戊型肝炎病毒IgM抗体检测试剂盒制备及功能验证

目的:建立一种快速、简单实用的检测戊型肝炎病毒IgM抗体的胶体金免疫层析法。方法:用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,用鼠源人IgM单克隆抗体进行胶体金标记,采用胶体金免疫层析技术及间接法原理检测戊型肝炎病毒IgM抗体,优化抗体最适宜浓度、抗体稀释度及包被抗原浓度,利用市售ELISA免疫吸附试剂对100例临床血清标本进行比较实验。结果:鼠抗人-IgM抗体标记最适合蛋白用量为10μg/mL、金标鼠抗人-IgM抗体最适合的稀释度为8%、最佳抗原包被浓度为1.0 mg/mL;与酶联分析法对比,阳性符合率98.1%,阴性符合率100%。结论:HEV-IgM胶体金免疫层析试剂,方法简便、快速,适应戊型肝炎早期感染的快速检测及科研工作需要。

临检样本中甲型和戊型肝炎病毒IgM抗体检测的比较

目的比较分析临检样本中甲型和戊型肝炎病毒IgM抗体(抗HAV-IgM和抗HEV-IgM)检测状况。方法收集非流行年份成人临床检验样本32600份。采用酶免疫法(EIA)捕捉抗体法检测抗-HAVIgM,EIA间接法检测抗-HEVIgM。结果32600份中送检抗-HAVIgM者为1785份,阳性34例,阳性率为1.9%,送检抗-HEVIgM者1820份,阳性88例,阳性率为4.84%。比较分析显示,抗-HEVIgM阳性率相对较高(χ2=23.668,P<0.01),且具有季节上相对分散,年龄上以30岁以上为主,性别上男女相差相对较小等特点。结论非流行年份成人临床检验样本中,抗HAV-IgM和抗HEV-IgM检出率相对较低,但相对甲型肝炎来说,戊型肝炎更值得广泛注意。

胶体金免疫层析技术同步检测甲、戊型肝炎病毒IgM抗体的研究

目的 建立胶体金免疫层析 (GICA)同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒的IgM抗体的方法。方法 采用胶体金标记鼠抗人IgM单克隆抗体 ,制成免疫层析测试条。血清中甲、戊型肝炎的特异性抗体与测试条上金标抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动与膜上固相包被的抗原 (HAAg、HEAg)、抗体 (羊抗鼠IgM)结合形成肉眼可见的红色线条。结果 自制的GICA试条与EIA对比检测血清标本 188份 ,各单项指标IgM 抗HAV、IgM 抗HEV两法总符合率依次为97.9%、98.4 % ,检测灵敏度可达 2ng/ml。结论 用于同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒特异性抗体的GICA试条的制备条件已基本建立 ;其检测结果特异性强、灵敏度高、操作方法简便快捷且无需特殊仪器设备。

两种方法检测戊型肝炎病毒IgM抗体的临床验证

目的对MP生物医学亚太私人有限公司(简称MP公司)生产的戊型肝炎病毒IgM抗体快速检测试剂(胶体金法)和戊型肝炎病毒IgM抗体检测试剂(酶联免疫吸附试验,ELISA)进行临床验证,评价其与参比试剂的等效性。方法采用SFDA注册的试剂(北京万泰生物药业股份有限公司生产,ELISA)为参比试剂,与MP公司生产的上述两种试剂,同时对250例标本进行比对试验;如MP公司试剂与万泰试剂检测结果不一致,用SFDA注册的第3方试剂(上海科华生物工程股份有限公司生产,戊型肝炎病毒IgM抗体,ELISA)进行复核。结果 MP公司的胶体金法和ELISA试剂与万泰ELISA试剂检测戊型肝炎病毒IgM抗体阴性符合率分别为96.9%和94.9%,阳性符合率分别为94.5%和92.7%,总符合率分别为96.4%和94.4%。两公司试剂检测结果比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 MP公司胶体金法和ELISA检测戊型肝炎病毒IgM抗体试剂,与参比试剂(万泰试剂)具有等效性,可以在临床诊断中应用。

