戊己丸对吲哚美辛诱导大鼠胃溃疡的保护作用研究

目的 研究戊己丸对吲哚美辛诱导的大鼠胃溃疡的保护作用,并初步探索其可能的作用机制。方法 36只SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组(奥美拉唑,20 mg/kg)、戊己丸低、中、高(2.52、5.04、10.08 g/kg生药量)剂量组,每组6只。各组大鼠灌胃相应药物或0.5%羧甲基纤维素钠(Carboxymethyl Cellulose, CMC-Na)水溶液,1次/d,连续7 d,于末次给药1 h后,除正常组外,其余各组均给予吲哚美辛(60 mg/kg)灌胃造模;6 h后处死大鼠,收集血清和胃组织。通过改良Guth法计算胃溃疡指数和溃疡抑制率,染色观察比较各组大鼠胃组织病理学变化;使用试剂盒测定胃组织中丙二醛(Malonaldehyde, MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase, SOD)和环氧合酶1(Cyclooxygenase-1,COX-1),血清中一氧化氮(Nitric Oxide, NO)、肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)和白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)的含量;TUNEL染色法比较各组大鼠胃组织细胞凋亡情况;免疫组化法测定胃组织中环氧合酶2(Cyclooxygenase-2,COX-2)、NF-κB(p65)蛋白的表达水平。结果 与正常组相比,模型组大鼠胃组织黏膜层、黏膜下层、肌层及浆膜部分结构受损,胃溃疡指数和胃组织细胞凋亡百分比显著升高(P<0.01);MDA、TNF-α、IL-6水平显著升高(P<0.01),COX-1、NO、IL-10和SOD水平显著降低(P<0.01);COX-2和NF-κB(p65)蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组相比,各给药组均能改善胃组织损伤状况;戊己丸中、高剂量组和奥美拉唑组均能显著降低(P<0.01)胃溃疡指数和升高溃疡抑制率,升高COX-1、NO、IL-10水平,降低MDA、COX-2、TNF-α、IL-6和NF-κB(p65)水平,各给药组均明显降低大鼠胃组织细胞凋亡百分比,其中戊己丸中剂量组表现出良好的作用。结论 戊己丸对吲哚美辛诱导的大鼠胃溃疡有明显的保护作用,其作用机制可能与改善氧化应激抑制、炎症反应和减少细胞凋亡有关。

戊己丸现代研究进展

戊己丸是治疗肠道疾病的中医经典方,由黄连、白芍、吴茱萸3味药组成,具有疏肝和胃、降逆止呕之功效。现代研究表明,戊己丸对多种消化道疾病动物模型有效,可减轻病理损伤、延缓疾病发展进程,具有镇痛、抗炎、止泻、抗溃疡等多种药理作用。课题组一直致力于戊己丸的现代科学研究,包括戊己丸复方配伍机理研究和药代动力学等的研究,从戊己丸的处方来源、化学成分、剂型、现代药理研究以及临床研究等方面结合课题组的研究成果对戊己丸的现代研究进展作总结归纳,探讨其药效物质基础及重点研究方向,以期为戊己丸的现代开发研究及临床优化应用提供理论参考和科学依据,发挥戊己丸经典复方的更大作用。

高氧水和戊己丸对幽门螺杆菌的抑菌作用研究

目的:观察高氧水和戊己丸对幽门螺杆菌(Hp)的抑菌作用,检测戊己丸、高氧水对Hp的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度,比较高氧水和戊己丸对Hp的抑菌作用。方法:将菌株激活培养传代后制备菌液,通过抑菌圈实验观察高氧水、古方戊己丸、药典戊己丸、生理盐水、阿莫西林对Hp的抑制作用。采用抑菌效果较好的戊己丸、高氧水、高氧戊己汤对菌液进行干预后测得其最小抑菌浓度和最小杀菌浓度。结果:古方戊己丸的抑菌圈直径大于药典戊己丸。古方戊己丸、高氧水、生理盐水、阿莫西林的抑菌圈直径分别为(25.4±0.7)mm、(12.2±0.8)mm、(6.7±0.0)mm、(12.1±0.9)mm。古方戊己丸、高氧水、高氧戊己汤的MIC分别为31.25、62.50、31.25 mg/mL,MBC分别为62.50、250.00、62.50 mg/mL。结论:戊己丸和高氧水对Hp均有抑制作用。

