花生四烯酸氨基乙醇对人成牙本质细胞样细胞MMP-9表达的影响

目的探讨花生四烯酸氨基乙醇(anandamide,AEA)对人成牙本质细胞(HODs)样细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-9表达的影响。方法体外培养HODs样细胞,免疫荧光进行形态和功能验证,四甲基偶氮唑盐(MTT)法研究AEA对HODs样细胞活性影响,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blotting检测AEA处理后MMP-9基因和蛋白表达水平及AEA的作用受体大麻素受体1,2和TRPV1的表达,并检测MAPK信号通路的调控作用。结果大麻素受体1,2和TRPV1在HODs样细胞中表达,不同浓度AEA和不同处理时间可刺激MMP-9基因和蛋白表达水平提高。抑制大麻素受体1,2和TRPV1后AEA诱导的MMP-9表达水平下降,其中大麻素受体1和TRPV1作用较强。JNK信号通路在AEA对MMP-9的表达调节中起主导作用。结论AEA主要通过大麻素受体1和TRPV1调控HODs样细胞中MMP-9的表达,JNK信号通路是此过程的主要调节通路。

人牙源性间充质细胞向成牙本质细胞的诱导分化

目的:建立人牙源性间充质细胞向成牙本质细胞分化的体外诱导方案。方法:应用bFGF+IGF 1或TGF β1分别对培养早期的人牙源性间充质细胞进行平面定向诱导,观察诱导后细胞的形态学改变,采用免疫荧光染色和RT PCR方法检测成牙本质细胞标志物———DSP蛋白和DSPPmRNA在诱导后细胞中的表达,并通过VonKossa染色检测诱导后细胞的矿化能力。结果:诱导后部分细胞出现单侧较长的细胞突起,表达DSP蛋白和DSPPmRNA,体外连续培养可自发形成矿化结节,出现较典型的成牙本质细胞的形态和功能特征。结论:bFGF+IGF 1或TGF β1可促进牙源性间充质细胞向成牙本质细胞分化。

人牙髓干细胞向成牙本质细胞定向分化过程中miRNAs表达谱筛选及鉴定

目的:筛选人牙髓干细胞向成牙本质细胞定向分化过程中差异表达的microRNAs(miRNAs)并进行初步鉴定。方法:体外分离、培养和鉴定人牙髓干细胞,miRNAs芯片筛选牙髓干细胞向成牙本质细胞分化过程中差异表达的miRNAs,并通过TargetScan数据库预测靶基因,实时定量PCR法对结果进行初步鉴定。结果:人牙髓干细胞vimentin、nestin、GFAP和I型胶原4种细胞表型均表达;成脂诱导3周后细胞内有油红O染色阳性脂滴出现;成牙本质诱导可见钙结节形成;基因芯片结果显示,牙髓干细胞向成牙本质细胞分化过程中,发生2倍以上表达变化的miRNAs有6条,其中上调3条,下调3条。通过miRNA靶标预测工具预测靶基因,发现hsa-miR-633和hsa-miR-210有与牙髓干细胞分化相关的靶基因;real time-PCR验证hsa-miR-633和hsa-miR-210表达变化与基因芯片结果相符。结论:人牙髓干细胞经诱导向成牙本质细胞分化过程中miRNAs表达谱具有显著变化,为牙髓干细胞分化机制研究提供了新的提示。

人成牙本质细胞样细胞的原代培养

目的 :培养人原代成牙本质细胞。方法 :取引产的 8月龄死胎 ,剥离乳磨牙胚牙乳头 ,组织块法培养。然后采用滤纸片法挑取了 3个与成牙本质细胞形态相似的细胞克隆 ,扩大培养。对培养细胞从形态学、矿化结节、碱性磷酸酶 (alkalinephosphatase,ALP)活性、人牙本质基质蛋白 - 1(humandentinmatrixprotein- 1,hDMP - 1)和人牙本质涎磷蛋白 (humandentinsialophosphoprotein ,hDSPP)在mRNA水平上的表达等方面进行鉴定。结果 :有一个克隆来源的细胞呈梭形、有单侧较长细胞突起 ,未见核极化 ,同时它们具矿化功能 ,表达人成牙本质细胞特异性标志hDMP - 1、hDSPPmRNA。结论 :该培养细胞为人成牙本质细胞样细胞 ,为进一步的有关研究奠定了基础。

