日本血吸虫未成熟虫卵26-28kDa抗原的分离与纯化

本文采用超凝胶AcA柱层析方法和SDS-PAGE结合凝胶洗脱方法等,分离纯化了日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA)26-28kDa组分.SDS-PAGE、免疫印迹分析(EITB)和银染色等证明,采用该方法分离纯化的26-28kDa抗原纯度高,有较强的免疫活性,并证明该抗原组分在SIEA中含量丰富.纯化的SIEA26-28kDa可作为抗日本血吸虫生殖产卵和抗卵胚发育侯选抗原,用于抗病保护性免疫的研究.

日本血吸虫未成熟虫卵67kDa分子抗原诊断血吸虫病的研究

本文通过SDS－PAGE和电渗方法，从日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原（SIEA）中分离纯化出67kDa蛋白分子，以该分子包被微板进行ELISA，检测了急、慢性日本血吸虫病人血清，其阳性检出率达100％和94．6％，与60例正常人血清、30例肝吸虫和31例肺吸虫病人血清均未出现明显交叉反应，慢性血吸虫病人治疗后3个月、半年和1年的阴转率分别为58．1％，75．4％和84．6％。提示SIEA67kDa分子抗原具有较好的疗效考核价值和现场应用前景。

日本血吸虫未成熟虫卵卵壳的超微结构

应用透射电镜和扫描电镜观察了日本血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａｊａｐｏｎｉｃｕｍ）未成熟虫卵卵壳的超微结构。初产期和胚胎期虫卵卵壳形态结构相似，均有形态多样的微管道贯通卵壳内外，管道内含一些分泌颗粒，管壁由单位膜构成；致密的微棘沿卵壳均匀分布，微棘纵切呈长三角形，横切呈星形，中央有小空腔；卵壳由电子密度低且较厚的外层和电子密度高且较薄的内层构成；卵壳表面有丰富的网样纤维基质。推测卵壳的微管道、微棘和网样纤维基质的形成时期是同步的，皆在雌虫卵模内形成。本文讨论了微管道的结构、功能与意义。

简便快速分离日本血吸虫未成熟虫卵方法的研究

目的探讨一种快速的日本血吸虫卵分离纯化方法,解决虫卵常规分离法存在耗费时间长、纯度不高及结构破坏等问题。方法在前人的工作基础上,对虫卵分离方法进行改进,采用反复过筛、加胰酶消化并结合离心去上清的方法。结果在短时间内获得了纯净的虫卵,所得虫卵结构完整,虫卵得率显著提高。结论该方法适宜于血吸虫卵的快速分离、纯化,为虫卵抗原制备及其抗原分析、鉴定提供了条件。

抗日本血吸虫未成熟虫卵单克隆抗体的制备和鉴定

采用日本血吸虫来成熟卵抗原（SIEA）免疫BALB／c小鼠，制备抗SIEA单克隆抗体。获得一株强阳性、高特异的抗未成熟虫卵的单抗（2B2），免疫球蛋白为IgG1类。免疫印迹分析表明该单抗单一识到日本血吸虫未成熟虫卵抗原中的50kDa分子。免疫荧光染色表明，与雌虫子宫内虫卵呈现强阳性反应，而不与成虫抗原交叉。

不同数量日本血吸虫尾呦感染家兔后未成熟虫卵得量的实验观察

家兔感染日本血吸虫尾蚴后23d雌虫开始产卵,在宿主肝脏组织中,虫卵自产出到发育成熟需要10—11d.按卵胚的发育过程,分为单细胞期、细胞分裂期、器官发生期、毛蚴成熟期4个阶段,通常把前3期虫卵称为未成熟卵.据何毅勋等报道,小鼠感染尾蚴后26—33d每条雌虫平均每天产卵150个,而44d后,每条雌虫平均每天产卵高达2029个.因此,一般认为收集成熟虫卵,每兔感染1500—2000条尾蚴为宜,既可使家兔存活到45d以后,又可以从肝脏中获得最大卵量.但收集30d左右未成熟虫卵,以多少尾蚴感染家兔,才能获得最大卵量,至今未见报道.我们在进行抗卵胚发育免疫原的筛选实验中发现,以感染尾蚴后30d未成熟虫卵作为免疫原可获得抗卵免疫的满意效果(另文报道).因此,对感染尾蚴数量和30d未成熟虫卵得量之间的关系,进行了实验观察,现将结果报告如下.

抗日本血吸虫未成熟虫卵部分纯化抗原免疫血清的制备及定位观察

抗日本血吸虫未成熟虫卵部分纯化抗原免疫血清的制备及定位观察汪世平周汨波曾庆仁赵慰先日本血吸虫卵不同发育时期抗原性存在明显差异。来源于不同发育阶段的虫卵可溶性抗原所诱导的宿主免疫应答明显不同。因此，制备针对未成熟虫卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ）的免疫血清，对...