戊己丸提取物不同配伍的肠外翻吸收研究

目的研究戊己丸不同配伍比例时在肠道中的吸收动力学的变化,说明方剂配伍的规律性。方法利用L9(34)正交设计,将黄连、制吴茱萸、土炒白芍组成不同配伍的9个组方,通过体外肠外翻模型和LC-MS分析手段,观察方中代表成分小檗碱、巴马汀、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、芍药苷的吸收变化情况。结果以各代表成分的Ka为指标,通过正交分析,得出同一成分在肠道不同部位的吸收趋势大致相同,但不同成分之间的吸收趋势变化较大。多指标归一加权综合评分法分析表明,黄连在各肠段吸收贡献度最大,确定了其君药地位,制吴茱萸和土炒白芍次之,为臣药。在各个肠段的最优配比组合(黄连∶制吴茱萸∶土炒白芍)为:空肠12∶6∶12,回肠12∶6∶6与12∶6∶12,结肠12∶6∶12。结论戊己丸各代表成分在肠道中吸收动力学过程,随方剂的配伍比例不同而变化,其在肠道吸收的最优配伍组合为黄连∶制吴茱萸∶土炒白芍=6∶3∶6。

HPLC测定戊己丸中盐酸小檗碱和盐酸巴马汀的含量

目的 :建立戊己丸中盐酸小檗碱和盐酸巴马汀的含量测定项。方法 :超声提取 ,使用C18柱 ,0 .0 33mol/L磷酸二氢钾溶液 乙腈 (90∶40 )为流动相 ,检测波长为 2 6 5nm。结果 :方法线性关系良好 ,平均回收率 ,盐酸小檗碱为 99.14% ,盐酸巴马汀为 98.5 9% ;RSD分别为 1.3%和 1.7%。结论 :本方法分离良好 。

戊己丸对炎症后肠易激综合征大鼠脑肠肽的调控作用

目的寻找诊断和治疗肠易激综合征(IBS)的生物学指标。方法采用乙酸加束缚应激法建立炎症后肠易激综合征(PI-IBS)动物模型;采用大鼠结肠运动指数(MI)、2 h内排出的粪粒数以及玻璃小球排出时间评价大鼠结肠的运动能力;观察PI-IBS模型大鼠的形成以及戊己丸对其的治疗作用;采用ELISA法检测PI-IBS大鼠脑和结肠组织中的降钙素基因相关肽(CGRP)、胃动素(MTL)、神经肽Y(NPY)、P物质(SP)、生长抑素(SS)、血管活性肠肽(VIP)、胆囊收缩素(CCK)水平。结果成功建立PI-IBS大鼠模型。模型大鼠体重降低;摄食量减少;排便量增多;出现稀便和无定形软便;自主运动量减少;结肠MI显著增加(P<0.05);大鼠排出的粪粒数显著增加(P<0.05);玻璃小球排出时间显著缩短(P<0.05)。戊己丸治疗7 d后能够明显改善以上症状。与正常对照组相比,PI-IBS大鼠脑组织中的CGRP、SS和VIP水平显著增加(P<0.05),NPY浓度显著降低(P<0.05);而戊己丸给药可以显著降低CGRP、SS和VIP浓度水平(P<0.05),显著升高NPY浓度水平(P<0.05)。与正常对照组相比,PI-IBS大鼠结肠组织中的CCK、NPY、MTL、SS和VIP均显著降低(P<0.05);戊己丸给药能够显著升高CCK和VIP水平(P<0.05)。结论戊己丸可通过调节IBS大鼠脑和结肠组织内多种脑肠肽的水平用来治疗IBS,这些可被调节的异常变化的脑肠肽可以成为潜在的诊断和治疗IBS的生物学指标。

