三角酵母整细胞酶促转化头孢菌素C为戊二酰-7-氨基头孢烷酸

研究了利用含D 氨基酸氧化酶 (D aminoacidoxidase ,DAOEC1.4.3 .3)的透性化三角酵母多倍体FA10(TrigonopsisvariabilisFA10 )细胞酶促转化头孢菌素C(cephalosporinC ,CPC)为戊二酰 7 氨基头孢烷酸 (Glutaryl 7 ACA ,GL 7ACA)的反应过程和细胞中同时存在的过氧化氢酶 (Catalase ,CAT)通过水解H2 O2 而对转化反应产生的干扰作用及其对策。实验证明适量添加外源H2 O2 (6 % )或在反应体系中加入过氧化氢酶抑制剂NaN3(0 .13mg/mL)可使GL 7ACA生成率分别为 73 0 %和 70 1%。如果将透性化的FA10细胞在 pH10 .5～ 11 0 ,2 0℃条件下保温 30min ,CAT被不可逆性完全钝化 ,以无过氧化氢酶的FA10细胞进行CPC的酶促转化反应 ,GL 7ACA的生成率可达 84%。

过氧化氢在生成戊二酰-7-氨基头孢烷酸过程中的影响

头孢菌素C(CPC)在D-氨基酸氧化酶为催化剂的情况下,与O2反应生成α-ketoadipyl-7-ACA,再与过氧化氢反应生成戊二酰基-7-氨基头孢烷酸(Gl-7-ACA)。在此反应中生成的α-ketoadipyl-7-ACA是造成目标产物收率低的关键因素之一。通过加入适量的双氧水可以使剩余的α-ketoadipyl-7-ACA转化为Gl-7-ACA,从而使裂解的收率提高5%。

D-氨基酸氧化酶和戊二酰-7-氨基头孢烷酸酰基转移酶基因在大肠杆菌中的克隆和共表达 Luo H等[Enzyme Microb Technol，2004，35（6-7）：514．518]

为了将头孢菌素C转化成-7-氨基头孢烷酸(7-ACA)，克隆了来源于变异三角酵母的D-氨基酸氧化酶(DAAO)基因和来源于假单孢菌的戊二酰-7-氨基头孢烷酸(GL-7-ACA)酰基转移酶基因，并在重组大肠杆菌中表达。对DAAO重组菌BL21(DE3)/pET-DAAO而言，通过分批补料培养可获得250U／ml的高DAAO活性。信号肽序列缺失的GL-7-ACA酰基转移酶基因也成功地在重组大肠杆菌BL21(DE3)／pET-ACY中得到表达，

固定化D-氨基酸氧化酶转化头孢菌素C为戊二酰基-7-氨基头孢霉烷酸

部分纯化的变异三角酵母D-氨基酸氧化酶(DAO)在碱性条件下变性过氧化氢酶,再与大孔聚甲基丙烯酸缩水甘油酯高聚物共价交联。与游离酶相比,固定化酶的最适反应温度升高,最适pH范围变宽,对温度和pH的稳定性都有明显的提高。固定化DAO在搅拌反应器中催化头孢霉素C(CPC)转化为戊二酰基-7-氨基头孢霉烷酸(Gl-7-ACA)。以0.03g/mL的CPC为底物,在温度25℃、pH7.2条件下,产物的得率>93%,副产物得率<5%。经过110批反应后,固定化酶保持64%的初始活力。

过氧化氢对D-氨基酸氧化酶转化头孢菌素C为戊二酰-7-氨基头孢烯酸反应的影响

在D-氨基酸氧化酶D1AAO转化头孢菌素C(CPC)为戊二酰基-7-氨基头孢烯酸(Gl-7-ACA)的反应中,所生成的过氧化氢同时与CPC和Gl-7-ACA发生的氧化副反应是造成目标产物收率损失的关键因素之一。通过联用溶氧电极和过氧化氢电极,测定了DAAO转化CPC为Gl-7-ACA的反应体系内溶氧浓度与相应的过氧化氢浓度的变化曲线,测知反应体系中过氧化氢浓度积累最高可达5mmol·L-1。模拟该反应条件下过氧化氢的氧化反应可知,在过氧化氢浓度较低时,溶液的酸性可加速该氧化反应。在中性条件下,过氧化氢浓度为5mmol·L-1时,反应1h后,CPC的氧化损失为2%,Gl-7-ACA的氧化损失为3%。通过改进氧气分布器、搅拌转速和并调控氧气流量以控制溶液中溶解氧的浓度,来适度地降低物系中过氧化氢积累浓度,使反应收率提高了2.2%。

