成人骨髓间质干细胞定向诱导为脂肪细胞的研究

目的 :体外定向诱导成人骨髓间质干细胞 (MSC)分化为脂肪细胞。方法 :采用Ficoll-Paque淋巴细胞分离液 (1 0 77× 10 3 g/L)离心分离成人MSC ,体外扩增 ,流式细胞仪检测MSC表面抗原表达 ,地塞米松、IBMX、胰岛素、indomethacin定向诱导MSC分化为脂肪细胞。油红O检测中性脂肪 ,光镜下细胞计数。结果 :成人骨髓间质干细胞在体外扩增 5代可获得 1× 10 8个细胞。流式细胞仪检测结果显示CD2 9、CD44、CD90、CD10 5、CD16 6表达阳性 ,CD14、CD34、CD45、CD11a为阴性。诱导 48h后 ,细胞内有脂滴出现 ,随着时间延长 ,脂滴逐渐增加并融合为脂泡。细胞由梭形转变为圆形或多角性。细胞计数结果显示 85 %以上细胞转变为脂肪细胞。结论 :成人骨髓间质干细胞在体外可以分化为脂肪细胞。

成人骨髓间充质干细胞体外定向诱导分化为胰岛样细胞团的研究

体外扩增和定向诱导成人骨髓间充质干细胞(MSC)向胰岛样细胞分化,从正常成人骨髓中分离MSC,在含10％胎牛血清的αMEM培养基中对其进行纯化和扩增,用bFGF,EGF等因子诱导MSC向nestin阳性的祖细胞(NIP)分化;用高糖无血清培养基和β细胞调节素、尼克酰胺等诱导NIP向胰岛样细胞分化,用RT-PCR法检测诱导前后nestin,ngn3,IPF-1,胰岛素,胰高血糖素基因的表达;双硫腙染色鉴定胰岛样的细胞团;免疫组织化学法检测诱导前后nestin,胰岛素,胰高血糖素,生长抑素蛋白的表达;放射免疫分析法检测诱导前后细胞分泌胰岛素情况。结果表明MSC经第一阶段的诱导后可分化成NIP,继续诱导6d后变圆的细胞逐渐增多,并聚集成团,双硫腙染色阳性,免疫组化实验证明经两阶段诱导后的细胞表达胰岛素、胰高血糖素、生长抑素等内分泌激素,放免分析结果表明诱导的胰岛样细胞团可以分泌胰岛素,糖反应性较弱。以上结果表明成人骨髓间充质干细胞在体外可以被诱导分化为胰岛样细胞团,这将为解决糖尿病细胞治疗所面临的供者细胞不足、移植排斥反应等问题提供一个新的方案。

人中期胚胎、新生儿脐血及成人骨髓间质干细胞基本生物学特性的比较

【目的】比较人中期胚胎脐血、新生儿脐血以及成人骨髓3种来源的间质干细胞(MSC)生物学特性,为临床治疗选择细胞来源提供实验依据。【方法】采用L-DMEM培养液分离培养3种来源MSC,流式细胞仪进行细胞表型、细胞周期、细胞凋亡分析,成骨、成脂诱导液分别诱导细胞分化,携带绿色荧光蛋白报告基因的重组腺病毒转染MSC,荧光显微镜和流式细胞仪检测3种细胞表达外源基因特性。【结果】3种来源标本中均可分离培养出MSC,但新生儿脐血中阳性获得率最低,为29.17%(7/24);3者细胞形态、表面抗原表达、体外分化特性相似,但2种脐血MSC原代培养时间长达30d左右,处于G0/G1期细胞百分比大于成人骨髓;3者均能转染表达外源基因,但胚胎脐血MSC中表达率最高,达(56.32±3.28)%。【结论】胚胎、新生儿脐血以及成人骨髓中均可分离培养出MSC;中期胚胎脐血MSC适用于胎儿自体宫内基因转移/治疗(IUGT)靶细胞;成人骨髓MSC在组织工程、细胞治疗、基因治疗等领域具有广阔的临床应用前景;而新生儿脐血MSC的临床应用有待进一步研究。

