扶正化瘀方成分配伍对CCl_(4)诱导小鼠肝纤维化的治疗作用

目的探讨扶正化瘀方成分配伍(PA方)抗CCl_(4)诱导的小鼠肝纤维化的治疗作用。方法采用CCl_(4)诱导的6周小鼠肝纤维化模型,运用均匀设计法以肝组织Hyp水平和天狼星红染色胶原面积为评价指标,获得PA方最佳配比,再对PA方作5个剂量水平的量-效实验,明确PA方最佳剂量和配伍效应。结果均匀设计实验表明,与模型组比较,PA5组小鼠血清ALT、AST活性降低(P<0.01),肝组织炎性损伤减轻,肝组织Hyp水平和天狼星红染色胶原面积降低(P<0.01)。量-效实验表明,PA方量-效关系呈非线性,与模型组比较,1/4 PA组小鼠肝组织炎性损伤减轻,肝组织Hyp水平和天狼星红染色胶原面积降低(P<0.01)。当PA方剂量高于1/4 PA时,PA方量-效关系在一定剂量范围内呈减弱态势。配伍效应实验表明,与模型组比较,PA方组小鼠肝组织Hyp水平和天狼星红染色胶原面积降低(P<0.01),并优于其成分丹酚酸B和苦杏仁苷单用(P<0.05);PA方可降低模型小鼠肝组织α-SMA、Desmin、Col-Ⅰ的表达(P<0.05),抑制TGF-β1/Smad3信号通路活性(P<0.05)。结论PA方具有显著的抗CCl_(4)诱导的小鼠肝纤维化作用,量-效关系呈非线性,其部分作用机制可能是抑制TGF-β1/Smad3信号通路活性,抑制HSCs细胞的活化。

黄芪和三七的主要有效成分配伍对脑缺血/再灌注小鼠NF-κB信号通路及炎性因子表达的影响

目的从炎症反应探讨黄芪和三七主要有效成分配伍抗脑缺血/再灌注损伤的机制。方法将C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、黄芪甲苷(ASTⅣ)组、人参皂苷Rg1(Rg1)组、人参皂苷Rb1(Rb1)组、三七皂苷R1(R1)组、4种有效成分配伍组、ASTⅣ+Rg1组、ASTⅣ+Rb1组、ASTⅣ+R1组及阳性对照药依达拉奉组。预先给药3 d,末次给药1 h后,结扎双侧颈总动脉,造成脑缺血20 min,再灌注24h。RT-PCR法测定TNF-α、IL-1β、ICAM-1 mRNA表达,Western blot法测定脑组织p-IκBα蛋白及胞质、胞核NF-κB蛋白表达,计算NF-κB核转位率。结果 1脑缺血/再灌注后,脑组织TNF-α、IL-1β、ICAM-1 mRNA表达增加。ASTⅣ可降低TNF-αmRNA表达,Rg1可降低ICAM-1 mRNA的表达,R1能同时下调TNF-α、ICAM-1 mRNA的表达。ASTⅣ与Rg1、Rb1、R1配伍对TNF-α、IL-1β、ICAM-1 mRNA的表达均有不同程度的抑制作用,且以4种有效成分配伍组和ASTⅣ+R1组对炎性细胞因子表达的抑制效应更加明显。2脑缺血/再灌注后,脑组织p-IκBα蛋白表达明显增加,胞质NF-κB蛋白表达明显减少,而胞核NF-κB蛋白表达增加,NF-κB核转位率升高。ASTⅣ、Rg1、R1及各有效成分配伍均能抑制IκB磷酸化,减少NF-κB核转位的发生,且配伍组的效应大于各有效成分单用,4种有效成分配伍组的效应大于ASTⅣ+Rb1和ASTⅣ+Rg1组。结论黄芪和三七的主要有效成分配伍能通过抑制缺血/再灌注后脑组织NF-κB信号通路的激活,减少炎性细胞因子的生成,从而减轻脑缺血后脑组织的继发性炎症反应,发挥对脑组织的保护作用。

中药及其成分配伍组方的研究方法探析

探讨中药及成分配伍组方的研究方法。本次就传统模式研究与现代有效成(组分)配伍组方研究展开探讨,中药配伍已由传统模式向现代模式转变,建立多成(组)分配全模式,并对组织优化进行研究,可将中药配伍组方上升到组分层次,获得更为明确的作用靶点,更好的应用于临床。