成人成牙本质细胞原位培养的初步研究

目的:建立成人成牙本质细胞原位培养模型。方法:取20～30岁成人新鲜、健康、完整的第三磨牙30颗,随机分为拔髓实验组、有血清培养组和无血清培养组,每组各10颗。冠根分离,拔髓,将成牙本质细胞保留在牙冠上,进行有血清和无血清的原位培养,每天换液,连续培养7d。通过光镜检测细胞保留情况,扫描电镜检测细胞形态和分布特征,台盼蓝检测细胞活性,对模型进行鉴定。结果:室温拔髓后,成牙本质细胞保留在髓室壁上,在7d的培养过程中细胞有活性,形态保持良好。结论:采用有血清和无血清培养,均可建立成人成牙本质细胞培养模型。

大鼠外胚间充质细胞向成牙本质细胞样细胞定向诱导分化——三维诱导模型的建立

目的 :探讨大鼠面突外胚间充质细胞向成牙本质细胞分化的机制。方法 :以胶原作为支架 ,建立外胚间充质细胞三维培养模型 ,并在培养液中加入 10ng/mlbFGF和 (或 ) 10 0ng/mlIGF 1等生长因子 ,观察和检测细胞表型的变化。结果 :经bFGF和IGF 1诱导 4d后 ,在胶原的周边细胞出现平行排列的具有细长单极突起的成牙本质细胞样细胞 ,通过免疫组化抗DSP抗体染色阳性。而其余组细胞排列较紊乱 ,抗DSP染色阴性。结论 :含有bFGF和IGF 1的三维诱导模型可诱导大鼠外胚间充质细胞向成牙本质细胞样细胞分化 。

永生化人成牙本质细胞样细胞系体外矿化的初步观察

目的 :探讨永生化人成牙本质细胞样细胞系hTERT -hOd -l的体外矿化特征。方法 :在矿化液连续培养细胞 5周 ,采用倒置显微镜、透射电镜进行组织学观察以及VonKossa染色。结果 :细胞在矿化液中生长良好 ,形成细胞结节 ,分泌细胞外基质 ,其中有平行排列的胶原纤维和针状晶体沉积。VonKossa染色显示细胞结节已发生矿化。结论 :hTERT -hOd -l细胞在体外培养条件下具有矿化能力。

L型钙离子通道α_1亚基D亚型在发育小鼠磨牙牙胚成牙本质细胞中的表达

目的 :研究成牙本质细胞分化不同阶段L型钙离子通道α1亚基D亚型的分布情况。方法 :采用兔抗小鼠L型钙离子通道α1D亚基多克隆抗体进行牙胚免疫组织化学染色。结果 :在前成牙本质细胞胞体、功能性成牙本质细胞的近矿化端以及成熟成牙本质细胞的胞体和突起上均发现有L型钙离子通道α1亚基D亚型分布。结论

过量氟对大鼠牙髓成牙本质细胞显微和亚显微结构的影响

目的:观察过量氟作用下大鼠牙髓成牙本质细胞显微、亚显微结构的改变。方法:选择30只Wister大鼠,随机分为两组,每组15只。Ⅰ组为对照组,蒸馏水灌胃。Ⅱ组为实验组,20 mg/(kg.d)氟化钠水灌胃。8周后处死动物,利用磨片、HE染色、透射电镜技术观察过量氟对大鼠切牙形态、成牙本质细胞显微和亚显微结构的影响。结果:实验组切牙牙釉质牙本质厚度明显变薄,髓腔内侧前期牙本质宽于对照组,球间牙本质增多。釉质生长线、釉柱横纹明显,牙本质生长线明显。透射电镜观察实验组大鼠牙髓成牙本质细胞体积较小,细胞器减少,一些细胞呈现凋亡迹象。结论:过量的氟作用下大鼠牙髓成牙本质细胞分化和分泌基质都受一定程度的阻遏,成牙本质细胞细胞器减少,细胞凋亡。

转化生长因子β信号转导与成牙本质细胞分化

转化生长因子 β在牙胚发育 ,成牙本质细胞分化和牙髓损伤修复过程中均发挥着重要的作用 ,本文就TGF - β近年来的研究进展 ,尤其是TGF - β—Smad信号途径与成牙本质细胞分化机制的相互关系作一综述。

