CEP55可能是治疗成熟阻滞型非梗阻无精子症的分子靶标

目的应用siRNA技术沉默CEP55基因表达对小鼠精原细胞增殖的影响。方法选取2017年1月1日~12月31日在南方医科大学南方医院妇产科生殖中心就诊的无精子症男性不育症患者,根据其睾丸病理切片诊断分为成熟阻滞组和生精正常组各3名。应用核素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术,发现两组患者的睾丸组织表达差异蛋白质CEP55蛋白。设计并合成CEP55基因特异性的siRNA序列,转染小鼠精原细胞,分为空白对照组、阴性对照组及siRNA转染组,应用Westernblot和qPCR检测在siRNA对CEP55的影响,CCK8实验观察siRNA抑制CEP55后对小鼠精原细胞增殖的影响。结果通过iTRAQ核素标记结合LC/MS/MS分析,共鉴定出差异蛋白共两百多个,CEP55在基因表达水平差异最显著。Western blot结果显示,siRNA转染组CEP55蛋白的相对表达水平明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。qPCR结果显示,siRNA转染组CEP55的mRNA表达量低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。CCK8实验发现siRNA干扰CEP55表达后,小鼠精原细胞生长明显受到抑制(P<0.05)。结论CEP55可能在精子发生过程中起到关键作用,CEP55可能成为治疗成熟阻滞型非梗阻无精子症的分子靶标。

TRIP13基因新突变导致卵母细胞成熟阻滞为特征的女性不孕

卵母细胞成熟阻滞(oocyte maturation arrest,OMA)是指卵母细胞减数分裂过程异常而导致的卵母细胞成熟障碍的一种罕见的临床现象,也是女性原发性不孕的原因之一。这类患者临床上常表现为:反复促排卵后无法获得成熟卵子,并且未成熟卵母细胞经体外培养后仍不能成熟。迄今研究发现PATL2、TUBB8和TRIP13基因突变与OMA有关,但是有关OMA的遗传学分子因素及机制研究仍不完整。本研究通过收集临床上辅助生殖助孕过程中35名反复出现OMA的原发不孕女性患者的外周血,提取其基因组DNA进行全外显子组测序分析,对疑似致病突变进行验证及家系共分离分析,发现先证者1的TRIP13基因9号外显子存在纯合突变c.859A>G,突变导致对应编码的287位的氨基酸由异亮氨酸突变为缬氨酸(p.Ile287Val);先证者2的TRIP13基因1号外显子存在纯合突变c.77A>G,突变导致对应编码的26位的氨基酸由组氨酸突变为精氨酸(p.His26Arg);先证者3的TRIP13基因的4号和12号外显子存在复合杂合突变c.409G>A和c.1150A>G,c.409G>A突变导致对应编码的137位的氨基酸由天冬氨酸突变为天冬酰胺(p.Asp137Asn),c.1150A>G突变导致对应编码的384位的氨基酸由丝氨酸突变为甘氨酸(p.Ser384Gly),三名患者所携带的突变均引起TRIP13基因编码的TRIP13蛋白发生错义突变。其中3个突变位点在国内外尚未有文献报道。此外,通过在HeLa细胞中分别转染四个突变质粒,并进行体外免疫印记实验和细胞增殖实验,发现这些突变会造成不同程度的TRIP13蛋白表达的增加以及细胞增殖速率异常。本文总结了既往研究报道的TRIP13基因突变位点,丰富了TRIP13致病基因突变谱,为进一步研究TRIP13基因导致OMA的致病机制及临床的诊断和治疗提供了依据。

PATL2基因c.1363C>T纯合无义突变致卵母细胞成熟阻滞1例

卵母细胞成熟阻滞是一种极其罕见的原发性不孕症,表现为卵子发育停滞,卵母细胞完全受精失败,受精前后卵母细胞凋亡以及早期胚胎发育停滞等。本案例探讨了1例经2次控制性超促排卵均未获成熟卵母细胞为特征的原发不孕患者的遗传学病因。采集患者外周血进行全外显子组测序,经生物信息学筛选可疑致病突变,并对患者及其父母进行Sanger测序验证。结果显示,患者检测到PATL2基因的纯合无义突变c.1363C>T(p.Gln455*),Sanger测序结果显示其父母均为携带该突变的杂合变异,经HGMD数据库查询c.1363C>T为目前未见报道的罕见致病变异。本案例显示PATL2基因突变可引起卵母细胞成熟阻滞,建议对这类患者尽早进行外显子测序并行遗传咨询,以选择适宜的助孕措施。

血清卵泡刺激素与抑制素B联合检测评估无精子症睾丸生精功能

目的联合检测育龄男性无精子患者血清卵泡刺激素(FSH)和抑制素B(INHB)水平评估睾丸生精功能的临床诊断价值。方法 95例无精子症患者均行血清FSH、INHB检测,根据睾丸活检病理组织学分类,唯支持细胞综合征20例、生精低下25例、成熟阻滞18例和生精功能正常32例。统计分析FSH和INHB的血清水平与病理分类的相关性。结果血清FSH、INHB和INHB/FSH在唯支持细胞综合征组与其他组比较具有显著性差异(P<0.05),生精功能低下组、成熟阻滞组和生精功能正常组比较没有显著性差异(P>0.05);FSH、INHB和INHB/FSH与精细胞成熟阻滞无显著相关性(P>0.05),而在其他组别中均具有显著负相关性(P>0.05);INHB和INHB/FSH在所有研究组别中均具有显著性正相关(P<0.05);血清INHB小于28.55 pg/ml诊断唯支持细胞综合征的敏感度为97%,特异性为85%。结论血清FSH和INHB水平不能有效区分睾丸生精功能状态,但能有效确定唯支持细胞综合征,其他类型的生精功能异常仍需依赖活检病理组织学检查。