桃红四物汤组方药物主要有效单体成分配伍对早期骨折愈合的影响

目的研究桃红四物汤中各药物主要有效单体成分配伍对大鼠早期骨折愈合的影响及其机制。方法采用骨锯截断股骨干中段建立骨折模型,将大鼠随机分为5组:空白组(不做处理灌胃等量生理盐水)、假手术组(只切开不截断,灌胃等量生理盐水)、模型组(造模,灌胃等量生理盐水)、原方水提组(造模,灌胃原方水煎剂)、单体成分组(造模,灌胃原方主要单体成分组方)。于造模后的第4、7、10天3个时间点:卡尺测量大鼠肢体肿胀度;ELISA检测大鼠血清中VEGF的浓度;Micro-CT扫描检测大鼠骨折断端BV和BV/TV%;HE染色观察大鼠骨折早期断端病理形态变化。结果与空白组比较,模型组肢体肿胀度、VEGF浓度均明显增高,组织病理学结构存在明显差异。术后第4、7、10天与模型组比较,单体成分组与原方水提组肢体肿胀度明显下降(P<0.05),VEGF浓度、BV、BV/TV%明显升高(P<0.05)。结论(1)桃红四物汤各药物主要有效单体成分配伍能有效缩短骨折愈合时间,促进大鼠早期骨折愈合。(2)桃红四物汤各药物有效单体成分配伍与原方水煎剂对早期骨折的治疗效果基本相同。

“病证方剂分析——吸收/代谢方剂原成分配伍”研究思路

方剂药效物质基础是中医药学科发展急待解决的关键问题。本文提出"病证方剂分析——吸收/代谢方剂原成分配伍"研究新思路。首先进行"病证方剂分析",从特定病证机体的药物血清中分析方剂来源成分及代谢产物。再进行"吸收/代谢方剂原成分配伍"研究,应用均匀设计,找出各成分对方剂疗效的贡献度,剔除无关及作用方向相反成分,找出药效最大时最佳成分配伍方剂。该思路在确保新方剂有效性前提下,既能保留配伍的优势与特色,又能明确药效物质;既能得到药效成分清楚的新方剂,又能定量阐释各成分间配伍关系。

银丹心脑通及主要成分配伍对心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的:研究银丹心脑通及其主要成分配伍对心肌缺血再灌注损伤的保护性作用。方法:采用全心停灌再灌注的方法建立大鼠离体心脏缺血再灌注损伤模型。SD大鼠分为空白组(control),模型组(model),银丹心脑通全方组(YDXNTC),银杏提取物组(GBE),丹参醇提物组(SM-E),丹参水提物组(SM-H),混合物组(灯盏细辛,三七,山楂,绞股蓝,大蒜,天然冰片;MC),银杏+丹参醇提物配伍组,银杏+丹参水提物配伍组,丹参醇提物+丹参水提物配伍组。离体心脏平衡后,空白组正常灌流70 min;模型组正常灌流10 min,停灌30 min,复灌30 min;给药组以含有相应药物的灌流液正常灌流10 min,余同模型组。实验过程中全程记录心电图,观察室性心动过速/室颤(VT/VF)发生率,心脏停跳时间,复跳时间,正常律动时间及心率失常持续时间。复灌结束后,将心肌匀浆,测定SOD活力,MDA,LDH,CK-MB和心肌钙蛋白I(cTnI)释放量。结果:①银丹心脑通全方组,丹参醇提物,丹参水提物,混合物能够延长心脏停跳时间,缩短复跳时间、正常律动时间及心率失常持续时间,但对VT/VF发生的发生没有明显作用。银杏提取物对减少复跳时间、正常律动时间及心率失常持续时间有较好作用,同时能够改善VT/VF的发生。除银杏+丹参水提配伍对心脏停跳时间无明显影响以外,主要成分配伍对心脏停跳时间,复跳时间,正常律动时间及心率失常持续时间均有良好作用,且银杏+丹参醇提对VT/VF发生也有明显作用。②银丹心脑通全方组,银杏提取物,丹参醇提物,银杏+丹参醇提物配伍组,丹参醇提物+丹参水提物配伍组能够提高心肌SOD活力,降低MDA含量;丹参水提物,混合物,银杏+丹参水提物配伍组仅使MDA含量降低。③银丹心脑通全方组和丹参水提物减少了LDH的释放。银杏提取物,丹参醇提物,丹参水提物及银杏+丹参醇提物配伍降低了CK-MB含量。④银杏+丹参醇提物配伍抑制了cTnI的释放。结论:银丹心脑通、主要成分及主要成分配伍对心肌缺血再灌注损伤具有一定的保护作用,其作用机制可能与抗氧化,减轻钙超载有关。