戊己丸不同配伍方对炎症后肠易激综合征模型大鼠结肠运动及5-羟色胺含量的影响

目的:评价戊己丸不同配伍方对炎症后肠易激综合征(post-infectious irritable bowelsyndrome,PI-IBS)模型大鼠结肠运动功能的作用,并从5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)角度初步探讨其作用机制.方法:采用乙酸灌肠加束缚应激建立PI-IBS大鼠模型,应用戊己丸不同配伍方进行干预,应用BIOPAC MP150型多导生理记录仪描记大鼠结肠运动曲线,计算结肠运动指数和运动指数变化率,同时利用高效液相法检测血清、结肠、海马、下丘脑和额叶中5-HT的含量及5-HT转化率,甲苯胺蓝染色法计算结肠肥大细胞数目和脱颗粒率.结果:经戊己丸治疗后,中、高剂量组PI-IBS模型大鼠结肠运动指数(1770.10、1504.97、1700.64、1467.22 vs 2112.15)和运动指数变化率(68.10、40.16、59.97、39.33 vs 104.69)均显著下降(P<0.01).结肠组织中5-HT含量显著下降(3493.38、2640.41、2086.08、3255.63、2688.69、2129.13 vs 4168.36),血清中5-HT转化率(3.20、4.60、6.61、2.86、3.40、4.05 vs2.08)明显升高(P<0.05,P<0.01).中、高剂量组中枢边缘系统中5-HT含量(243.16、295.03、250.28、303.61 vs 124.42;303.51、397.30、339.94、353.02 vs 198.58;260.87、302.75、254.65、298.92 vs 166.71)显著升高(P<0.01),5-HT转化率(134.69、98.61、130.57、95.87vs 281.91;209.43、184.55、189.56、186.75vs 262.01;109.36、86.52、115.41、88.47 vs268.36)明显下降(P<0.05,P<0.01).结肠黏膜肥大细胞数目(6.40、5.11、6.48、5.57 vs 10.47)和脱颗粒率(23.81、17.94、23.25、19.19 vs34.10)亦明显下降(P<0.01).结论:戊己丸不同配伍方改善PI-IBS模型大鼠结肠运动功能的作用机制可能是通过改善5-HT含量及肥大细胞的异常状态,从而调节脑-肠轴功能实现的.

戊己丸提取物不同配伍方对豚鼠离体结肠运动影响的实验研究

目的:观察戊己丸提取物优选方对不同状态豚鼠离体结肠的影响,同时比较2种配伍比例作用的异同点。方法:通过乙酰胆碱和肾上腺素分别诱导豚鼠离体结肠运动亢进和抑制状态,在反应体系中分别滴加戊己丸1号方、2号方,观察其对豚鼠不同状态离体肠管的影响,同时用B liss法计算其半数有效浓度(EC50)。结果:对于离体结肠运动亢进模型,戊己丸1号方、2号方均可抑制结肠运动亢进,在本试验观察的时间内有明显的时间依赖性和浓度依赖性,且1号方EC50在设计观察的各时间段内均低于2号方;对于抑制模型,1号方300 mg.L-1,在15 m in时有拮抗作用(P<0.05),2号方30 mg.L-1,在9,15 m in时与模型组相比有差别(P<0.05)。结论:戊己丸1号方、2号方可显著抑制乙酰胆碱所致的结肠运动亢进;1号方、2号方对肾上腺素所致结肠运动抑制还有一定的作用;随配伍比例的不同,二者在共同药效作用的基础上,呈现出不同的作用特点和优势。

运用人工神经网络和非线性映射技术评价中药复方制剂戊己丸的质量

运用二值自适应共振理论（ＡＲＴ１）网络和非线性映射（ＮＬＭ）技术对中药戊己丸进行了省缺药材的定性识别研究。实验数据为药材浸出物的红外光谱，特征提取采用Ｓｈａｎｎｏｎ信息量法。结果表明，ＡＲＴ１网络能对多种情况进行识别，正确识别率为８５％，明显优于ＮＬＭ技术。

戊己丸配伍机制研究

目的研究中药复方戊己丸的配伍机制,对传统配伍理论进行验证并明确各药味在处方中的作用。方法采用全拆方实验设计,对不同药味组成的7个组方进行药理实验,以大鼠胃溃疡实验,小鼠镇痛实验和小鼠腹泻实验作为药效学指标,用SPSS统计软件对实验数据进行方差分析。结果明确了黄连为方中君药,白芍相须为用,吴茱萸药性相反,起反佐之功,与传统的中医理论相一致。结论本实验证实了中医组方理论的科学性和准确性,为戊己丸的现代应用提供了理论依据,为中药复方研究提供了思路。

胶束电动毛细管色谱法测定戊己丸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量

戊己丸收载于《中国药典》2005年版一部，是由黄连、吴茱萸和白芍3味药细粉制成的水泛丸，功效主要为泄肝和胃，降逆止呕。其含量测定仅用紫外-可见分光光度法测定盐酸小檗碱的含量。除盐酸小檗碱外，吴茱萸碱和吴茱萸次碱也是戊己丸中重要有效成分，具有较强的药理作用，药典未收载其含量测定方法。经查阅文献资料，吴茱萸及其制剂中吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量测定方法报道有HPLC，薄层扫描色谱法，