成人骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞及与凋亡的关系

【目的】探讨体外诱导成人骨髓间质干细胞(humanmesenchymalstemcells,hMSC)向神经元样细胞分化过程中分化与凋亡的关系,为进一步研究延长神经元样细胞的存活时间提供基础。【方法】从成人骨髓分离MSC,培养扩增。以β-巯基乙醇和参芪液诱导分化,于诱导后1、3、5h分别进行免疫组化鉴定神经元烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,计数神经元样细胞,计算分化率。采用TUNEL方法分别检测诱导后1、3、5h的细胞凋亡率,并分析两者是否相关。【结果】hMSC经β-巯基乙醇和参芪液诱导后,可见神经元样细胞。免疫组化显示诱导出的神经元样细胞表达NSE、NF阳性、GFAP阴性。神经分化的定量分析显示诱导后1、3、5h,经β-巯基乙醇诱导NSE、NFH阳性细胞分别为43.5%±1.8%,59.3%±2.2%,76.5%±2.3%和42.6%±1.9%,55.1%±2.1%,73.5%±2.3%。参芪液诱导NSE、NFH阳性细胞分别为49.5%±1.9%,62.3%±2.1%,79.5%±2.5%和45.6%±1.9%,59.1%±2.1%,76.5%±2.3%。经两种诱导剂诱导后1、3、5h,TUNEL检测两者的凋亡率分别为1.5%,6.5%,19.5%和0.5%,2.3%,12.5%。【结论】β-巯基乙醇和参芪液均可在体外诱导hMSC分化为神经元样细胞。hMSC向神经元样细胞分化过程中也发生凋亡,分化率与凋亡率相关。

成人骨髓基质干细胞体外诱导为许旺细胞的实验研究

目的 探索成人骨髓基质干细胞 (h MSCs)诱导分化为许旺细胞 (Schwann cell,SC)的可行性 ,奠定组织工程学治疗周围神经疾病的理论基础。方法 采取 Ficoll-paque梯度离心骨髓 ,分离 h MSCs,经过纯化、扩增培养 ,并证实其细胞来源 ;之后采用 BHA、RA及 Forskolin、b FGF、PDGF、HRG顺次诱导、培养 ,经免疫组化鉴定S-10 0、GFAP的表达状况。结果 经过预诱导剂及诱导剂的先后作用 ,h MSCs的细胞形态发生明显改变 ,胞体呈长梭形 ,两极有丝状突起形成 ,经免疫组化的证实 ,S-10 0、GFAP阳性表达率分别为 (75%± 6.2 % )和 (67%± 4.5% )。结论 h MSCs经诱导后 ,细胞形态、体积大小均发生明显改变 ,S-10 0、GFAP染色呈阳性 ,符合许旺细胞形态和功能特征 ,证实 h MSCs可以作为种子细胞转化为许旺细胞 。

成人骨髓基质干细胞体外诱导成骨细胞

目的 建立成人骨髓基质干细胞(BMSCs)分离、扩增以及诱导和分化为成骨细胞的体外培养方法,为骨组织工程选择理想的种子细胞来源。方法 抽取健康成人骨髓组织,用 Percoll分离液分离出骨髓中的单个核细胞,在含体积分数为 10%小牛血清的高糖 DMEM培养液中,置于37℃、含体积分数为5%的CO2 湿化空气孵箱中培养,通过传代培养扩增BMSCs,传三代时改用含地塞米松、β 甘油磷酸和维生素C的条件培养基培养,用倒置显微镜、HE染色观察增殖和分化情况,并测定碱性磷酸酶活性和钙结节形成能力。结果 体外培养的成骨细胞生长良好,表现出与典型的成骨细胞相似的形态特征和生物学特性。结论 所建立的成人 BMSCs分离、扩增以及诱导和分化为成骨细胞的体外培养方法稳定和实用,可作为骨组织工程种子细胞来源的常规方法之一。

