戊二醛聚合猪血红蛋白免疫学特性分析

目的阐明加弗氏佐剂条件下,戊二醛聚合猪血红蛋白(glutaradehyde polymerized porcine he-moglobin,pPolyHb)对不同种类动物的免疫原性,初步探讨pPolyHb与人、牛血红蛋白的抗原决定簇的异同。方法在加弗氏佐剂的条件下,pPolyHb多次皮下免疫小鼠、大鼠和兔子,间接ELISA法检测抗血清IgG滴度;免疫印迹法分别检测小鼠、大鼠和兔子抗pPolyHb抗体与猪、牛、人、小鼠、大鼠、兔子、pPolyHb和戊二醛聚合牛血红蛋白之间的交叉反应。结果在加弗氏佐剂的条件下,pPolyHb能够刺激动物产生较高滴度的IgG,不同种类的动物产生IgG滴度不同;小鼠、大鼠和兔子抗pPolyHb抗体与不同来源的血红蛋白之间的交叉反应有明显的差异。结论在有弗氏佐剂的条件下,pPolyHb有较强的免疫原性。但是,对不同种类动物免疫刺激的强弱不同;对不同种类的动物,pPolyHb刺激抗体产生的抗原决定簇可能大部分相同,但也有部分不同,由此产生的抗体也不同;pPolyHb与人和牛血红蛋白均有一些相似的抗原决定簇,但也有一些相互独立的抗原决定簇。

猪血红蛋白及戊二醛聚合猪血红蛋白氧载体的研究

目的阐明猪血红蛋白的主要理化特性,并了解戊二醛聚合反应对猪血红蛋白主要性能的影响。方法猪血经多步纯化获取高纯度猪血红蛋白,以戊二醛为交联剂制备聚合猪血红蛋白样品。鉴定猪血红蛋白的纯度、聚合体分子量分布、携氧性能及自氧化等指标。结果猪血红蛋白在生理pH条件下的P50为23.6 mmHg,Hill系数为2.86。聚合猪血红蛋白为分子量大小不均一的混合体,聚合体P50和Hill系数均减小,自氧化趋势增大。结论猪血红蛋白具有较高氧亲和力,与人血红蛋白相似,明显高于牛血红蛋白。猪血红蛋白的丰富来源、特殊的氧亲和力和较好的化学稳定性等特点使其可成为一种血红蛋白类氧载体产品制备的有用材料。

聚合猪血红蛋白在犬异源输血中的应用研究

对猪血红蛋白作为血液替代品的效果进行研究,提取猪血红蛋白,经PEG聚合及纯化,输给试验犬,检测、记录犬输入聚合血红蛋白前后的临床指标,并在输血后进行血常规和尿常规检测。结果表明,将聚合猪血红蛋白输入犬体内没有发生明显的溶血和凝血等输血反应,通过尿常规检测聚合血红蛋白在体内可存在7 d;第2次聚合血红蛋白输血也没有出现临床不良反应。结果显示聚合血红蛋白作为血液替代品有较好的临床应用前景。

戊二醛为交联剂制备聚合碳氧血红蛋白的实验研究

目的探讨常温、无需隔氧环境下的血红蛋白类氧载体(HBOC)制备条件及其产物聚合碳氧血红蛋白(poly-COHb)的质量。方法以人脐带血血红蛋白为原料,戊二醛为交联剂,实验组选择血红蛋白浓度、戊二醛与COHb摩尔比、反应时间和反应温度做四因素三水平正交试验(n=3),确定最佳匹配条件并制备3批poly-COHb;对照组在低温、全程隔氧条件下制备3批聚合血红蛋白(poly-Hb)。比较2组交联制品的超大分子含量、聚合度、平均分子量、高铁血红蛋白(MetHb)及P_(50)。结果按本四因素正交试验求出的poly-COHb最佳匹配条件:[Hb]70 g/L,戊二醛与COHb摩尔比为11∶1,反应时间60 min,反应温度25℃;poly-COHb与poly-Hb比较:超大分子含量(%)为0.67±0.51 vs 0.60±0.01(P>0.05),聚合度(%)与平均分子量(kD)分别为84.25±0.99 vs 54.16±5.12,235.27±13.50 vs 97.62±6.57(P<0.05),MetHb占比(%)为2.40±0.66 vs 2.47±0.46(P>0.05),P_(50)(mmHg)为6.37±0.30 vs 14.20±1.09(P<0.05)。结论在常温、无需隔氧条件下以戊二醛为交联剂制备的poly-COHb与poly-Hb相比,聚合度、平均分子量提高,大大减小制备难度。

