三代CAR载体质粒,并通过EpCAM CAR载体质粒与慢病毒包装质粒共转染HEK 293T细胞获得慢病毒粗毒液,粗毒液经核酸酶孵育、过滤澄清、Core 700层析、浓缩换液、除菌过滤、制剂分装等工序获得EpCAM慢病毒成品。结果通过EpCAM单抗成功构建了靶向EpCAM抗原的嵌合抗原受体Humanized EpCAM ScFv-CD28-CD3ζ-CAR,并通过该EpCAM CAR进行2 L悬浮体系慢病毒包装所收获粗毒液,经层析及超滤浓缩等纯化工艺收获慢病毒成品100 mL,成品慢病毒转导滴度达2.16×10^(8)TU/mL,慢病毒总量达2.16×10^(10)TU。成功开发了可满足产业化需求的靶向EpCAM CAR慢病毒上游包装及下游纯化生产工艺。结论具有成本效益的慢病毒(LV)载体制备对于满足产业化需求至关重要,本研究在EpCAM蛋白、EpCAM抗体、及EpCAM CAR载体质粒的基础上,结合完整的慢病毒悬浮生产工艺,制备高滴度高纯度的靶向EpCAM嵌合抗原受体慢病毒,为EpCAM CAR-T细胞治疗实体瘤应用及其产业化奠定基础。 展开更多
关键词 上皮细胞粘附分子 嵌合抗原受体 CAR-T细胞治疗 慢病毒生产
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聚乙烯亚胺提升慢病毒滴度的研究 被引量:1
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作者 张宏鹏 唐小川 +2 位作者 徐世永 陈清 刘红林 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期455-459,共5页
[目的]本文旨在解决传统慢病毒生产方法中存在的实际操作复杂或成本高等问题,提高慢病毒生产效率。[方法]使用了以聚乙烯亚胺(PEI)为转染介质,以聚乙二醇6000(PEG6000)为离心浓缩介质的慢病毒生产方法,并对浓缩后的慢病毒进行滴度... [目的]本文旨在解决传统慢病毒生产方法中存在的实际操作复杂或成本高等问题,提高慢病毒生产效率。[方法]使用了以聚乙烯亚胺(PEI)为转染介质,以聚乙二醇6000(PEG6000)为离心浓缩介质的慢病毒生产方法,并对浓缩后的慢病毒进行滴度测定。还对可能影响慢病毒滴度的几个关键因素——转染初始细胞数、N/P值、转染质粒DNA量、佐剂的选择等的作用进行了分析。[结果]在使用15 cm培养皿生产慢病毒的条件下,转染质粒DNA总量10.5μg,N/P=20,PEI浓储液p H值为7.0~9.0,转染时293T细胞数(0.5~2)×107时,可以获得较好的慢病毒滴度。[结论]PEI作为一种新的转染试剂,可以替代磷酸钙和脂质体用于高滴度慢病毒的生产。 展开更多
关键词 慢病毒生产 聚乙烯亚胺 载体构建 滴度检测 转染试剂
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Efficient production of transgenic chickens using self-inactive HIV-based lentiviral vectors 被引量:2
3
作者 Shiyong XU Yan SUN +4 位作者 Hongmei DING Meng WANG Yafei CAI Jie CHEN Honglin LIU 《Current Zoology》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第5期383-387,共5页
We demonstrated the simple and effective production of transgenic chickens, in which the enhanced green fluorescence protein (EGFP) was expressed by using third-generation self-inactive HIV-based lentiviral vectors.... We demonstrated the simple and effective production of transgenic chickens, in which the enhanced green fluorescence protein (EGFP) was expressed by using third-generation self-inactive HIV-based lentiviral vectors. In our experiments, lentiviruses were injected into 204 fertilized eggs, from which 30 (15%) chickens were hatched. The exogenous gene was detected in the genomes of 16 out of 30 (53%) chickens. The green fluorescence signal was observed directly in various body parts, and was particularly significant in the testes. The transgenes were also found in the offspring of these chickens. The results indicate that HIV-based lentiviral vectors can be used to generate transgenic birds economically and effectively [ Current Zoology 55 (5): 383 - 387,2009]. 展开更多
关键词 Lentiviral vector Transgenic chicken Enhanced green fluorescence protein (EGFP) TESTES
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