丹红有效成分配伍对缺氧损伤脑微血管内皮细胞的保护作用

为研究丹红有效成分配伍对缺氧致原代培养的乳鼠脑微血管内皮细胞(r BMECs)损伤的保护作用。原代培养乳鼠脑微血管内皮细胞并对细胞进行缺氧4 h损伤模型的同时,丹红有效成分(原儿茶醛、丹酚酸B、羟基红花黄色素A、丹参素)配伍作用于r BMECs,MTT确定细胞非毒性剂量,采用比色法测定LDH,SOD活性和MDA水平,RT-PCR法检测ICAM-1,MMP-9,P53 mRNA表达,流式细胞术检测r BMECs细胞周期及早期凋亡的变化。丹红有效成分配伍1,2,3,7,8,9组方显著抑制缺氧细胞上清液中LDH的增加;1,2,4,6,7组方显著增强缺氧细胞内SOD活性;1,2,3,8,9组方显著降低MDA水平;1,2,6,7,9组方显著抑制缺氧诱导的r BMECs早期凋亡,缺氧后细胞P53 mRNA表达明显上调的后果是能引起G1期阻滞和促进细胞凋亡,证实P53基因的调节功能体现在G1期校正点的监测;1,2,5,6,7,8,9组方显著下调P53 mRNA表达;1,4,7,8,9组方显著下调ICAM-1 mRNA表达;1,3,6,9组方显著下调MMP-9 mRNA表达。丹红有效成分配伍对缺氧所致原代培养的r BMECs损伤具有明显的保护作用,其机制与增强细胞抗氧化能力,抑制炎症反应和细胞凋亡有关。为研究方剂配伍规律提供思路,指导临床用药。

四物汤有效成分配伍组方对电离辐射所致氧化损伤的防护作用

目的观察四物汤有效成分配伍组方对电离辐射所致人淋巴母细胞AHH-1细胞氧化损伤的辐射防护作用，并初步探讨其作用机制。方法4．0Gy 60Coγ射线单次照射AHH-1细胞，造成电离辐射损伤。观察不同浓度的四物汤有效成分配伍组方（果糖、阿魏酸、芍药苷、川芎嗪质量比为9008：53：721：267）对于电离辐射损伤的AHH-1细胞活力、凋亡情况、活性氧（ROS）水平的影响，以及对pGL4-ARE报告基因载体的激活作用。结果四物汤有效成分配伍组方在10mg／L的浓度下抗辐射效果最为显著，可以减缓受照AHH-1细胞活力下降（t=-8．152，P〈0．05），缓解早期细胞凋亡（t=12．777，P〈0．05），降低ROS水平（t=3．465，P〈0．05），诱导报告基因pGIA．ARE荧光表达倍数提高（t=-19．752，P〈0．05）。结论四物汤有效成分配伍组方具有体外抗辐射活性，可能通过激活Nrf2-Keap1—ARE抗氧化通路、降低辐射所致氧化损伤，从而发挥辐射防护作用。

基于Nrf2/HO-1通路的黄芪-灯盏细辛成分配伍对缺氧缺糖PC12细胞氧化损伤研究

目的:探索黄芪与灯盏细辛中有效成分黄芪甲苷、绿原酸、灯盏乙素最佳配比组合及其对缺糖缺氧PC12细胞氧化损伤的保护作用。方法:采用PC12细胞株、无糖DMEM培养基和氯化钴构建慢性脑缺血细胞模型。采用均匀设计法筛选黄芪甲苷、绿原酸、灯盏乙素最优配比组合,并采用流式细胞术检测活性氧(ROS)含量,罗丹明123检测线粒体膜电位,WB技术检测Nrf2、HO-1蛋白表达,评价最优组合的作用机制。结果:0.4 mmol/L的氯化钴为PC12缺糖缺氧造模条件。3个单体最优组合为黄芪甲苷∶绿原酸∶灯盏乙素=10∶75∶40时显著提高PC12细胞存活率(P<0.01);与模型对照组比,最优组合的活性氧含量显著降低(P<0.01),线粒体膜电位显著升高(P<0.01),Nrf2和HO-1蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论:黄芪甲苷∶绿原酸∶灯盏乙素=10∶75∶40是最优组合,该组合通过降低细胞内活性氧含量并稳定线粒体膜电位促进缺血缺氧PC12细胞存活,上调Nrf2、HO-1蛋白表达,对慢性脑缺血性氧化损伤产生保护作用。

