成牙本质细胞系MDPC-23的生物学特性

目的 :观察成牙本质细胞系MDPC - 2 3的生物学特性。方法 :细胞培养 ,细胞计数和逆转录多聚酶链反应。结果 :MDPC - 2 3为上皮样细胞形态 ,有多个细胞膜突起 ,易形成细胞结节 ,细胞倍增时间少于 2 4h。在mRNA水平证实MDPC - 2 3表达Ⅰ型原胶原a2、碱性磷酸酶和牙本质涎磷蛋白。结论 :MDPC - 2

脂多糖诱导成牙本质细胞凋亡模型的建立与评价

目的：建立并评价脂多糖（LPS）诱导的成牙本质细胞（OB）凋亡模型。方法：采用梯度LPS（0、0．1、1、10、100tzg／mL）刺激法诱导小鼠OB细胞系MDPC-23细胞凋亡；分别于诱导后24、48、72、96h各时间点，以MTT法检测细胞增殖活力，流式细胞术检测细胞凋亡比例，确定合适的诱导浓度和时间后，建立OB细胞凋亡模型，并通过Hoechst染色观察细胞形态和凋亡比例。结果：0．1μg／mL和1μg／mL的LPS作用24h可明显促进MDPC-23细胞增殖，72h后则明显抑制细胞增殖（P〈0．05）；当LPS浓度大于1μg／mL时，对细胞的影响以毒性作用为主。在各个时间点不同浓度的LPS均可诱导MDPC-23细胞凋亡，其中以0．1μg／mL的LPS诱导MDPC-23细胞凋亡的效果较理想。Hoechst染色显示0．1μg／mL LPS可诱导细胞出现典型的凋亡形态学特征，且随着LPS作用时间的延长，凋亡细胞比例逐渐增高（P〈0．05），但96h时有大量细胞死亡。结论：LPS诱导MDPC-23细胞凋亡的合适浓度为0．1μg／mL，合适作用时间为24—72h。

人成牙本质细胞L型钙离子通道α_1亚基D亚型特异性基因的克隆

目的:克隆人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型的特异性基因。方法:采用RT-PCR方法,从人成牙本质样细胞系中克隆人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基的特异性基因片段,将其亚克隆入pUC18载体进行序列测定。结果:从人成牙本质样细胞系中获得900bp的特异性片段。序列分析表明,与Gen-Bank登陆的人L型钙离子通道α1亚基D亚型的特异性基因序列完全一致。结论:成功地从人成牙本质样细胞系中克隆到人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型的特异性基因序列。

TGF-β1对MDPC-23细胞增殖和细胞周期的影响

目的 :研究转化生长因子 β1(transforminggrowthfactor- β1,TGF - β1)对成牙本质细胞系MDPC - 2 3增殖和细胞周期的影响。方法 :细胞培养 ,MTT比色测定法和流式细胞仪 (flowcytometry ,FCM)分析技术。结果 :TGF - β1能明显抑制MDPC - 2 3细胞增殖 ,无剂量依赖性 ,但呈时间依赖性 ;FCM结果显示 ,TGF - β1作用后 ,MDPC - 2 3细胞G1%升高 ,而S %显著降低 ,反映细胞增殖活性的增殖指数PrI值 (S +G2 M) %增高。结论 :TGF - β1抑制成牙本质细胞系MDPC - 2

尼古丁对成牙本质细胞凋亡影响的实验研究

目的：探讨尼古丁刺激对小鼠成牙本质细胞凋亡的影响。方法：将培养的小鼠成牙本质样细胞系MDPC-23分为4组：0、1、10、100μg/m L不同浓度尼古丁处理组,分别进行Hoechst 33258染色观察细胞形态变化,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3以及p-JNK等的表达。另设尼古丁和JNK抑制剂SP600125共同作用组,检测Caspase-3表达。结果：0~100μg/m L范围内,随着尼古丁浓度增加,细胞形态逐渐出现凋亡变化,Bcl-2表达下调和Bax、Caspase-3表达上调等趋势均逐渐明显;尼古丁单独作用下p-JNK表达增强,并呈现一定时间依赖性和浓度依赖性;尼古丁和SP600125共同作用下,Caspase-3表达明显降低。结论：尼古丁对小鼠成牙本质细胞有毒性作用,一定程度上可促进细胞的凋亡。

肿瘤坏死因子受体相关分子6在成牙本质细胞中表达的研究

目的 :研究肿瘤坏死因子受体相关分子 6(TRAF6)是否在成牙本质细胞中表达。方法 :通过westernblot、免疫组化染色研究TRAF6蛋白在成牙本质样细胞系MDPC 2 3中的表达。结果 :Westernblot结果显示MD PC 2 3细胞总蛋白中有大小约 60Kda的TRAF6蛋白条带 ;免疫组化法表明TRAF6在MDPC 2 3细胞浆呈阳性表达。结论 :本实验从蛋白水平证实了成牙本质样细胞MDPC 2 3表达TRAF6。