碱性成纤维细胞生长因子等体外诱导成人骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的研究

目的 成人骨髓间充质干细胞 (h MSCs)体外定向诱导分化为神经元样细胞。方法 采用 Percoll分离液离心分离 h MSCs,体外扩增 ,分别采用含碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)和 2 -巯基乙醇 (2 - ME)等无血清DMEM诱导 h MSCs分化为神经元。免疫组化鉴定神经元烯醇化酶 (NSE)、神经丝蛋白 (NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。结果 h MSCs在体外扩增传至 5代后 ,流式细胞仪显示 99.5 % ,97.8% ,98.8% h MSCs表面抗原 CD2 9、CD4 4、CD90 表达阳性。接种到 12孔板 ,3d后加入 b FGF和 2 - ME联合或 2 - ME单种诱导剂诱导后 ,h MSCs胞体收缩 ,突起伸出 ;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞 NSE、 NF表达阳性 ,GFAP阴性。

两种体外分离成人骨髓间充质干细胞方法的比较

目的:目前尚缺乏标准的骨髓间充质干细胞分离方法,虽然Percoll密度梯度离心法被认为是较经典的方法,但该方法操作较复杂。比较全骨髓培养法与常用的Percoll密度梯度离心法分离成人骨髓间充质干细胞的差异,以寻找一种简便、经济、实用的人骨髓间充质干细胞体外分离方法。方法:实验于2006-09/2007-06在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成。实验材料:行自体干细胞移植治疗的糖尿病患者骨髓由青岛大学医学院附属医院内分泌科提供,患者对实验知情同意,并经医院伦理委员会批准。实验方法:采用全骨髓培养法与Percoll密度梯度离心法从成人骨髓中分离骨髓间充质干细胞,比较两种方法所获得的贴壁细胞克隆数、细胞形态、细胞表面标志及向脂肪细胞的分化情况。结果:①全骨髓培养法获得的贴壁细胞克隆数明显多于Percoll密度梯度离心法(P<0.05)。两种方法获得的人骨髓间充质干细胞形态无明显差异,均为长梭形,克隆样生长。②免疫荧光显示,全骨髓培养法分离培养的第3代骨髓间充质干细胞CD44阳性表达率和CD34阴性表达率均略低于Percoll密度梯度离心法,但两者之间的差异无统计学意义(t=2.639,P<0.01)。③两种方法获得的第3代骨髓间充质干细胞经地塞米松、胰岛素诱导后均可分化脂肪细胞。结论:与传统的Percoll密度梯度离心法比较,全骨髓培养法获得的骨髓间充质干细胞贴壁较快,传代时间略早,细胞数量多。

胎儿和成人骨髓间充质干细胞体外造血支持能力的比较(英文)

胎儿出生以后,造血干细胞(HSC)才从胎儿的肝脏和脾脏转移到骨髓,这一过程可能由不同的造血微环境中的信号分子所介导。间充质干细胞(MSC)是骨髓微环境中间质细胞如成骨细胞、内皮细胞的前体祖细胞。研究者推测,胎儿出生前的骨髓可能并不特别适合HSC生长。然而,该假说尚缺乏直接的证据支持。本研究通过对胎儿和成人骨髓MSC的造血支持能力进行比较,拟为此提供证据。成人骨髓MSC来源于3位健康供者,胎儿骨髓MSC来源于孕19-20周流产的胎儿。MSC辐照后与CD34+一起进行长期培养启动细胞分析,计数克隆形成细胞的数量,流式分析培养后CD34+的表型变化。RT-PCR分析两种MSC中细胞因子的表达。结果显示,成人骨髓MSC比胎儿骨髓MSC具有更强的造血支持能力,两者都促进CD34+向髓系细胞分化,两者之间细胞因子的表达存在差异。结论:与胎儿骨髓MSC相比,成人骨髓MSC在某些治疗,尤其是促进造血恢复方面具有更广泛的应用前景。