从成分配伍和睾丸毒性探究“金钱草杀雷公藤毒”的相杀减毒机制

目的:基于成分配伍和睾丸毒性评价“金钱草杀雷公藤毒”的相杀减毒作用及机制。方法:基于成分配伍理念,以雷公藤的主要毒性成分雷公藤甲素(TP,0.4 mg/kg)以及金钱草的主要活性成分绿原酸(CA,20 mg/kg)、芦丁(Rut,12 mg/kg)、槲皮素(Que,10 mg/kg)为研究对象,分析比较TP与CA、Rut、Que、CARut、CA-Que、Rut-Que、CA-Rut-Que配伍前后对雄性小鼠睾丸毒性敏感指标血清睾酮和睾丸组织病理的影响,并采用蛋白免疫印迹法等检测p38 MAPK/ERK1/2/Nrf2/HO-1信号通路的关键分子。结果:TP灌胃14 d后显著降低小鼠睾丸系数和血清睾酮水平,使睾丸生精细胞大量坏死和核碎裂溶解,显著上调p38 MAPK并下调ERK1/2/Nrf2/HO-1通路,降低抗氧化物如超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、还原型谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽转移酶(GST)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的水平(P<0.01),升高过氧化物丙二醛(MDA)的水平(P<0.01)。与TP单用比较,配伍CA-Rut、CA-Que、Rut-Que、CA-Rut-Que后不同程度上削弱了TP睾丸毒性,并不同程度逆转了p38 MAPK/ERK1/2/Nrf2/HO-1信号通路蛋白分子、抗氧化和过氧化物水平的异常(P<0.01,P<0.05)。结论:金钱草主要活性成分CA、Rut、Que的互相组合对雷公藤主要毒性成分TP诱导的睾丸毒性具有不同程度的相杀减毒作用,其中三者组合后的减毒作用最强;“金钱草杀雷公藤毒”的相杀减毒机制可能与成分配伍后调控p38 MAPK/ERK1/2/Nrf2/HO-1信号通路从而增强睾丸的抗氧化防御、减轻细胞坏死和核碎裂溶解有关。

薏苡附子败酱散方抗肝癌细胞SMMC-7721有效组分配伍研究

目的通过均匀设计方法筛选出薏苡附子败酱散方有效组分抗肝癌细胞最佳配伍比例,并对其各有效组分及最佳配伍进行体外初步作用机制研究。方法采用MTT法测定各有效组分对肝癌细胞SMMC-7721的IC_(50)值,通过U_8(8~5)均匀设计对有效组分配伍进行优化,确定最佳配伍比例;同时测定最佳配伍作用于人正常肝细胞L-02和肝癌细胞SMMC-7721的IC_(50)值;运用流式细胞仪将最佳配伍组及有效组分单用组分别作用于肝癌细胞SMMC-7721,测定细胞周期与凋亡,并用Flowjo及Modifit软件进行分析。结果薏苡附子败酱散方有效组分最佳配伍比例为:败酱草总皂苷-薏苡仁挥发油-败酱草总黄酮-附子总生物碱=0.40∶2.06∶1.06∶1.70。最佳配伍对肝癌细胞SMMC-7721的IC_(50)值比对人正常肝细胞L-02显著降低;与空白对照组比较,各组分单用组及最佳配伍组作用于肝癌细胞SMMC-7721后,细胞凋亡率均增加;细胞分裂周期G_0/G_1期、S期比例升高,G_2/M期比例降低。最佳配伍组作用优于各有效组分单用组。结论通过本实验筛选出的薏苡附子败酱散方有效成分最佳配伍对肝癌细胞SMMC-7721有明显的增殖抑制作用,为该方的进一步研发奠定了基础。

