血液替代品基质聚合牛血红蛋白制备方法的研究

目的 建立合适的以聚合的牛血红蛋白 (Hb)为基质的血液替代品的制备方法。方法 用乙醇醛聚合牛Hb ,用电泳和HPLC检测聚合程度、超滤去除大于相对分子质量 (Mr) 10 0 0 0 0 0的大分子和小于 10 0 0 0 0的小分子 ,用生理溶液平衡后 ,检测其生物学活性和流体力学特性。结果 牛Hb被有效聚合、超滤后 ,Mr超过 5 0 0 0 0 0的组分还占 4.6 % ,32 0 0 0的占 7.3% ,6 40 0 0～5 0 0 0 0 0的组分占 88% ;牛Hb在聚合后氧亲和力、血氧饱和度和溶液的溶氧量基本保持不变 ,其溶液黏度低 ,近似牛顿液体。结论 牛Hb经乙醇醛聚合后 ,Mr分布、生物学活性和流体力学特性理想 。

牛血红蛋白印迹聚合物的制备及其对牛血红蛋白的吸附特性

以牛血红蛋白为模板分子,丙烯酰胺为功能单体,N,N'-亚甲基双丙烯酰胺为交联剂,采用醛基硅胶表面修饰技术,合成了牛血红蛋白印迹聚合物(MIP),并研究了该印迹聚合物对牛血红蛋白的吸附特性。结果表明:当洗脱时间为8 h、洗脱率为83.53%时,印迹聚合物对牛血红蛋白的吸附量为81.39 mg·g^(-1)。

戊二醛聚合猪血红蛋白免疫学特性分析

目的阐明加弗氏佐剂条件下,戊二醛聚合猪血红蛋白(glutaradehyde polymerized porcine he-moglobin,pPolyHb)对不同种类动物的免疫原性,初步探讨pPolyHb与人、牛血红蛋白的抗原决定簇的异同。方法在加弗氏佐剂的条件下,pPolyHb多次皮下免疫小鼠、大鼠和兔子,间接ELISA法检测抗血清IgG滴度;免疫印迹法分别检测小鼠、大鼠和兔子抗pPolyHb抗体与猪、牛、人、小鼠、大鼠、兔子、pPolyHb和戊二醛聚合牛血红蛋白之间的交叉反应。结果在加弗氏佐剂的条件下,pPolyHb能够刺激动物产生较高滴度的IgG,不同种类的动物产生IgG滴度不同;小鼠、大鼠和兔子抗pPolyHb抗体与不同来源的血红蛋白之间的交叉反应有明显的差异。结论在有弗氏佐剂的条件下,pPolyHb有较强的免疫原性。但是,对不同种类动物免疫刺激的强弱不同;对不同种类的动物,pPolyHb刺激抗体产生的抗原决定簇可能大部分相同,但也有部分不同,由此产生的抗体也不同;pPolyHb与人和牛血红蛋白均有一些相似的抗原决定簇,但也有一些相互独立的抗原决定簇。

聚合牛血红蛋白二级结构初步研究

为了研究乙醇醛聚合牛血红蛋白 ( poly Hb)对 Hb空间结构的影响 ,用傅里叶变换红外光谱仪分析比较了天然牛 Hb和聚合牛 Hb的二级空间结构。结果表明天然牛 Hb和聚合牛 Hb的 α螺旋无明显区别 ,但聚合程度高 ,将改变 Hb的基本构象 ,从而导致生理功能的变化 。

硅胶表面接枝引发转移终止剂制备牛血红蛋白分子印迹聚合物及性能评价

以牛血红蛋白为模板分子,丙烯酰胺为功能单体,N-N`亚甲基双丙烯酰胺为交联剂,通过固定在硅胶表面的引发转移终止剂二乙基二硫代氨基甲酸钠引发聚合反应,应用表面印迹法制备了牛血红蛋白(BHb)印迹聚合物。通过平衡吸附和选择性实验进行评价,结果表明印迹聚合物具有高吸附效率和选择性。

猪血红蛋白及戊二醛聚合猪血红蛋白氧载体的研究

目的阐明猪血红蛋白的主要理化特性,并了解戊二醛聚合反应对猪血红蛋白主要性能的影响。方法猪血经多步纯化获取高纯度猪血红蛋白,以戊二醛为交联剂制备聚合猪血红蛋白样品。鉴定猪血红蛋白的纯度、聚合体分子量分布、携氧性能及自氧化等指标。结果猪血红蛋白在生理pH条件下的P50为23.6 mmHg,Hill系数为2.86。聚合猪血红蛋白为分子量大小不均一的混合体,聚合体P50和Hill系数均减小,自氧化趋势增大。结论猪血红蛋白具有较高氧亲和力,与人血红蛋白相似,明显高于牛血红蛋白。猪血红蛋白的丰富来源、特殊的氧亲和力和较好的化学稳定性等特点使其可成为一种血红蛋白类氧载体产品制备的有用材料。