新型ELISA检测戊型肝炎病毒IgM抗体的敏感度与特异度评价

目的 评估基于戊型肝炎病毒（HEV）主要免疫表位多肽及其截短多肽的新型ELISA检测抗HEV IgM的敏感度与特异度.方法 根据抗HEV抗体与主要免疫表位多肽的高反应性以及与截短多肽的不反应性,分别以两种多肽为包被抗原,建立新型ELISA法,检测2007-2012年收集的612例可疑HEV感染者血清抗HEV IgM,并与万泰HEV IgM抗体诊断试剂盒检测结果比较,结果不一致血清用免疫印迹法（Western blotting）确认,χ^2检验比较两种试剂灵敏度和特异度.结果 抗HEV IgM检测中,新型ELISA阳性326例,阴性286例;万泰试剂阳性370例,阴性242例;两种试剂同时阳性320例,同时阴性236例.在万泰试剂阳性而新型ELISA阴性的50例中,Western blotting证实阳性21例,阴性29例;在万泰试剂阴性而新型ELISA阳性的6例中,Western blotting显示阳性与阴性各3例.以两种试剂同时阳性或Western blotting阳性为标准,万泰试剂与新型ELISA灵敏度分别为99.1％（95％ CI：0.972-0.998）和93.8％（95％ CI：0.907-0.961）,差异有统计学意义（χ^2=13.988,P＜0.001）;特异度分别为89.2％（95％ CI：0.847-0.925）和98.9％（95％ CI：0.965-0.997）,差异有统计学意义（χ^2=22.466,P＜0.001）.结论 与万泰试剂相比,新型ELISA检测抗HEV IgM敏感度略低,但特异度较好,可减少抗HEV IgM检测中的假阳性.

重组抗原检测戊型肝炎病毒IgM抗体及其意义

用戊型肝炎病毒(HEV)重组抗原建立酶联免疫吸附试验(ELISA)，检测肝炎患者和健康供血人群血清中抗戊型肝炎病毒IgM类抗体(抗-HEV IgM)，并评价其检测意义。在与合成肽抗原比较检测的77份急性戊型肝炎患者血清中，有54份(70.1%)由重组抗原捡测抗-HEV IgM阳性。其阳性率明显高于台成酞抗原(21/77,27．3％)。15例戊型肝炎患者双份血清用重组抗原ELISA检铡，急性期血清有11份抗-HEV IgM阳性，恢复期血清仅1份阳性。抗-HEV IgG阳性的健康供血者(8人)和甲、乙、丙型肝炎患者(11例)无1例IgM抗体阳性。结果表明，抗-HEV IgM可以作为戊型肝炎病毒新近感染的标志。HEV重组抗原检铡抗-HEV IgM敏感性高，特异性强，有助于戊型肝炎病毒感染的早期诊断。

戊型肝炎病毒IgM抗体阳性患者系列血清3种生物标志物结果分析

目的分析戊型肝炎病毒(HEV)IgM抗体阳性患者的入院时、住院中和出院时的系列血清中3种生物标志物的变化情况及其诊断意义。方法收集临床常规检测的HEV IgM抗体阳性患者的入院时、住院中和出院时的血清,用酶联免疫(EIA)试剂检测HEV IgG抗体和IgM抗体,用实时荧光PCR方法检测核酸,分析其变化情况。结果在25例HEV IgM抗体阳性患者系列血清中,HEV IgM抗体为4例高值无明显变化、15例高值明显下降变化、1例明显升高变化、5例低值无明显变化,HEV IgG抗体为3例高值无明显变化、15例高值明显升高变化、4例高值下降后维持高值、1例低值转为阴性、2例始终阴性,HEV RNA为入院第1天22例(88%)阳性、入院后1周15例(62.5%)阳性、入院后2周1例(5.6%)阳性。结论戊型肝炎患者发病过程中,系列血清HEV IgG抗体和IgM抗体及HEV RNA联合检测有助于戊型肝炎的明确诊断。