转化生长因子β1对体外成牙本质细胞分化的影响

目的 :观察转化生长因子 β1(transforminggrowthfactorβ1,TGF - β1)对体外培养的鼠牙乳头成牙本质细胞分化的影响。方法 :取 17d胎龄小鼠下颌第一磨牙牙胚 ,胰蛋白酶消化分离牙乳头 ,置半固态培养基培养 6d ,半固态培养基中加入重组转化生长因子 β1和肝素。组织学观察。 结果 :TGF - β1加肝素可诱导牙乳头周边细胞发生极化 ,并分泌胞外基质。单独加入TGF - β1未见细胞极化 ,但基质分泌增加。 结论 :TGF -

纳米羟基磷灰石和氢氧化钙对成牙本质细胞活性影响的比较

背景:将纳米羟基磷灰石与成牙本质细胞共同培养能更直观反映羟基磷灰石作为齿科盖髓材料的细胞相容性,但体外培养成牙本质细胞较困难。目的:观察纳米羟基磷灰石和氢氧化钙对小鼠成牙本质细胞的活性的影响。方法:取胎鼠下颌第一磨牙牙胚,采用组织块培养法对小鼠牙乳头细胞进行原代培养,倒置显微镜下挑选具有成牙本质样细胞形态的细胞观察细胞形态及生长情况。采用RT-PCR法对细胞牙本质涎磷蛋白的表达进行鉴定,确定为成牙本质样细胞。取对数生长期的第4代成牙本质样细胞,分别用含有100mg/L纳米羟磷灰石和100mg/L氢氧化钙的培养基培养1,3,5,7天,并设置空白对照组。结果与结论:CCK-8法检测结果显示,培养1,3,5,7d,纳米羟基磷灰石组的细胞生长良好。培养3,5,7d,氢氧化钙组细胞活性低于空白对照组(P<0.01)。碱性磷酸酶测定法检测结果显示,羟基磷灰石和氢氧化钙均对碱性磷酸酶活性无明显影响。结果证实,纳米羟基磷灰石对成牙本质细胞活性无影响,氢氧化钙对其细胞活性有抑制作用。

低浓度β-甘油磷酸钠培养牙髓干细胞向成牙本质细胞分化及相关因子的表达

背景:以往研究用来诱导成牙本质细胞分化的培养基普遍借鉴成骨细胞的诱导浓度,其他浓度的诱导情况尚无相关研究。目的:观察在低浓度β-甘油磷酸钠条件培养下,牙髓干细胞向成牙本质细胞分化过程中,牙本质基质蛋白1、牙本质涎蛋白和细胞外基质磷酸糖蛋白的表达情况。方法:分离培养人牙髓干细胞,用不同浓度的诱导液诱导牙髓干细胞分别向脂肪细胞,成骨细胞分化,证实其多向分化能力。用5 mmol/Lβ-甘油磷酸钠诱导培养牙髓干细胞向牙本质细胞分化,分别在培养第7,14,21,28天提取各组细胞RNA,反转录PCR检测牙本质基质蛋白1、牙本质涎蛋白和细胞外基质磷酸糖蛋白的表达情况;诱导牙髓干细胞向成牙本质细胞分化形成的矿化结节用Alizarin Red S法检测。结果与结论:人牙髓干细胞经过诱导可证实其成功分化为脂肪细胞和成骨细胞;反转录PCR结果显示,5 mmol/Lβ-甘油磷酸钠培养牙髓干细胞在培养7,14,21 d,各组细胞牙本质基质蛋白1、牙本质涎蛋白的mR NA表达增加,伴随细胞外基质磷酸糖蛋白表达下调;培养至28 d,行矿化结节检测发现牙髓干细胞向成牙本质细胞成功矿化,可见红染的矿化结节。结果证实,5 mmol/Lβ-甘油磷酸钠诱导培养的牙髓干细胞可成功分化为成牙本质细胞,并下调细胞外基质磷酸糖蛋白mR NA的表达,同时上调牙本质基质蛋白1及牙本质涎蛋白mR NA的表达。

成牙本质细胞中上游刺激因子1表达的原位杂交研究

目的检测、证实成牙本质细胞中上游刺激因子1(USF1)mRNA的表达。方法用前期制备的T—USF1质粒作模板,借助特异性引物PCR扩增USF1cDNA片段,回收、随机引物法地高辛标记;培养成牙本质细胞MDPC-23,制备细胞爬片,原位杂交方法检测。结果成牙本质细胞胞浆中有较强的蓝紫色颗粒。结论首次证实体外培养的成牙本质细胞中有USF1mRNA表达,为深入研究USF1分子对成牙本质细胞生长、分化和矿化影响提供了实验依据。