戊二醛为交联剂制备聚合碳氧血红蛋白的实验研究

目的探讨常温、无需隔氧环境下的血红蛋白类氧载体(HBOC)制备条件及其产物聚合碳氧血红蛋白(poly-COHb)的质量。方法以人脐带血血红蛋白为原料,戊二醛为交联剂,实验组选择血红蛋白浓度、戊二醛与COHb摩尔比、反应时间和反应温度做四因素三水平正交试验(n=3),确定最佳匹配条件并制备3批poly-COHb;对照组在低温、全程隔氧条件下制备3批聚合血红蛋白(poly-Hb)。比较2组交联制品的超大分子含量、聚合度、平均分子量、高铁血红蛋白(MetHb)及P_(50)。结果按本四因素正交试验求出的poly-COHb最佳匹配条件:[Hb]70 g/L,戊二醛与COHb摩尔比为11∶1,反应时间60 min,反应温度25℃;poly-COHb与poly-Hb比较:超大分子含量(%)为0.67±0.51 vs 0.60±0.01(P>0.05),聚合度(%)与平均分子量(kD)分别为84.25±0.99 vs 54.16±5.12,235.27±13.50 vs 97.62±6.57(P<0.05),MetHb占比(%)为2.40±0.66 vs 2.47±0.46(P>0.05),P_(50)(mmHg)为6.37±0.30 vs 14.20±1.09(P<0.05)。结论在常温、无需隔氧条件下以戊二醛为交联剂制备的poly-COHb与poly-Hb相比,聚合度、平均分子量提高,大大减小制备难度。

硅胶修饰-表面分子印迹牛血红蛋白及其识别性能的研究

选用马来酸酐修饰的硅胶作为载体,丙烯酰胺为功能单体,N,N'-亚甲基双丙烯酰胺为交联剂,牛血红蛋白为模板分子,采用氧化还原悬浮聚合法,合成了具有选择性识别的牛血红蛋白分子印迹聚合物.并用红外光谱(IR)、扫描电子显微镜(SEM)和元素分析对聚合物进行了表征,结果表明载体表面成功地接枝了分子印迹聚合物薄层.同时选择性吸附实验表明分子印迹聚合物具有良好的识别性能,能实现水溶液中牛血红蛋白的富集.

壳聚糖包裹硅胶载体印迹牛血红蛋白的研究

用壳聚糖包裹的硅胶为载体,利用壳聚糖表面的氨基与戊二醛结合,在硅胶表面引入醛基,固定模板蛋白(牛血红蛋白).用溶胶-凝胶过程再次包裹固定蛋白质的载体,洗去模板蛋白后,得到具有选择性识别的牛血红蛋白分子印迹聚合物.用红外光谱(IR)、扫描电子显微镜(SEM)和元素分析对聚合物进行了表征,结果表明,载体表面成功地接枝了分子印迹聚合物.选择性吸附实验结果表明,分子印迹聚合物具有良好的识别性能,能实现水溶液中牛血红蛋白的富集.

开环棉籽糖分子内交联血红蛋白及其戊二醛的二次交联

用高碘酸钠氧化制备开环棉籽糖 ( O-Raffinose) ,将其作为交联剂对脱氧态无基质血红蛋白 ( Stroma-free hemoglobin SFHb)进行修饰 .十二烷基磺酸钠 -聚丙烯酰胺不连续电泳 ( SDS-PAGE)结果显示 ,开环棉籽糖交联血红蛋白 ( O-Ra-Hb)与 SFHb相比抗解聚性有明显提高 ;琼脂糖 ( Sepharose)凝胶层析结果显示 ,SFHb和 O-Ra-Hb出峰时间和峰形大小基本相同 ,说明交联反应主要发生在分子内的亚基间 ,基本没有分子间交联产物 .用戊二醛 ( GDA)在优化条件下对 O-Ra-Hb进行分子间二次交联 ,SDS-PAGE结果显示 ,二次交联产物稳定性比 O-Ra-Hb有了进一步提高 ;Sepharose凝胶层析结果表明 ,产物中分子量为 65 0 0 0的未聚合的 O-Ra-Hb组分为 2 2 .6% ,分子量为 1 3 0 0 0 0～ 60 0 0 0 0的组分为 76.9% ,分子量为 60 0 0 0 0以上的组分仅为 0 .5 % 。