戊型肝炎病毒IgM抗体检测结果流行病学分析

戊型病毒性肝炎是由戊型肝炎病毒（HEV）引起的肠道传播为主的急性传染性肝炎。可散发和流行,水源和食源暴发,发展中国家为主,约占急性非甲非乙型肝炎的30%～70%。

用不同厂家生产的戊型肝炎病毒IgM抗体检测试剂诊断戊型肝炎的准确性对比

目的 :对比用不同厂家生产的戊型肝炎病毒IgM(免疫球蛋白)抗体检测试剂诊断戊型肝炎的准确性。方法 :对在我院进行戊型肝炎筛查的2000例受检者的检查资料进行回顾性分析。分别使用珠海丽珠试剂股份有限公司生产的戊型肝炎病毒IgM抗体检测试剂盒与英科新创(厦门)科技有限公司生产的戊型肝炎病毒IgM抗体检测试剂盒对这2000例受检者进行检测,然后对比用这两种试剂诊断戊型肝炎的特异性、灵敏度与准确率。结果 :用珠海丽珠试剂股份有限公司生产的戊型肝炎病毒IgM抗体检测试剂盒诊断戊型肝炎的特异性为94.8%、灵敏度为98.5%、准确率为92%。用英科新创(厦门)科技有限公司生产的戊型肝炎病毒IgM抗体检测试剂盒诊断戊型肝炎的特异性为90.2%、灵敏度为96.9%、准确率为96%。用这两个厂家生产的戊型肝炎病毒IgM抗体检测试剂诊断戊型肝炎的特异性、灵敏度及与准确率相比差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 :用珠海丽珠试剂股份有限公司与英科新创(厦门)科技有限公司生产的戊型肝炎病毒IgM抗体检测试剂诊断戊型肝炎的特异性、灵敏度及准确性均较高,临床上可将这两个厂家生产的戊型肝炎病毒IgM抗体检测试剂作为诊断戊型肝炎的常用试剂。

2013—2017年西安市公共食品从业人员戊型肝炎病毒IgM抗体检测结果分析

目的了解西安市公共食品从业人员戊型肝炎(HE)流行发病情况。方法以2013—2017年接受体检的36 152名公共食品从业人员为研究对象,分析体检者中抗-戊型肝炎病毒(HEV)抗体阳性检查结果。结果 2013—2017年西安市受检的36 152名食品从业人员共检出41例抗-HEV-IgM阳性,总阳性率为0.11%;各年份阳性率呈逐年下降趋势(P>0.05)。不同年龄段有序分组间抗-HEV-IgG阳性率与年龄无线性关系(P>0.05)。男性从业者阳性率显著高于女性(P<0.05);不同月份抗-HEV-IgM阳性差异无统计学意义(P>0.05)。一线工作从业人员抗-HEV-IgM阳性率显著低于二线人员(P<0.05);公共娱乐行业抗-HEV-IgM阳性率显著高于食品饮品加工行业(P<0.05)。结论西安市食品从业人员HEV感染率虽逐年下降,但仍维持在较高水平,尤其是二线工作人员及公共娱乐行业。

武汉地区体检人群戊型肝炎病毒IgM抗体调查分析

戊型肝炎是由戊型肝炎病毒（hepatitis E virus,HEV）引起的一种以损害肝细胞为主的急性传染病,多数病例症状较轻。通过了解武汉地区体检人群中的HEV携带情况,为制定戊型肝炎经血传播的防控策略提供依据,本文对2011年武汉地区体检人群戊型肝炎病毒近期感染情况进行调查,报道如下。