HPCE测定戊己丸中盐酸小檗碱与芍药苷的含量

目的建立同时测定戊己丸中盐酸小檗碱、芍药苷的高效毛细管电泳法，考察影响分离的各因素，确定最佳测定条件。方法测定缓冲液为50mmol／L的硼砂溶液：甲醇=1：1．5；未涂层石英毛细管（50μm×64．5cm，有效长度57．1cm）为分离通道；操作电压30kV；柱温25℃；检测波长230rim；压力进样1．5kPa×8s。结果盐酸小檗碱和芍药苷分别在O．037～0．460mg／mL、0．037～0．463mg,／mL范围呈良好的线性关系，其平均回收率分别为99．22％和99．60％。结论建立了快速、准确测定戊己丸中盐酸小檗碱、芍药苷含量的新方法。

戊己丸不同配比方对大鼠体外CYP1A2酶活性的影响

目的:探讨戊己丸不同配比方对大鼠体外肝微粒体CYP1A2酶活性的影响,从"中药配伍-代谢"关系探讨中药配伍机制.方法:按L9(34)正交表,戊己丸的配比设计为9个受试复方,以非那西丁为探针药,HPLC检测戊己丸对大鼠体外肝微粒体CYP1A2酶活性的影响.结果:黄连、吴茱萸、白芍提取物及戊己丸方1-9抑制CYP1A2的生药IC50分别为:28.07、989.69、6633.28、57.92、104.38、321.28、32.17、80.09、71.47、76.76、40.41、29.45mg/L;黄连及戊己丸可以显著抑制CYP1A2酶活性,不同配比戊己丸抑制CYP1A2酶活性作用不同,有统计学差异;随着黄连、吴茱萸两药在戊己丸方中剂量水平的增高,戊己丸组方抑制CYP1A2酶活性的能力增强,随着白芍在戊己丸方中剂量水平的增高可以减弱该组方抑制CYPA2酶活性的能力,且戊己丸组方中吴茱萸和白芍配比不同可以影响方中黄连抑制CYP1A2酶活性的程度.结论:戊己丸配比不同,对CYP1A2酶活性的抑制作用不同,这种差异可能是不同配比戊己丸药效学、药动学差异的原因所在.

戊己丸对胃溃疡模型大鼠IL-6、IL-8的影响

目的观察戊己丸对胃溃疡模型溃疡面积及炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)表达的影响。方法采用幽门螺杆菌感染胃溃疡模型,随机分组,分别给药,采用ELISA法检测IL-6、IL-8含量与表达。结果戊己丸能缩小Hp感染致胃溃疡模型溃疡面积,与模型组比较,差异有统计学意义;能降低模型动物血清炎症因子IL-6、IL-8水平,与模型组比较,差异有统计学意义。结论戊己丸能明显改善幽门螺杆菌致胃溃疡模型大鼠胃溃疡黏膜面积,明显下调IL-6、IL-8的表达。

超微戊己丸复方及单味药的抑菌作用研究

目的探讨戊己丸及其各单味药对胃肠道内6种常见(条件)致病菌的抑制作用,并比较超微药物与常规药物的抑菌效果。方法采用药敏纸片法及二倍稀释法研究各药物的抑菌能力及最低抑菌浓度(MIC)。结果黄连水煎液能够抑制除沙门氏菌以外的所有供试菌种;吴茱萸的抑菌谱和抑菌作用相对较小,对绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌表现出一定的抑制作用;白芍仅对金黄色葡萄球菌具有抑制作用。对于药物敏感菌,通过MIC比较发现,戊己丸及其单味药超微药剂的抑制效果明显优于常规药剂。结论戊己丸能够抑制胃肠道内常见(条件)致病菌的生长,且超微粉体能够提高药物的利用度。