１－乙烯基－３－甲基咪唑离子液体/ 分子印迹材料用于牛血红蛋白的识别

分子印迹聚合物是一类对目标分子具备特异性辨别能力的高分子吸附剂材料.运用本体聚合法,以牛血红蛋白(BHb)为模板分子,丙烯酰胺(AAM)和碘化1-乙烯基-3-甲基咪唑离子液体在交联剂、引发剂和加速剂的作用下进行聚合,制备的分子印迹材料对牛血红蛋白(BHb)具备特异性识别功能.同时,对识别条件进行了优化和讨论.

基于石墨烯/离子液体的牛血红蛋白分子印迹材料的制备

以功能化石墨烯为基质,牛血红蛋白为模板分子,将离子液体与丙烯酰胺作为复合功能单体,在交联剂、引发剂和加速剂的作用下进行聚合,得到牛血红蛋白分子印迹聚合物。优化了该印记聚合物的合成条件和吸附条件;并对其吸附性能进行了评价,结果表明所制备的分子印迹聚合物对BHb具有特异性吸附,并且重复利用性较高。

新型聚合血红蛋白——零点连接聚合

人或牛血红蛋白可经分子间交联进行聚合,即采用1这-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳化二亚胺对四聚体表面的羧基进行活化。活化的羧基与存在于相邻分子表面的氨基形成假肽键。从而使人或牛血红蛋白均达到广泛的聚合。在做这一处理之前对于人血红蛋白应以癸二酰残基在β82赖氨酸之间做分子内交联。对于牛血红蛋白则通过相同的方式以乙二酰残基进行交联。形成的聚合物之氧亲合性与聚合的程度成比例。人血红蛋白聚合物所获得的P50接近2.67kPa(20mmHg),

人造血液基质聚合牛血红蛋白的抗原性研究

目的 通过动物实验 ,推导人造血液基质聚合牛血红蛋白 (poly BHb)输入人体后可能引起的免疫反应。方法 制备兔抗人Hb、兔Hb和poly BHb的抗体 ,研究对兔而言这 3种Hb的抗原性的强弱和它们之间抗原性的交叉程度。将大量poly BHb溶液输入家兔体内 ,观察家兔的免疫反应。通过计算机模拟 ,比较天然人、兔、牛Hb之间氨基酸序列、空间结构和抗原位点的差异。结果 天然牛Hb与人Hb分子的构象几乎一致 ,poly BHb与人Hb有高度相似的抗原性。poly BHb反复大量输入家兔体内未能测出抗体。结论 从结果初步推论 ,poly BHb溶液有限次数输入人体 ,引起免疫反应的可能性较小 ,但尚需要更多的试验及人体安全性试验加以证实。

乙醇醛聚合牛血红蛋白对失血性休克复苏效果的初步研究

目的 观察乙醇醛聚合牛血红蛋白对失血性休克大鼠的复苏效果。 方法 建立一种以碱缺水平为标准的大鼠失血性休克模型 2 4只 ,随机分为对照组、全血组、乳酸化林格液组和聚合牛血红蛋白组 ,每组 6只。对照组不进行复苏 ,其他各组根据大鼠出血量采用对应液体进行复苏 ,并观察各组大鼠休克末和输液后各时相点的血压、心率、体温及血气。 结果 聚合牛血红蛋白复苏效果从某些指标观察与全血相似 ;有些指标优于全血组 ,如输液后 45min聚合牛血红蛋白的实际碱剩余 (ABE)值已恢复至正常水平 (- 0 .8± 1.4) ,而全血组为 - 5 .3± 3.0 ;乳酸化林格液组最差 (- 9.3± 2 .9)。 结论 质量浓度为 12 0g

制备牛血红蛋白印迹聚合物的初步研究

采用凝胶法,以丙烯酰胺为单体,N,N’-甲叉双丙烯酰胺为交联剂,制备了牛血红蛋白的分子印迹聚合物。通过考察不同单体用量对所制备的分子印迹聚合物的吸附性能的影响,得到优化制备条件。用吸附溶液的光吸收性质及电镜等对印迹聚合物的选择性吸附特性和形态特征进行表征。结果表明,制备的分子印迹聚合物对模板分子牛血红蛋白可以选择性吸附,具有很好的发展潜力。