武汉城市圈献血人群戊型肝炎病毒流行情况调查

目的了解武汉城市圈无偿献血人群戊型肝炎病毒(HEV)流行情况,为献血人群HEV筛查策略的制定提供数据支撑。方法随机收集2021年1—12月武汉城市圈内实施集中化检测的4个地区(鄂州、天门、仙桃、潜江)的献血者血液标本3329份,其中ALT正常的无偿献血者合格血样2737份(ALT正常组),ALT升高的血样592份(ALT升高组)。采用ELISA检测抗-HEV IgG、抗-HEV IgM和HEV Ag;采用Real-time PCR对ALT升高的血样和抗-HEV IgM阳性的ALT正常血样进行HEV RNA单人份检测。采用χ^(2)检验或Fisher精确检验来评估不同地区、不同ALT水平组抗-HEV IgG和抗-HEV IgM阳性率的差异。结果4个地区3329份血液标本的抗-HEV IgG、抗-HEV IgM和HEV Ag总阳性率分别为21.63%(720/3329)、1.29%(43/3329)和0%。不同地区献血者抗-HEV IgG阳性率有差异(P<0.05)。抗-HEV IgG阳性率最高的是天门29.44%(136/462),其次分别是潜江22.69%(236/1040)、仙桃22.66%(230/1015)、鄂州14.53%(118/812)。ALT升高组献血者抗-HEV IgG阳性率和抗-HEV IgM阳性率显著高于ALT正常组献血者(25.68%vs 20.75%,2.53%vs 1.02%,均为P<0.05)。ALT水平升高组的所有血样和抗-HEV IgM阳性的合格血样均未检测到HEV RNA。结论HEV在武汉城市圈献血人群中存在流行,但现症感染率极低,且不同地区抗-HEV抗体血清流行率存在差异。ALT升高献血者抗-HEV抗体流行率显著高于ALT正常献血者。

肝移植受者戊型肝炎病毒感染

戊型肝炎病毒感染是急性病毒性肝炎的常见病因。近年来,戊型肝炎发病率呈上升趋势,逐渐成为世界范围内急性病毒性肝炎的重要病因。年龄、性别、免疫抑制强度、经济社会因素均是戊型肝炎病毒感染的危险因素。肝移植受者术后需长期应用免疫抑制药进行抗排斥反应治疗,处于免疫抑制状态,易感染戊型肝炎病毒且有引起肝纤维化及肝硬化的风险。因此,在临床工作中应重点关注肝移植受者,同时应进一步明确相关危险因素,以便辅助诊断和采取更严格的预防措施。本文根据现有文献对戊型肝炎病毒病原学特点以及肝移植受者戊型肝炎病毒感染的流行病学特征、临床表现、诊断及治疗进行综述,以期在临床上更好地对肝移植受者戊型肝炎病毒感染进行监测、治疗及预防,改善肝移植受者的预后。

戊型肝炎病毒研究进展

戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus, HEV)是一种单链、非包膜的RNA病毒,目前可分为8个基因型。作为一种人兽共患病原体,HEV能引起人的急性病毒性肝炎和动物的感染,其主要的传播途径为粪-口传播,也可通过输血和母婴传播。HEV主要在发展中国家流行,而欧美等发达国家也有散发的病例。目前,检测HEV的常用方法是实时荧光定量RT-PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA),也有学者利用反转录重组酶聚合酶扩增(RT-RPA)和CRISPR系统等新型检测方法进行HEV检测。在药物治疗方面,可用利巴韦林、干扰素或多烯磷脂酰胆碱(PPC)等化合物治疗HEV引起的感染,也可使用中药单味或复方改善临床症状并作协同治疗。接种疫苗被认为是预防和控制HEV感染的有效手段,但目前仍无有效的HEV体外细胞培养系统,传统的灭活苗和减毒苗无法批量制备。当前HEV疫苗的研究方向主要有基因重组蛋白疫苗、DNA疫苗、联合疫苗和口服疫苗等。接种疫苗是预防戊型肝炎的重要措施,采用切断传播途径为主的综合性预防措施也可控制该病的流行。笔者主要通过对HEV的检测方法、药物治疗和疫苗免疫等方面的研究进展进行归纳和总结,并对HEV的防控研究进行展望,以期为HEV的预防与控制提供新的思路。