开环棉籽糖分子内交联血红蛋白及其戊二醛的二次交联

用高碘酸钠氧化制备开环棉籽糖 ( O-Raffinose) ,将其作为交联剂对脱氧态无基质血红蛋白 ( Stroma-free hemoglobin SFHb)进行修饰 .十二烷基磺酸钠 -聚丙烯酰胺不连续电泳 ( SDS-PAGE)结果显示 ,开环棉籽糖交联血红蛋白 ( O-Ra-Hb)与 SFHb相比抗解聚性有明显提高 ;琼脂糖 ( Sepharose)凝胶层析结果显示 ,SFHb和 O-Ra-Hb出峰时间和峰形大小基本相同 ,说明交联反应主要发生在分子内的亚基间 ,基本没有分子间交联产物 .用戊二醛 ( GDA)在优化条件下对 O-Ra-Hb进行分子间二次交联 ,SDS-PAGE结果显示 ,二次交联产物稳定性比 O-Ra-Hb有了进一步提高 ;Sepharose凝胶层析结果表明 ,产物中分子量为 65 0 0 0的未聚合的 O-Ra-Hb组分为 2 2 .6% ,分子量为 1 3 0 0 0 0～ 60 0 0 0 0的组分为 76.9% ,分子量为 60 0 0 0 0以上的组分仅为 0 .5 % 。

人胎盘血红蛋白聚合工艺的优化研究

从影响血红蛋白与戊二醛聚合的相关因素戊二醛加样方式、血红蛋白浓度、戊二醛与血红蛋白摩尔比、反应时间和温度出发，以固定变量的方法逐个研究各因素对聚合产物分子量分布的影响，以达到降低制品平均分子量、提高有效转化率的目的。结果表明：原工艺平均分子量为（350．20±35．45）kD，有效转化率（分子量90～600kD）为53．27％±4．95％；而改进后工艺平均分子量为（158．60±8．70）kD，有效转化率为69．50％±3．70％。此外，改进后工艺应用于中试（扩大30倍）规模的验证性试验，有效转化率和平均分子量均可达到上述小试结果。

HSRP1携氧液对兔控制性重度失血性贫血早期灌注的疗效观察

目的观察戊二醛聚合牛血红蛋白注射液(glutaraldehyde polymerizes bovine hemoglobin injection,代号:HSRP1)在兔重度失血性贫血早期灌注的疗效。方法建立兔控制性重度失血性贫血模型,将制模成功的12只兔分为HSRP1组和乳酸钠林格注射液(sodium lactate ringer's injection,LR)组,每组6只,雌雄各半。HSPR1组和LR组分别用HSRP1和LR进行治疗。观察两组实验兔的存活率,并测量失血前后、灌注后24 h内各个时间点的血流动力学、静脉血气、血浆血红蛋白,以及碱剩余、乳酸和碳酸氢根等指标。结果HSRP1组实验兔存活率与LR组差异具有统计学意义(P<0.05);放血后,各组实验兔的平均动脉压显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05),但在灌注后HSPR1组实验兔的平均动脉压与LR组差异无统计学意义;HSRP1组实验兔在灌注第二阶段,血液乳酸浓度和碱剩余在各时间点与LR组差异均存在统计学意义(P<0.05),在灌注后2 h时,呼吸频率与LR组差异均存在统计学意义(P<0.05),在灌注后4 h时心率与LR组相比,差异存在统计学意义(P<0.05);HSRP1组实验兔的血浆静脉氧分压、静脉氧饱和度和血浆血红蛋白在实验的各个时间点与LR组差异,均无统计学意义。结论HSPR1可用于兔重度失血性贫血,通过对缺氧组织供氧,纠正无氧代谢,提高实验兔的存活率。HSPR1作为一种新型携氧液,早期可纠正重度失血性贫血患者的氧供平衡。