低分子牛骨多肽制备及对大鼠成骨细胞的影响

目的从牛骨制备低分子多肽，并观察其对体外培养新生大鼠的戍骨细胞增殖、碱性磷酸酶（ALP）活性和Ⅰ型胶原mRNA表达的影响。方法采用冷冻离心、等电点沉淀方法去除骨胶原，超滤法得到相对分子质量（Mr）10000以下的牛骨多肽，经Sephadex G-10脱盐，浓缩后用Trieine—SDS-PAGE电泳对Mr进行检测。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法测定牛骨多肽对戍骨细胞增殖的影响，ALP检测试剂盒测定细胞的ALP活性，RT—PCR法检测细胞中Ⅰ型胶原mRNA表达。结果建立了牛骨多肽的制备方法。低浓度牛骨多肽组与实验对照组相比对成骨细胞的增殖不显著（P〉0．05），高浓度具有显著的增殖作用（P〈0．05），并呈现出剂量依赖性；中、高浓度（50～400μg／mL）牛骨多肽组可提高戍骨细胞ALP的活性（P〈0.05），低浓度组（10μg／mL）提高ALP的活性不显著（P〉0．05）；牛骨多肽能提高Ⅰ型胶原mRNA表达。结论牛骨多肽的制备工艺简单，适合规模化生产；牛骨多肽能促进戍骨细胞增殖、ALP活性和Ⅰ型胶原mRNA的表达。