成牙本质细胞分化的分子机制

成牙本质细胞的分化是一个由多种分子参与调控的复杂过程 ,涉及到生长因子、受体分子、信号分子、转录因子、牙本质基质蛋白等分子的信号转导网络。

c-Myc激活人成牙本质细胞样细胞端粒酶的实验研究

目的 :明确在人成牙本质细胞样细胞内c -Myc可否调控端粒酶活性。 方法 :将c -Myc基因转染至原代人成牙本质细胞样细胞样细胞 ,G418筛选后检测细胞内c -Myc和端粒酶逆转录酶 (telomerasereversetranscrip tase ,TERT)的表达以及端粒酶活性。结果 :c -Myc稳定整和入细胞并表达蛋白 ,该转染细胞在mRNA和蛋白质水平上TERT的表达上调 ,端粒酶活性转为阳性。结论 :在人成牙本质细胞样细胞样细胞内 ,外源性c -Myc基因可以通过上调TERT的表达水平而激活端粒酶 ,为建立永生化人成牙本质细胞样细胞系奠定了基础。

转化生长因子β1(TGF-β1)和骨形成蛋白2(BMP2)体外联合诱导成牙本质细胞样细胞分化

目的:观察转化生长因子β1(transform ing growth factorβ1,TGF-β1)和骨形成蛋白2(bone morphogeneticprote in 2,BMP2)联合应用对体外培养的鼠牙乳头成牙本质细胞分化的影响。方法:取17 d胎龄小鼠下颌第一磨牙牙胚,胰蛋白酶消化分离牙乳头,置半固态培养基培养6 d,半固态培养基中单独加入重组TGFβ1、BMP2,或分别与肝素联合,或TGFβ1和BMP2联合,组织学观察牙乳头的形态学变化。结果:TGF-β1或BMP2单独加入时未见细胞极化,但基质分泌增加。TGF-β1或BMP2加肝素可诱导牙乳头周边细胞发生极化,并分泌胞外基质。半固态培养基中同时加入TGF-β1和BMP2的牙乳头培养6 d后,牙乳头周边细胞出现极化和功能性分化,牙乳头周边胞外基质沉积明显,且可见牙乳头尖形态的维持及从牙乳头尖至牙乳头基底部成牙本质细胞分化梯度的维持。结论:本研究结果证实,在没有内釉上皮和完整的基底膜存在的情况下,TGF-β1和BMP2加肝素可诱导培养的牙乳头出现成牙本质细胞分化,并促进胞外基质的分泌。TGF-β1和BMP2均能诱导成牙本质细胞的细胞学分化和分泌功能,二者联合应用可协同发挥作用增强诱导效果。

健康牙齿和龋齿成牙本质细胞中MMP-2和MMP-9的活性

目的比较健康牙齿和龋齿成牙本质细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的活性,以探讨MMP-2和MMP-9在龋病发病机制中的作用。方法培养健康牙齿和龋齿成牙本质细胞,利用酶谱分析细胞培养上清中MMP-2和MMP-9的活性。结果龋齿组中MMP-2和MMP-9的活性显著高于健康组。结论MMP-2和MMP-9在健康牙齿和龋齿成牙本质细胞中的活性不同,提示MMPs可能在龋病的进展过程中发挥作用。

永生化人成牙本质细胞样细胞系的转化特征

目的:明确永生化人成牙本质细胞样细胞系hTERT -hOd- l是否具有转化特征。方法:复苏已建立的永生化人成牙本质细胞样细胞系hTERT- hOd -l,从致瘤性、血清依赖性、悬浮生长能力和接触抑制性等方面观察细胞的转化特征。结果:细胞无裸鼠致瘤性,在软琼脂内不能生长,血清依赖性无显著降低,仍具有接触抑制性。结论:hTERT- hOd- l基本上为正常细胞而无明显转化特征。

hTERT激活人成牙本质细胞端粒酶的实验研究

目的 :明确外源性人端粒酶逆转录酶 (humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)能否调控人成牙本质细胞的端粒酶活性。方法 :培养人成牙本质细胞样细胞 ,采用脂质体转染法 ,将编码hTERT基因的真核表达质粒pCIneo -hTERT导入目的细胞。培养液加G418筛选 ,稳定后检测hTERT在mRNA和蛋白水平的表达以及端粒酶活性。结果 :转染后细胞表达hTERTmRNA及其蛋白 ,同时端粒酶活性转为阳性。结论 :在人成牙本质细胞样细胞内 ,外源性hTERT可以激活端粒酶 ,为建立永生化细胞系奠定了基础。