二氢乳清酸脱氢酶抑制剂ASLAN003抗戊型肝炎病毒的研究

研究二氢乳清酸脱氢酶抑制剂ASLAN003对戊型肝炎病毒(HEV)复制的影响,为抗HEV治疗提供新型候选药物。用带有高斯荧光素酶的HEV复制子模型研究ASLAN003是否具有抗HEV作用,实时荧光定量PCR和间接免疫荧光检测ASLAN003对HEV RNA复制以及衣壳蛋白表达的抑制作用,细胞毒性试验和间接免疫荧光计算ASLAN003的半数毒性浓度(CC_(50))和半数抑制浓度(IC_(50))。结果表明,ASLAN003在0.2~50μmol/L浓度范围内能显著抑制HEV复制子在HEK 293T和Huh7细胞内的复制;ASLAN003在1μmol/L浓度能有效抑制HEV RNA复制,使其下降50%;在0.4μmol/L的浓度能够显著抑制衣壳蛋白ORF2的表达。通过对ASLAN003的细胞毒性和抑制HEV效果进行研究发现,其CC_(50)为294μmol/L,而IC_(50)为0.231μmol/L。说明ASLAN003能够有效抑制HEV复制,提示其可作为潜在抗病毒药物。

戊型肝炎病毒感染对肝细胞癌发生、发展影响的研究进展

肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)是原发性肝癌常见的病理类型之一,乙肝(Hepatitis B,HB)、丙肝(Hepatitis C,HC)与肝癌的发生、发展密切相关。目前,临床关于戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)与肝癌的发生、发展的相关性尚不清楚。近年来,由HEV导致的戊型病毒性肝炎(Hepatitis E,HE)的发病率呈逐年上升的趋势,严重影响患者生命健康。HEV在机体内持续感染和复制,导致慢性肝炎,增加肝纤维化、肝硬化的发病风险,与HCC的发生、发展具有相关性。目前,HEV导致HCC的观点尚存在争议,本研究对HEV感染与HCC发生、发展的相关性进行综述。

1例不同方法学对甲、戊型肝炎病毒抗体检测结果的差异分析

目的:分析1例不同方法学对甲、戊型肝炎病毒抗体检测结果的差异。方法:选取2021年9月广西中医药大学附属瑞康医院收治的1例初次检测及复查结果均显示为甲型肝炎病毒(HAV-IgM)弱阳性、戊型肝炎病毒(HEV-IgM)阳性的患者作为研究对象。患者初次采用酶联免疫吸附法检测,结果显示HAV-IgM弱阳性、HEV-IgM阳性,复查结果与初次检测结果保持一致;随后前往其他医院检测(化学发光法),结果均为阴性。为探讨检测结果矛盾的原因,分别采用多家公司试剂盒及免疫印迹法进行验证。结果:该例患者HAV-IgM为阳性,初检及复查的安图结果与实验室罗氏验证的结果一致;HEV-IgM为阴性,安图结果与免疫印迹结果一致。结论:HAV-IgM、HEV-IgM具有多种不同方法学试剂,实验室应根据自身临床实验室的条件选择适合的方法学开展项目检测。针对异常结果应积极与临床沟通,结合临床症状判断,或采用准确度更高的方法学复查,并建议受检者定期复检。