人胎盘血红蛋白聚合工艺的优化研究

从影响血红蛋白与戊二醛聚合的相关因素戊二醛加样方式、血红蛋白浓度、戊二醛与血红蛋白摩尔比、反应时间和温度出发，以固定变量的方法逐个研究各因素对聚合产物分子量分布的影响，以达到降低制品平均分子量、提高有效转化率的目的。结果表明：原工艺平均分子量为（350．20±35．45）kD，有效转化率（分子量90～600kD）为53．27％±4．95％；而改进后工艺平均分子量为（158．60±8．70）kD，有效转化率为69．50％±3．70％。此外，改进后工艺应用于中试（扩大30倍）规模的验证性试验，有效转化率和平均分子量均可达到上述小试结果。

Hb-SDS-Ag水凝胶聚合物超细微粒的制备及表征(Ⅰ)

本文报道Hb SDS Ag聚合物超细微粒的制备 (取一定量的Hb ,SDS于烧杯中 ,加入Ag(NH3) 2 NO3溶液及 pH～ 12的tris OH缓冲液 ,庚烷和异戊醇 ;在另一烧杯中 ,加入甲醛、庚烷和异戊醇。分别乳化 ,将二者混合 ,于 6 0± 0 5℃下恒温 1 5h ,然后水浴减压回流 1 5h ,冷却、分离、洗涤、干燥得样品 )及性质表征。用X 射线衍射 (XRD) ,TEM ,EDS ,IR光谱考察这种聚合物超细微粒的表面结构 ,微粒粒径 12 0nm。研究表明 :Ag+ 离子先与Hb产生化学键合 ,再还原为Ag粒 ,进而聚合成网状结构的聚合物。

功能化介孔硅材料的合成及其对富含裸露组氨酸蛋白质的选择性吸附

通过自由基聚合反应合成了具有高比表面积的介孔硅(PPOSS),并对其表面进行修饰和铜离子(Cu^(2+))的固定,最终得到功能化介孔硅材料(PPOSS-IDA-Cu^(2+)),然后利用PPOSS-IDA-Cu^(2+)中的Cu^(2+)与蛋白质裸露组氨酸的螯合作用,选择性吸附富含裸露组氨酸的蛋白质。对牛血红蛋白、牛血清白蛋白、肌红蛋白和溶菌酶的吸附结果表明,所合成的PPOSS-IDA-Cu^(2+)材料对富含组氨酸的牛血红蛋白有较好的吸附选择性和较大的吸附容量(3 150mg/g),并且有望与其他材料联合使用,以检测到更多相对丰度较低的蛋白质,丰富人类蛋白质组学信息,为疾病的临床诊断及病理研究提供帮助。

HSRP1携氧液对兔控制性重度失血性贫血早期灌注的疗效观察

目的观察戊二醛聚合牛血红蛋白注射液(glutaraldehyde polymerizes bovine hemoglobin injection,代号:HSRP1)在兔重度失血性贫血早期灌注的疗效。方法建立兔控制性重度失血性贫血模型,将制模成功的12只兔分为HSRP1组和乳酸钠林格注射液(sodium lactate ringer's injection,LR)组,每组6只,雌雄各半。HSPR1组和LR组分别用HSRP1和LR进行治疗。观察两组实验兔的存活率,并测量失血前后、灌注后24 h内各个时间点的血流动力学、静脉血气、血浆血红蛋白,以及碱剩余、乳酸和碳酸氢根等指标。结果HSRP1组实验兔存活率与LR组差异具有统计学意义(P<0.05);放血后,各组实验兔的平均动脉压显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05),但在灌注后HSPR1组实验兔的平均动脉压与LR组差异无统计学意义;HSRP1组实验兔在灌注第二阶段,血液乳酸浓度和碱剩余在各时间点与LR组差异均存在统计学意义(P<0.05),在灌注后2 h时,呼吸频率与LR组差异均存在统计学意义(P<0.05),在灌注后4 h时心率与LR组相比,差异存在统计学意义(P<0.05);HSRP1组实验兔的血浆静脉氧分压、静脉氧饱和度和血浆血红蛋白在实验的各个时间点与LR组差异,均无统计学意义。结论HSPR1可用于兔重度失血性贫血,通过对缺氧组织供氧,纠正无氧代谢,提高实验兔的存活率。HSPR1作为一种新型携氧液,早期可纠正重度失血性贫血患者的氧供平衡。