HPLC法测定反应液中7-氨基头孢烷酸的残留

建立了用HPLC测定反应液中7-氨基头孢烷酸(7-ACA)残留含量的分析方法。经过验证,7-ACA在2.895~11.582μg/ml范围内线性关系良好(r=1.0000),该方法具有较好的专属性,操作简单,重复性好,可为头孢类品种检测母核7-ACA残留提供试验依据。

从青霉素G生产7-氨基脱乙酰氧基头孢烷酸

综述了以青霉素 G钾为原料经氧化、酯化、扩环、水解、脱苯乙酰基等反应制备

超强质子酸催化下连续法制备7-氨基-3-乙烯基头孢烷酸及一步脱保护反应机理研究

GVNE反应液经脱水后,经超强质子酸催化,可不经结晶出GVNE直接与苯酚反应水解掉4位保护基,从而实现连续制备,从而减少了制备过程中溶剂损耗及能量消耗,所制备出产品与原工艺的差别。介绍了连续法中2种竞速反应的反应机理。

7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸(7-ADCA)的合成研究 Ⅱ.7-苯乙酰氨基去乙酰氧基头孢烷酸的合成

本文在制得青霉素 G亚砜的基础上 ,完成了重排酸的扩环反应 ,重点探讨了扩环反应的最优化条件。青霉素 G亚砜与 N,N′-双 (三甲基甲硅基 )脲 (BSU)在 5 5℃下反应 ,得到亚砜的酯化物。加入催化剂吡啶乙酰溴 ,回流条件下发生扩环反应。最后加水脱去酯基 ,加酸析出产物重排酸。通过正交实验可得出以下结论 :当 N,N′-双 (三甲基甲硅基 )脲 -亚砜为 2 .5 :1,乙酰溴 -亚砜为 0 .4:1,吡啶 -乙酰溴为 1.5 :1,回流时间为 3.5 h,酸化 p H值为 1.8时 ,扩环反应结果最好 ,总收率可达 76 % ,纯度 97%以上。

7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸(7-ADCA)

７氨基去乙酰氧基头孢烷酸（７ＡＤＣＡ）是合成头孢类抗生素的一个重要中间体，其制备一般以青霉素Ｇ为原料，经氧化、扩环重排、裂解三步反应制得。本文综述了这三步反应的情况。

7-氨基-3-去乙酰氧基头孢烷酸合成工艺的研究

7-氨基-3-去乙酰氧基头孢烷酸是一种重要的头孢抗菌素医药中间体。讨论了青霉素G钾盐的氧化剂及扩环重排反应中的催化剂、扩环条件及头孢G酸的后处理,以优化其合成工艺。

高效液相色谱法测定去乙酰基-7-氨基头孢烷酸的含量

建立了一种高效液相色谱法测定去乙酰基-7-氨基头孢烷酸含量的方法,采用迪马公司的C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以0.01mol/L醋酸钠(pH=4.25)为流动相,流速为1.0mL/min,检测波长为254nm,柱温为25℃,样品池温度为4℃,线性范围为60～300μg/mL,r=0.9999,平均回收率为99.36%。

紫外分光光度法测定7-氨基乙酰氧基头孢烷酸的含量

建立了用紫外分光光度法测定7-氨基乙酰氧基头孢烷酸的含量的方法。此药品在紫外光区有最大吸收值,且最大吸收波长为260nm。在260nm波长处测定标准工作曲线,得到回归方程y=0.0277x+0.0032,r2=09981。药品在溶液中比较稳定,药品含量为98.20%。此法的平均回收率为99.2%,接近100%。此方法准确度高、重现性好、操作简单。

酶法生产7-氨基头孢烷酸的研究进展

氨基头孢烷酸 (7 ACA)是生产头孢菌素的重要原料 ,目前都由头孢菌素C通过化学法或生物酶法生产。综述了利用酶法生产 7 ACA的研究进展 ,其中涉及催化过程所用两种酶 (D 氨基酸氧化酶和GL 7 ACA酰化酶 )的酶学特性、表达、纯化。