未成熟日本血吸虫卵的组分蛋白及其免疫学特性的研究

应用SDS－PAGE对日本血吸虫4周、5周和6周－SEA进行分析，分别出现21、14和20条组分蛋白带，三者间既有共同组分又存在差异，显示出不同的分子基础。于攻击感染后0～8周作动态观察，ELIB结果表明，4周－SEA及其免疫鼠血清的免疫学特性与5周－SEA和6周－SEA存在一定差异，其中被4周－SEA免疫鼠血清识别的72．4～68．5ku蛋白宽带至攻击感染后6～8周消失，与该抗原免疫鼠肝内虫卵数减少、虫卵发育延缓及肉芽肿缩小（在6周前）及后来的恢复（8周）基本一致。

日本血吸虫未成熟卵单链抗体库的构建、筛选及初步应用

运用噬菌体展示技术构建日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA)单链抗体(scFv)表达文库,以天然分子候选疫苗SIEA26～28ku为靶抗原筛选SIEA单链抗体库,获得特异性单链抗体.并将该scFv基因亚克隆至原核高效表达载体PET32a,诱导SIEA26～28ku特异性scFv大量表达.随后以此为探针筛选日本血吸虫尾蚴cDNA文库,以期获得SIEA26～28ku天然分子候选疫苗相关的编码基因.结果显示,所获得的SIEA26～28ku特异性scFv,表达量高,采用该探针初步筛选出相关基因核糖体蛋白S4.SIEA26～28ku特异性scFv的获得,为进一步筛选、分析鉴定抗日本血吸虫病天然分子候选疫苗SIEA26～28ku的编码基因奠定了基础.

日本血吸虫未成熟卵免疫血清抗卵胚反应的观察

目的研究日本血吸虫未成熟卵免疫血清在抗卵胚方面的作用。方法采用多途径免疫新西兰家兔的方法,制备日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原的免疫兔血清,通过免疫酶染色定位观察免疫血清与未成熟卵胚的反应。结果证明未成熟卵免疫血清能特异地识别虫卵早期胚胎抗原,与未成熟虫卵卵胚出现较强的免疫反应。结论未成熟虫卵可溶性抗原免疫产生的抗卵胚作用与未成熟虫卵胚胎抗原所诱导的保护性免疫应答有关。

日本血吸虫初产卵体外培养的研究(英文)

目的 观察日本血吸虫未成熟虫卵超免疫血清对虫卵胚胎发育及雌虫生殖力影响的效果。方法 本研究通过体外培养系统 ,观察日本血吸虫成虫离体产卵及虫卵发育全过程中形态学特点的变化 ,检测抗未成熟虫卵超免疫血清对虫卵胚胎发育及雌虫生殖力的影响。结果 在含正常兔血清的培养基中 ,初产卵经 12～ 14天培体外培养后 ,能完成发育至成熟期 ,对照组雌虫每周产卵总数为 176 5 7个 (n =2 0 )。但在含有抗未成熟虫卵超免疫兔血清的培养基中 ,雌虫产卵数量较正常兔血清培养对照组有显著降低 (P <0 0 0 1) ;在培养后第 10天 ,试验组雌虫即停止产卵 ,部分初产卵卵胚的发育和成熟过程被完全阻断 ;免疫荧光染色显示 ,抗卵免疫血清可作用于卵胚细胞及雌虫卵黄腺、肠腔内膜组织。结论 体外培养结果表明 ,日本血吸虫未成熟虫卵抗原诱导的免疫应答 ,在抗虫卵胚胎发育及抗雌虫生殖产卵中起重要作用。

日本血吸虫天然抗原分子的柱层析分离纯化与鉴定

目的分离纯化日本血吸虫成虫(AWA)和未成熟虫卵(SIEA)可溶性抗原中的单一蛋白,为血吸虫病免疫诊断、预防提供新的抗原分子。方法柱层析分离纯化成虫和未成熟虫卵可溶性抗原,SDS-PAGE及银染色进行分析鉴定。结果得到了三种不同大小血吸虫分子抗原AWA18000u,SIEA42000u,SIEA130000u。结论实验证明柱层析法是一种快速分离纯化血吸虫单一组分抗原简单而有效的方法。

抗日本血吸虫病分子疫苗(SIEA28kDa)氨基酸组成的分析

目的采用反向高效液相色谱方法分析SIEA28kDa蛋白分子的氨基酸组成。方法用邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生反相高效液相色谱法测定SIEA28kDa抗原组分样品中氨基酸成分,并在Expasy中数据分析与比较。结果SIEA28kDa分子抗原主要由13种氨基酸组成。其中,甘氨酸在其氨基酸组成中比值最大,在Expasy中根据其氨基酸组成的比值及其一级属性参数比较发现6种Score值较高的血吸虫蛋白质分子,但SIEA28kDa分子与它们均有不同方面的差别。结论SIEA28kDa分子可能不是6种Score值较高的血吸虫蛋白质分子中的任何1种,但与它们在氨基酸组成上具有较高的相似性,而与GST相似性较低。

日本血吸虫SIEA66-68kDa抗原的分离、纯化及免疫保护性研究

目的研究日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原66-68kDa(SIEA66-68kDa)的动物免疫保护力,并对其作为天然分子疫苗的可行性进行评估。方法采用电泳切胶、电洗脱、超滤离心等技术,分离纯化SIEA66-68kDa天然分子抗原,免疫小鼠,待其产生抗体后进行尾蚴攻击感染(40尾/只),计算减虫率和减卵率。结果 SIEA66-68kDa天然蛋白质分子能刺激机体产生抗日本血吸虫的作用,其减虫率为41.70%,每克肝脏减卵率为51.23%,雌虫子宫减卵率为29.30%,每克大肠减卵率为59.26%,每克粪便减卵率为45.17%,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 SIEA66-68kDa天然分子抗原具有刺激小鼠产生较好的抗日本血吸虫感染的免疫保护作用,可作为抗日本血吸虫感染候选分子疫苗的靶标。