成人骨髓间充质干细胞向成骨细胞定向诱导分化的实验研究

目的研究体外培养的成人骨髓间充质干细胞(MSC)在特定的条件下定向诱导分化为成骨细胞,探讨其作为骨组织工程种子细胞的可行性和应用价值.方法抽取健康成年志愿者骨髓,在含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基中采用全骨髓培养法,培养传代后改用含地塞米松(1×10-8mol/L)、β-甘油磷酸钠(10mmol/L)和维生素C(50mg/L)的条件培养基培养,在相差显微镜和电镜下观察细胞形态,免疫组化检测Ⅰ型胶原,Gomori钙钴法进行碱性磷酸酶(AP)染色、vonKossa法进行钙结节染色,同时测定细胞内AP(碱性磷酸酶)含量变化,并进行统计学分析.结果原代和传代培养的细胞具有活跃的增殖能力,诱导培养2～3周后,透射电镜下观察见大量扩张的粗面内质网、高尔基体和线粒体,细胞核较为幼稚.I型胶原染色、AP及钙结节染色等均为强阳性;AP活性明显增强(P＜0.05).结论MSC取材安全方便,易于诱导分化为成骨细胞,有望成为理想的骨组织工程种子细胞来源,本实验方法可作为骨组织工程种子细胞培养的常规方法之一.

成人骨髓间充质干细胞体外培养扩增的初步研究

目的:建立成人骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)体外培养和扩增的方法,探讨其生物学特性,建立稳定的MSCs体外培养扩增体系。方法:取正常成人骨髓,用含10%新生牛血清的LG-DMEM培养液培养、扩增后,进行倒置显微镜观察,测定生长曲线,流式细胞仪行细胞表面抗原检测。结果:培养扩增获取的成人骨髓MSCs形态均一,增殖能力强。所获得细胞CD44表达阳性,CD19、CD15、CD45、CD34、CD38、CD4、CD8表达阴性。结论:所建立的分离和培养方法可获取骨髓黏附细胞中一组独特的细胞群,具有MSCs的生物学特性。

成人骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞前后基因表达的研究

目的探讨成人骨髓间质干细胞(MSC)分化为神经元样细胞前后基因表达的变化。方法从成人骨髓分离MSC,培养扩增。用参芪液诱导hMSC分化为神经元,并用免疫组化法检测神经元烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达来鉴定是否为神经元样细胞。采用半定量RTPCR方法检测10个基因(包括内胚层基因Ceruloplasmin;中胚层基因SM22;外胚层基因Amyloidprecursorprotein、syntaxin;生殖系基因protamine;神经元特异性基因NeuroD、NF、NSE、GFAP、Tau)在诱导分化前后的变化。结果hMSC经参芪液诱导后,可见神经元样细胞。免疫组化结果显示诱导出的神经元样细胞表达NSE、NF阳性,GFAP阴性。hMSC在分化前表达内胚层、中胚层、外胚层和生殖系基因,随着分化时间的延长,生殖系基因不表达,内胚层和中胚层基因表达减弱,外胚层基因表达基本不变。而在分化过程中外胚层基因和神经元特异性标记基因表达明显增强。结论hMSC分化为神经元样细胞的过程并不是简单的神经特异性基因的“开”和“关”,而是与神经细胞分化成熟过程中相关基因表达的量相关。