一步酶法生产7-氨基头孢烷酸的研究进展

7-氨基头孢烷酸是合成头孢类抗生素的重要中间体,一般由头孢菌素C通过化学法或生物酶法裂解脱去侧链分子制备得到。综述了头孢菌素C酰化酶的来源、特性及其基因的克隆和改造,表达与纯化,固定化及其催化工艺的研究,并展望了一步酶法生产7-氨基头孢烷酸的应用前景。

一步酶法制备药物中间体7-氨基头孢烷酸

目的主要介绍一步酶法制备7-ACA较两步酶法的优势，重点探讨一步酶法制备7-ACA的酶解条件、纯化技术、结晶工艺。方法7-ACA一步酶法和两步酶法的优势对比分析，酶的选择、一步酶法酶解反应条件、裂解液纯化技术、裂解液结晶技术的筛选。结果确定了酶解条件一反应温度20～25℃、PH8．5、时间60min，烷烃类萃取纯化条件、结晶条件。结论该方法制备的7-ACA质量好，收率高。

两步酶法制备去乙酰基7-氨基头孢烯酸

以生产头孢菌素C(CPC)过程中的副产物去乙酰头孢菌素C(DCPC)为原料,用固定化D-氨基酸氧化酶(DAAO)和固定化戊二酰基酰化酶(GA),连续两步进行酶裂解,制备了去乙酰基7-氨基头孢烯酸(D-7-ACA),总收率72%。滴加浓度为1 mol/L的过氧化氢可使去乙酰基戊二酰基7-ACA(D-G l-7-ACA)的收率提高6%。提高氧气流速和改善搅拌形式可以加快DAAO酶反应速度,使中间产物残留减少3%。高纯度的去乙酰头孢菌素C钠盐(DCPCNa)可以提高该两步酶法反应的收率和产品质量,延长酶的使用寿命。

7-氨基头孢烷酸结晶过程聚结现象与晶体表面性质

对7-氨基头孢烷酸(7-ACA)两种结晶方法的聚结现象进行研究．通过对结晶过程不同pH值下晶体SEM 照片的比较,发现酸法结晶过程在pH值大于1．5时开始出现花朵状聚结,而碱法结晶不发生聚结;通过对两种结晶方法得到样品的SEM照片处理,发现酸法和碱法样品SEM灰度具有自相似性,应用盒子维法分别求得两种结晶过程中不同pH值下的晶体的分维值．测定了7-ACA在不同pH值水溶液中的Zeta电位．通过毛细升高法测定了酸法和碱法样品对水与丙酮的润湿角,结合两种样品的X-粉末衍射和红外衍射图谱,对晶体表面的官能团进行了推测．

加校正因子的RP-HPLC法测定不同方法生产的7-氨基头孢烷酸中有关物质

目的建立一种能够准确测定7-氨基头孢烷酸中有关物质的方法，同时进行不同方法生产的产品的含量测定及有关物质检查。方法采用高效液相色谱法。使用C18色谱柱（SB-C18,5μm，4．6mm×250mm）；以磷酸盐缓冲液（取5g磷酸氢二钾和5g磷酸二氢钾溶解于1000mL水中，用磷酸调节流动相pH值至6．0）-乙腈（92：8）为流动相；检测波长为254nm；柱温为35℃；进样量20μL。结果7-氨基头孢烷酸在504～0．02534μg／mL范围内，线性关系良好，相关系数R^2为0．9991；去乙酰7-氨基头孢烷酸在10．52-0．0263μg／mL范围内，线性关系良好，相关系数R^2为0．9996；去乙酰氧7-氨基头孢烷酸在9．66～0．02415μg／mL范围内，线性关系良好，相关系数R^2为0．9998；头孢菌素C在10．5～0．02625μg／mL范围内，线性关系良好，相关系数R^2为0．9998。溶液的稳定性及进样精密度、日内精密度、重复性、专属性良好。去乙酰7-氨基头孢烷酸、去乙酰氧7-氨基头孢烷酸和头孢菌素C的校正因子分别为0．80、0．82、1．67。结论此方法可以准确测定7-氨基头孢烷酸中的含量，并采用校正因子法计算有关物质的含量。不同方法生产的7-氨基头孢烷酸的含量及有关物质无明显差异。