戊己丸不同配伍组方体内对CYP1A2酶活性的影响研究及其临床意义

目的：研究戊己丸不同配比方对大鼠体内CYP1A2酶活性的影响，从药动学角度探讨戊己丸配伍机理，为临床优化给药提供借鉴。方法：以非那西丁为CYP1A2酶活性研究探针药，HPLC测定大鼠体内非那西丁及代谢产物——对乙酰氨基酚的血药浓度变化，间接反映CYP1A2酶活性的大小；以正交法设计戊己丸3因素3水平交互的9个实验点，考察所选取实验点对应的9种戊己丸配比方对CYP1A2酶活性的不同影响。结果：9种戊己丸配比复方，组成戊己丸的黄连、吴茱萸、白芍3单味药及对照组动物中，CYP1A2酶活性从高到低依次为：8^#方、白芍、9^#方、7^#方、6^#方、1^#方、2^#方、4^#方、对照组、3^#方、黄连、吴菜萸、5^#方；随着复方中黄连剂量水平的增大，酶活性呈增高趋势，复方中引入小、中剂量水平的吴莱萸或白芍可以增高CYP1A2酶活性，但高剂量吴茱萸或白芍对CYP1A2酶活性有抑制作用。结论：戊己丸各因素水平变化均可能对CYP1A2酶活性造成影响，此种影响有可能是戊已丸药效学差异的原因之一；根据本实验结果可以优化戊己丸的临床应用。

高效液相色谱法测定戊己丸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量

目的 建立高效液相色谱法测定戊己丸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量的方法。方法 采用高效液相色谱法。IntersilC18分析色谱柱 (4.6mmID× 2 5 0mm ,粒径 5 μm) ,流动相 :乙腈 - 10 %乙腈 (5 0 :5 0 ) ,流速 :1ml/min ,检测波长 :2 2 5nm。 结果 吴茱萸碱和吴茱萸次碱的理论板数分别为 2 6 81和 2 0 6 7。吴茱萸碱回归方程 :Y =0 .0 76 4 6 +0 .0 0 0 0 0 0 196 5X ,r=0 .9999) ,线性范围 10 .2～ 5 1.0 μg·ml-1;吴茱萸次碱回归方程 :Y =- 0 .2 199+0 .0 0 0 0 0 0 36 5 8X ,r =0 .9999) ,线性范围 10 .0～ 5 0 .0 μg·ml-1。吴茱萸碱平均回收率为 97.3% ,RSD 3.2 % ,吴茱萸次碱平均回收率为 10 1.4 % ,RSD 3.9%。吴茱萸碱和吴茱萸次碱最低检出浓度分别为 0 .0 5和 0 .1μg·ml-1。结论 方法简便 ,结果准确。

戊己丸不同配伍方对结肠平滑肌细胞5-HT3,4受体及下游信号传导通路主要元件的影响

目的:观察戊己丸不同配伍方对平滑肌细胞5-羟色胺3,4受体及其下游信号通路的影响。方法:采用Bitar的方法分离培养大鼠结肠平滑肌细胞,α-actin免疫组化鉴定。应用免疫荧光法和钙离子探针检测5-羟色胺3,4受体表达及Ca2+浓度;应用ELISA试剂盒检测cAMP,PKA的浓度。结果:1号方和2号方对大鼠结肠平滑肌细胞5-羟色胺3,4受体的表达及Ca2+浓度均具有抑制作用(P<0.05);可显著下调平滑肌细胞的cAMP和PKA水平(P<0.05);2号方作用效果优于1号方。结论:戊己丸可抑制5-羟色胺3,4受体表达及下调Ca2+,cAMP,PKA水平。

戊己丸水煎液对幽门螺旋杆菌感染小鼠体内NO含量的影响

目的:观察戊己丸水煎液对C57BL/6小鼠感染幽门螺旋杆菌动物模型血清中NO含量的影响。方法:在复制C57BL/6小鼠幽门螺旋杆菌感染模型的基础上,分为戊己丸水煎液高、中、低剂量组、心胃止痛胶囊组和克拉霉素组以及正常对照组和模型对照组,测定各组小鼠血清一氧化氮含量。结果:模型组血清NO较正常组均显著增加(P<0.05)。与模型组相比较,各治疗组血清NO均有所下降。其中戊己丸水煎液高剂量组、中剂量组、克拉霉素组与正常组没有差异。结论:戊己丸水煎液可明显降低幽门螺旋杆菌(Hp)感染小鼠血清中NO含量。

戊己丸与超微戊己丸药动学血样处理方法比较研究

目的比较三种大鼠血样的处理方法,找出最佳方法。方法采用高效液相色谱法测定,色谱柱:C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液(30:70),进样体积20μl,检测波长:345nm。结果三种处理方法中方法三的回收率达到92.93%,RSD为1.39%(n=5)。结论三种方法中方法三最好,盐酸小檗碱的回收率达90%以上。