采用正交t值法优选治疗急性痛风性关节炎的中药有效成分复方配伍

目的针对大鼠急性痛风性关节炎（AGA）模型筛选最优抗炎配伍植物中药有效成分组合复方。方法将SD雄性大鼠65只随机分成12组,并设置空白对照组,每组5只。按照正交t值表分配白芍总苷（TGP）、三七总皂苷（PNS）、青藤碱（SN）、雷公藤多苷（TG）及人参皂苷（GS）5种中药有效成分配伍组合,各组每只1.5 ml/d等体积灌胃给药。给药第6天第1~12组大鼠左踝关节腔注射PBS配制的微晶尿酸钠结晶（25 mg/ml）100μl进行造模,造模前及造模后8 h测量踝关节周径计算其肿胀度。结果模型组与对照组相比造模8 h后肿胀度均有显著增加（P〈0.01）。经正交t值法肿胀度筛选,TGP、PNS、SN在复方组合中药效突出,其中SN最有意义（P〈0.01）;而TGP和PNS在复方中也具有统计学意义（P〈0.05）。结论 SN、TGP、PNS在5种有效成分组成的复方中发挥主导抗炎效应。

中药成药性本质分析及其与重大新药创制的关系

药物成药性在药物开发中至关重要,是药物研究的源头。中药是多成分药物,由于其存在复杂性,在成药性研究中必然面临更大的挑战。本文主要结合中药多成分的化学物质基础本质,提出了研究中药成药性分析的一些观点和思路方法。

饺子:完美的金字塔食品

中国人自古就有“好吃不过饺子”的说法，可人们也许不会想到，这种被国人视为最高美味的饺子，其实也非常符合现今最为流行、也最被国内外营养学家们推崇的一营养标准。

试论组分中药的药性配伍

中药有效组分配伍是当前开展中药现代化研究的重要模式,通过传统饮片活性组分分离及二次配伍以实现功效最大化。尽管有效组分配伍并不脱离原方的整体效应,但功效物质标准化即组分中药研究存在组分拆分简单而药性拆分困难的问题,因此需要明确组分样品库中各组分与其所属中药的性味离合关系。决定中药宏观药性的物质基础是其包含的微观化学成分,而基于化学信息学和知识发现的药性判别方法存在各自的局限性,真实客观的药性表征体系仍应回归到动态、可持续性定量反映药物与机体的相互作用结果的生物效应模型中去,在此基础上可以选择药少力专、基于药性组合的代表药对继而开展配伍组分的药性配伍规律研究,这对合理设计配伍组分及提高其有效性和安全性具有重大意义。

枳壳中黄酮苷类成分对正常小鼠小肠推进的影响

目的分别考察枳壳水煎液和新橙皮苷、柚皮苷单体单独及配伍给药对正常小鼠小肠推进作用的影响,以找寻枳壳的药效物质基础。方法采用炭末推进法,分别计算给药组和对照组对正常小鼠小肠的炭末推进百分率。结果枳壳水煎液低、中、高剂量组与空白对照组比较均有显著性差异(P<0.01),且促进作用有随着剂量的加大而增强的趋势;柚皮苷、新橙皮苷单独给药各剂量组与空白对照组比较均无显著性差异(P>0.05);新橙皮苷、柚皮苷配伍给药各剂量组与空白对照组比较均有显著性差异(P<0.01)。结论枳壳水煎液对正常小鼠小肠推进有明显促进作用,其所含主要黄酮苷新橙皮苷、柚皮苷单独给药对正常小鼠小肠推进无明显促进作用,两者配伍给药对正常小鼠小肠推进具有明显的促进作用,证明柚皮苷和新橙皮苷是枳壳的药效物质。

治疗艾滋病中药复方制剂研究现状与新思路

国外已经报道的艾滋病"功能性治愈"是在患者感染初期未形成病毒存储库的情况下实现的,尚属个例,治疗艾滋病有效的药物仍然是国内外很多学者研究的主要目标和方向。中医药在艾滋病的防治过程中进行了积极的探索和研究,开发了许多中药复方应用于临床并取得成效,但由于中药复方的特殊性,即物质基础不明、靶点不清等缺陷,中药复方制剂在艾滋病防治研发方面存在公认度不足、与现代技术结合程度不高导致发展缓慢、获准新药率不高的瓶颈。因此,结合近年来国内外报道的治疗艾滋病中药复方研究进展,探讨了在中医理论指导下,应用"有效部位(成分)配伍组方"、"吸收/代谢复方原成分配伍"、"循证药学临床筛方"等新思路研究治疗艾滋病中药复方制剂的可行性和挑战性,为开发治疗艾滋病中药新药提供新思路和尝试。