成人骨髓间充质干细胞的体外分离培养和生物学特性

目的:建立一种成人骨髓间充质干细胞体外分离、培养和扩增的方法,并探讨其部分生物学活性及向脂肪细胞诱导分化的方法,并以此鉴定所获细胞。方法:采用1.073g/ml的Percoll分离液分离成人骨髓间充质干细胞。接种于纤维连接蛋白包被,含有表皮生长因子和血小板原性生长因子BB的2%胎牛血清培养液中,并利用其贴壁性进行纯化;观察其形态学变化及超微结构,流式细胞仪检测其表面标记物;采用10%胎牛血清和尼克酰胺诱导其向脂肪细胞的分化。结果:原代和传代培养均保持较强的增殖能力,超微结构显示了干细胞的幼稚特性,流式细胞仪检测示CD34、CD45、CD19、组织相容性抗原-DR阴性,CD44、CD10、CD29、CD13阳性。体外能够分化成为脂肪细胞,油红O染色阳性。结论:采用该方法骨髓间充质干细胞生长稳定,扩增较快;一定条件下能够定向分化成为脂肪细胞;我们所获得的细胞具有间充质干细胞的特性。

成人骨髓间充质干细胞体外培养及诱导分化的研究进展

目的探讨成人骨髓间充质干细胞体外培养及诱导分化的研究现状及发展前景。方法查阅国内外公开发表的相关文献,进行分析、归纳、总结。结果成人骨髓间充质干细胞可在体外大量扩增,并诱导分化为骨细胞、脂肪细胞、心肌细胞等多种组织细胞。结论成人骨髓间充质干细胞具有成为种子细胞的潜力,在细胞移植方面有广阔前景。

成人骨髓增生异常综合征诊断和治疗指南

骨髓增生异常综合征(MDS)代表一组造血异质性异常的疾病,多发于老年人(中位年龄69岁).总体发病率约4/10万,但在70岁以上人群中发病率上升至30/10万以上.造成MDS血液学异常的病理过程是:1.过强的细胞凋亡导致无效造血及外周血细胞减少.2.转变成急性髓系白血病(AML).虽然这些病理过程之间的确切关系尚不明确,但了解其中关系对设计针对其中之一或二者都包括的新的治疗策略具有重要意义.

成人骨髓与其他组织中多能Oct-4t干细胞的胚胎起源假说

成人组织中包含大量的干细胞可以用来表达早期发育标志物(如阶段特异性胚胎抗原和转录因子,例如Oct-4和Nanog)。这些标记典型存在于胚胎干细胞,外胚层干细胞和原始生殖细胞。此类干细胞在成人组织的存在,支持了这样的观点,即成人组织含有一定数量的多能干细胞,于胚胎发育早期的原肠胚形成过程中沉积。在这篇综述中,我们将讨论这些材料。

美国科学家利用成人骨髓干细胞构建组织工程血管

美国布法罗大学工程和应用科学学院成功用成人骨髓干细胞完成构建组织工程血管，有望成为冠状动脉搭桥手术或其他血管移植手术的血管来源。相关研究报道发表在新出版的《心血管研究》杂志上。该研究展示了利用患者干细胞最终培养出组织工程血管的潜力，这将有望取代现在常用的利用患者静脉移植方式进行冠状动脉搭桥手术。

成人骨髓含有干细胞

据海外媒体报道,美国明尼苏达大学干细胞研究所所长凯瑟琳日前说,成人骨髓含有能长成许多人体组织的干细胞。 凯瑟琳说:“我们在人体和鼠类细胞的骨髓中找到有能力在实验室中成长的干细胞。”

3D设计与模型打印在成人骨髓腔输液教学中的作用研究

3D设计与模型打印在成人骨髓腔输液教学中的作用研究课题。方法 对参与骨髓腔输液教学轮转实习护士进行带教教学,对照组接受传统的视频教学+穿刺针用法教学;观察组在对照组的基础上联合3D打印教具教学,对比教学结果。结果 较对照组,观察组实习护士的学习满意率更高且自身的实践能力、理论能力、风险应对和综合功能评分更高,护士出现的学习问题更少。对比(p<0.05),有统计学意义。结论 3D设计与模型打印可以提升成人骨髓腔输液教学轮转实习护士教学效果,可推广。