基于多聚化重组抗原的检测戊型肝炎病毒IgM与IgG抗体的ELISA的建立及初步评估

建立并评估分别检测戊型肝炎 (戊肝 )病毒IgM与IgG抗体的捕获法及间接法ELISA。以原核表达的多聚化重组HEV蛋白为抗原 ,建立戊肝捕获法IgMELISA(E2 -IgM )和间接法IgGELISA(E2 -IgG)。利用 2 9只实验感染猴系列血清及多份临床急性肝炎血清、正常人血清以及单克隆抗体评估所建立的方法的敏感性与特异性 ,并与商品化试剂 (Genelabs公司抗 -HEVIgG和IgM试剂 ,GL -IgG/GL -IgM )进行比较。 2 9只恒河猴E2 -IgM和E2-IgG的阳转率均为 10 0 % ,其中 75 %在感染后 4周内阳转 ,均早于ALT异常时间。E2 -IgM持续 2～ 14周 ,平均6周 ;E2 -IgG在 70周时仍无一阴转。GL -IgG阳转率为 79 3% ( 2 3/ 2 9) ,多数晚于ALT异常时间 ,平均持续约18周 ,但最长为 1只在感染后 70周时仍为阳性。用E2 -IgM试剂盒检测 92 8份正常人血清 ,仅 2份OD值略高于0 2。检测 5 10份临床急性肝炎血清 ,可明显将其区分为 2个部分 ,一个部分OD值小于 0 2 ,其OD值分布与正常人相似 ;另一个部分OD值大于 0 4,共 131份 ,其中 10 9份大于 1 0。可能分别对应于急性肝炎中的非戊肝患者和戊肝患者。 119份非甲～丙急性肝炎中 ,E2 -IgM阳性 5 7份 ,GL -IgM阳性 2 9份 (E2 -IgM均阳性 )。 5 0 6 0份普通人群血清的E2 -IgGOD值在 0 2以下 。

自贡市食品及公共场所从业人员甲型、戊型肝炎病毒IgM抗体检测结果分析

目的了解自贡市食品及公共场所从业人员甲型、戊型肝炎病毒抗体(HAV-IgM、HEV-IgM)检测情况,并分析采取异常谷丙转氨酶(ALT)筛查方式及快速法(胶体金法)检测可能造成的漏检。方法收集自贡市各区县实验室检测数据进行描述性比较分析。结果36090名体检者中ALT异常者1604人,异常率为4.44%。1604名ALT异常者中HAV-IgM阳性18人(1.12%),HEV-IgM阳性10人(0.62%),2019与2020年阳性标本比较后差异均无统计学意义(HAV-IgM:χ^(2)=0.32,P=0.57;HEV-IgM:χ^(2)=2.07,P=0.15)。1500名ALT正常体检者进行HAV-IgM、HEV-IgM抗体检测,HAV-IgM阳性9人(0.60%),HEV-IgM阳性7人(0.47%)。结论仅对ALT异常者进行HAV-IgM、HEV-IgM抗体检测很可能导致漏检,进而造成严重的公共卫生安全隐患。在抗体的检测上,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA)更值得临床推广应用。

戊型肝炎病毒IgM抗体的检测及临床意义

采用合成多肽抗原建立了检测抗戊型肝炎病毒(HEV)-IgM 的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,成本低、操作简便、快速、重复性好、特异性强。与抗甲型肝炎病毒(HAV)、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)的 IgM 抗体无交叉反应,排除了 RF 的干扰。且可被β-巯基乙醇抑制而不起反应。检测健康献血员血清,抗 HEV-IgM 均为阴性;检测抗 HEV-IgG 阳性的戊型肝炎病人血清,抗 HEV-IgM 的阳性检出率为44%。检测抗 HAV-IgM 阴性的血清标本,抗 HEV-IgM 的阳性检出率为12%。此外,对45例疑似戊型肝炎病人急性期与恢复期血清的检测结果显示,前者的检出率(71%)高于后者(24%)。提示戊型肝炎病毒抗体的检出模式有三种,①IgG、IgM 抗体均阳性;②IgG 阳性、IgM 阴性;③IgG 阴性、IgM 阳性。表明抗 HEV-IgM 在发病早期出现,多在恢复期消失。抗 HEV-IgM 的检测对于戊型肝炎的早期诊断治疗及病程观察有重要意义,值得推广应用。